| 1 |
1
다음의 단계를 포함하는 외막단백질과 외부항원을 융합발현할 수 있는 재조합 G(-) 박테리아의 제조방법:
(a) 외막소체(OMV) 생성능이 있고, pagP 유전자를 보유하는 에스케리치아 종 (Escherichia spp
|
| 2 |
2
삭제
|
| 3 |
3
제1항에 있어서, 상기 재조합 G(-) 박테리아는 리피드 (lipid) A의 구조를 변화시키는 (lipid A structural modification)데 관여하는 lpxXL, lpxF 및 lpxE로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자가 추가로 도입시키는 것을 특징으로 하는 재조합 G(-) 박테리아의 제조방법
|
| 4 |
4
제1항에 있어서, 외막소체의 크기와 생성량을 증가시키기 위하여 (a) 단계에서 제작된 G(-) 박테리아 변이주에서 degP 유전자를 추가로 결실시키는 것을 특징으로 하는 재조합 G(-) 박테리아의 제조방법
|
| 5 |
5
제1항에 있어서, 상기 외부항원을 도입하는 데 이용되는 상기 외막단백질은 외막에서 발현이 풍부한 단백질인 OmpA, OmpC, OmpF, OmpX, OmpG, OmpT 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 재조합 G(-) 박테리아의 제조방법
|
| 6 |
6
제1항에 있어서, 상기 유전자 재조합체는 외부항원이 외막단백질의 외부(extracellular loop) 또는 내부인 페리플라즘(periplasm)에 결합되어 발현되는 것을 특징으로 하는 재조합 G(-) 박테리아의 제조방법
|
| 7 |
7
제1항에 있어서, 상기 외부항원은 (a) 인간 또는 동물에서 다양한 감염성 질병을 일으키는 바이러스 또는 병원성 미생물의 주요 단백질 항원성분, (b) 면역세포 또는 암세포에 발현하는 특이적인 세포표면 마커 및 (c) 면역세포 또는 암세포의 표면에 존재하는 특정 리셉터에 결합하는 리간드 (ligand)로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 재조합 G(-) 박테리아의 제조방법
|
| 8 |
8
삭제
|
| 9 |
9
제1항에 있어서, 상기 에스케리치아 종 (Escherichia spp
|
| 10 |
10
제1항의 방법에 의해 제조되며, 외막소체(OMV) 생성능이 있고, pagP 유전자를 보유하는 에스케리치아 종 (Escherichia spp
|
| 11 |
11
제10항에 있어서, 상기 재조합 G(-) 박테리아는 리피드 (lipid) A의 구조를 변화시키는 (lipid A structural modification)데 관여하는 lpxXL, lpxF 및 lpxE로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자가 추가로 도입되어 있는 것을 특징으로 하는 재조합 G(-) 박테리아
|
| 12 |
12
제10항에 있어서, 상기 재조합 G(-) 박테리아는 외막소체의 크기와 생성량을 증가시키기 위하여 degP 유전자가 추가로 결실되어 있는 것을 특징으로 하는 재조합 G(-) 박테리아
|
| 13 |
13
외부항원이 G(-) 박테리아의 외막단백질과 융합된 형태로 발현되는 제10항의 재조합 G(-) 박테리아를 배양하여 상기 외부항원이 결합된 외막소체(OMV)를 생성분비시킨 다음 회수하는 것을 특징으로 하는 외부항원이 결합된 재조합 외막소체(OMV)의 제조방법
|
| 14 |
14
다음의 단계를 포함하는 그 내부공간에 외부항원으로 작용하는 합성 펩티드(synthetic peptide) 또는 상기 합성 펩티드를 코딩하는 DNA 단편이 삽입되어 있는 재조합 외막소체(OMV)의 제조방법:
(a) 외막소체(OMV) 생성능이 있고, pagP 유전자를 보유하는 에스케리치아 종 (Escherichia spp
|
| 15 |
15
삭제
|
| 16 |
16
제14항에 있어서, 상기 (a) 단계는 리피드 (lipid) A의 구조를 변화시키는 (lipid A structural modification)데 관여하는 lpxXL, lpxF 및 lpxE로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자를 추가로 도입시키는 것을 특징으로 하는 그 내부공간에 외부항원으로 작용하는 합성 펩티드(synthetic peptide) 또는 상기 합성 펩티드를 코딩하는 DNA 단편이 삽입되어 있는 재조합 외막소체(OMV)의 제조방법
|
| 17 |
17
제14항에 있어서, 외막소체의 크기와 생성량을 증가시키기 위하여 (a) 단계에서 제작된 G(-) 박테리아 변이주에서 degP 유전자를 추가로 결실시키는 것을 특징으로 하는 그 내부공간에 외부항원으로 작용하는 합성 펩티드(synthetic peptide) 또는 상기 합성 펩티드를 코딩하는 DNA 단편이 삽입되어 있는 재조합 외막소체(OMV)의 제조방법
|
| 18 |
18
삭제
|
| 19 |
19
제13항 또는 제14항의 방법에 의해 제조된 재조합 외막소체의 내부공간(lumen)에 면역증진 효과를 나타내는 애쥬반트(ajuvants)를 삽입하는 것을 특징으로 하는 재조합 외막소체(OMV)의 재구성 방법
|
| 20 |
20
제13항 또는 제14항의 방법에 의해 제조된 재조합 외막소체에 내포된 리포폴리사카라이드(LPS)의 KDO(3-deoxy-D-manno-oct-2-ulosonic acid) 성분에 (a) 단백질 또는 탄수화물로 구성된 항원성 물질 또는 (b) 형광물질(fluorescent dye)을 화학적 커플링시키는 것을 특징으로 하는 재조합 외막소체(OMV)의 재구성 방법
|
| 21 |
21
제20항에 있어서, 상기 단백질 또는 탄수화물로 구성된 항원성 물질은 말라리아 메로조이트(malaria merozoite) 표면단백질 (MSP), 인간 파필로마바이러스 발암 단백질(E6 또는 E7), 종양-관련 뮤신 글리코펩타이드(tumor-associated mucin glycopeptide, MUC1), 혈액형 관련 탄수화물 항원 Lewisy (Ley) 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 재조합 외막소체(OMV)의 재구성 방법
|
| 22 |
22
제20항에 있어서, 상기 형광물질은 플루오레세인(Fluorescein), 로다민(Rhodamine), 텍사스 레드(Texas Red), Cy3, Cy5
|
