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다음 단계를 포함하는, 희소 미생물 또는 신규 미생물의 단일 세포 유래 게놈 라이브러리의 제조방법:
(a) 물, 토양, 공기, 식품, 폐기물, 동식물 장내 및 동식물 조직 중 어느 하나 이상에서 채취된 시료의 미생물군 커뮤니티 분석을 수행하는 단계;
(b) 상기 커뮤니티 분석에서 우점종 또는 공지의 미생물로 확인된 미생물을 표지하는 단계;
(c) 상기 표지된 미생물을 1차 FACS (Fluorescence Associated Cell Sorter) 기법을 이용하여 제거하는 단계;
(d) 상기 표지된 미생물이 제거된 미생물군 전체를 표지한 다음, 2차 FACS 기법을 이용하여 상기 미생물군 전체를 단일 세포로 분리하는 단계;
(e) 상기 분리된 단일세포의 게놈을 다중분리증폭법 (multiple displacement amplification, MDA)를 이용하여 증폭하는 단계; 및
(f) 상기 증폭된 단일세포의 게놈을 유전자 라이브러리로 제조하는 단계
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제1항에 있어서, 상기 미생물군의 커뮤니티 분석은 ARISA (amplified riosomal intergenic spacer analysis), T-RFLP (Terminal restriction fragment length polymorphism), DGGE (Denaturing gradient gel electrophoresis), TGGE (Temperature Gradient Gel Electrophoresis), ARDRA (Amplified Ribosomal DNA Restriction Analysis) 및 DNA 마이크로어레이 중 어느 하나 이상의 방법에 의하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 미생물군의 커뮤니티 분석은 16S rDNA를 증폭하여 제작한 라이브러리 클론을 시퀀싱하여 분석하는 방법으로 수행되는 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 (b)단계의 표지는 FISH (Fluoresence In Situ Hygridization) 기법에 의해 수행되는 것을 특징으로 하는 방법
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제5항에 있어서, 상기 (b)단계의 표지는 우점종 또는 공지의 미생물로 확인된 미생물의 16S rDNA를 타겟으로 하는 프로브를 이용하는 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 (d) 단계는 표지된 미생물이 제거된 미생물군의 커뮤니티를 재분석하여 우점종 또는 공지의 미생물이 확인되는 경우 표지하여 제거하는 단계를 추가로 반복하여 수행한 다음, 남은 미생물군 전체에 대하여 표지하여 2차 FACS 기법을 이용하여 단일세포로 분리하는 단계를 수행하는 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 (f)단계에서 증폭된 게놈의 16S rRNA를 공지 미생물의 16S rRNA와 대비하여 신규한 미생물로 확인된 게놈만을 라이브러리로 제조하는 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 (f)단계에서 증폭된 게놈을 분석하여 단일세포로부터 유래된 것으로 확인된 게놈만을 라이브러리로 제조하는 것을 특징으로 하는 방법
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다음 단계를 포함하는, 희소 미생물 또는 신규 미생물의 단일 세포 유래 게놈 라이브러리를 이용한 신규 활성효소 또는 이를 코딩하는 유전자의 스크리닝 방법:
(a) 수집된 시료의 미생물군 커뮤니티 분석을 수행하는 단계;
(b) 상기 커뮤니티 분석에서 우점종 또는 공지의 미생물로 확인된 미생물을 표지하는 단계;
(c) 상기 표지된 미생물을 1차 FACS (Fluorescence Associated Cell Sorter) 기법을 이용하여 제거하는 단계;
(d) 상기 표지된 미생물이 제거된 미생물군 전체를 표지한 다음, 2차 FACS 기법을 이용하여 상기 미생물군 전체를 단일 세포로 분리하는 단계;
(e) 상기 분리된 단일세포의 게놈을 다중분리증폭법 (multiple displacement amplification, MDA)를 이용하여 증폭하는 단계;
(f) 상기 증폭된 단일세포의 게놈을 유전자 라이브러리로 제조하는 단계;
(g) 상기 제조된 게놈 라이브러리에 타겟 효소 기질을 처리하여 기질반응이 나타난 클론을 선별하는 단계; 및
(h) 상기 선별된 클론으로부터 타겟 효소 또는 이를 코딩하는 유전자를 수득하는 단계
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다음 단계를 포함하는, 미생물 다양성이 증가된 메타게노믹(metagenomic) 라이브러리의 제조방법:
(a) 수집된 환경 시료의 미생물군 커뮤니티 분석을 수행하는 단계;
(b) 상기 커뮤니티 분석에서 우점종 또는 공지의 미생물로 확인된 미생물을 표지하는 단계;
(c) 상기 표지된 미생물을 FACS (Fluorescence Associated Cell Sorter) 기법을 이용하여 제거하는 단계; 및
(d) 상기 표지된 미생물이 제거된 미생물군으로부터 DNA를 분리하고 증폭하여 메타게노믹 라이브러리를 제조하는 단계
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