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재조합 단백질의 과발현을 위한 번역속도 조절용 램프 태그 및 이용

  • 기술번호 : KST2015177084
  • 담당센터 : 광주기술혁신센터
  • 전화번호 : 062-360-4654
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 대장균(E.coli)에서 재조합 단백질을 발현시킬 때, 외래 유전자 내의 코돈(codon)과 숙주의 호환성이 좋지 않아 발생하는 번역속도의 불안정성을 해결할 수 있는 램프 태그(ramp tag)에 관한 것이다. 본 발명은 희귀 코돈(rare codon)의 문제를 해결하는 기존의 코돈 최적화(codon optimization) 또는 코돈 탈최적화(codon deoptimization) 방법과 달리 원래의 코돈 서열을 바꾸지 않고 단지 램프 태그를 목적 유전자와 융합하거나 독립적으로 발현하도록 하여 tRNA를 재사용하게 함으로써 목적 단백질의 발현 효율을 증가시킨다. 따라서 본 발명은 DNA 서열을 인공으로 합성하는 코돈 최적화 방법에 비해 비용과 시간을 절감할 수 있는, 재조합 단백질 발현을 증가시키는 새로운 방법으로 부가가치가 높은 의약품이나 산업용 효소의 생산에 이용될 수 있을 것으로 기대된다.
Int. CL C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01)
CPC C12Q 1/6816(2013.01) C12Q 1/6816(2013.01) C12Q 1/6816(2013.01)
출원번호/일자 1020130027549 (2013.03.14)
출원인 전남대학교산학협력단
등록번호/일자 10-1446054-0000 (2014.09.24)
공개번호/일자 10-2014-0112888 (2014.09.24) 문서열기
공고번호/일자 (20141001) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2013.03.14)
심사청구항수 24

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 전남대학교산학협력단 대한민국 광주광역시 북구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김근중 대한민국 광주광역시 북구
2 박원지 대한민국 광주광역시 북구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 김종관 대한민국 대전광역시 서구 한밭대로 ***번지 (둔산동, 사학연금회관) **층(특허법인 플러스)
2 박창희 대한민국 대전광역시 서구 한밭대로 ***번지 (둔산동, 사학연금회관) **층(특허법인 플러스)
3 권오식 대한민국 대전광역시 서구 한밭대로 ***번지 (둔산동, 사학연금회관) **층(특허법인 플러스)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 전남대학교산학협력단 광주광역시 북구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2013.03.14 수리 (Accepted) 1-1-2013-0223688-41
2 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.01.02 수리 (Accepted) 4-1-2014-0000058-61
3 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2014.02.06 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
4 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2014.03.10 수리 (Accepted) 9-1-2014-0018951-90
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2014.03.27 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2014-0216065-34
6 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2014.04.29 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2014-0408633-14
7 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2014.04.29 수리 (Accepted) 1-1-2014-0408650-91
8 등록결정서
Decision to grant		 2014.09.19 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2014-0638462-33
9 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2015.06.08 수리 (Accepted) 4-1-2015-5076218-57
10 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2016.07.07 수리 (Accepted) 4-1-2016-5093177-51
11 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2018.03.30 수리 (Accepted) 4-1-2018-5056463-72
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
숙주세포에 따른 희귀 코돈표(rare codon table)를 작성하는 단계; 목적 유전자의 DNA 서열을 코돈으로 변환하는 단계; 상기 작성된 희귀 코돈표 내의 희귀 코돈이 목적 유전자 ORF(open reading frame)에 출현하는 빈도와 위치를 분석하는 단계; 및 희귀 코돈을 수집하여 배치하는 단계를 포함하는 번역속도 조절용 램프 태그(ramp tag)의 제조방법
2 2
제1항에 있어서, 상기 희귀코돈의 수집은 코돈의 빈도수와 이소수용체(isoacceptor) tRNA 유전자 수를 분석하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 램프태그의 제조방법
3 3
제2항에 있어서, 코돈의 빈도수는 0
4 4
제1항에 있어서, 상기 희귀코돈의 배치는 ORF에서 출현하는 순서로 배치되는 것을 특징으로 하는 램프태그의 제조방법
5 5
제1항에 있어서, 숙주세포는 대장균, 효모, 차이니스 햄스터 난소세포(chinese hamster ovary cell, Cho cell) 및 인간세포(human cell line)로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 램프 태그의 제조방법
6 6
제5항에 있어서, 숙주세포는 대장균(E
7 7
제1항에 있어서, 램프 태그(ramp tag)는 1-20개의 코돈으로 구성된 것을 특징으로 하는 램프 태그의 제조방법
8 8
제1항에 있어서, 목적 유전자는 발현이 어려운 단백질을 코딩하는 유전자인 것을 특징으로 하는 램프 태그의 제조방법
9 9
제8항에 있어서, 유전자는 에스테라제(esterase), 베타-글루코시다제(β-glucosidase), 사이토리신A(Cytolysin A, ClyA), 재조합항체(single chain Fv, scFv), 아스파라기나제B(asparaginaseB), 테트라-세포접합분자(T-CAM) 또는 B3(Fv)PE38 를 코딩하는 것을 특징으로 하는 램프 태그의 제조방법
10 10
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 제조방법으로 제조된 번역속도 조절용 램프 태그(ramp tag)
11 11
제10항에 있어서, 램프 태그는 서열번호 1 내지 서열번호 7 및 서열번호 9 내지 서열번호 11로 이루어진 군으로부터 선택된 램프 태그
12 12
숙주세포에서 발현이 어려운 단백질의 발현 효율을 증가시키는 방법에 있어서, 숙주세포에서 희귀 코돈(rare codon)을 수집하는 단계; 목적 유전자에 대한 램프 태그(ramp tag)를 구성하는 단계; 램프 태그와 목적 유전자를 포함하는 발현 벡터를 제조하는 단계; 숙주세포를 발현 벡터로 형질전환 시키는 단계; 단백질을 발현시키기는 배양 배지에서 형질전환된 숙주세포를 배양하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질의 발현 효율을 증가시키는 방법
13 13
제12항에 있어서, 상기 희귀코돈의 수집은 코돈의 빈도수와 이소수용체(isoacceptor) tRNA 유전자 수를 분석하는 이루어지는 것을 특징으로 하는 단백질의 발현 효율을 증가시키는 방법
14 14
제13항에 있어서, 코돈의 빈도수는 0
15 15
제12항에 있어서, 상기 램프 태그(ramp tag) 구성은 희귀코돈이 목적유전자에서 출현하는 순서로 이루어지는 것을 특징으로 하는 단백질의 발현 효율을 증가시키는 방법
16 16
제12항에 있어서, 숙주세포는 대장균(E
17 17
제16항에 있어서, 숙주세포는 대장균(E
18 18
제12항에 있어서, 램프 태그(ramp tag)는 1-20개의 코돈으로 구성된 것을 특징으로 하는 단백질의 발현 효율을 증가시키는 방법
19 19
제12항에 있어서, 목적 유전자는 발현이 어려운 단백질을 코딩하는 유전자인 것을 특징으로 하는 단백질의 발현 효율을 증가시키는 방법
20 20
제19항에 있어서, 유전자는 에스테라제(esterase), 베타-글루코시다제(β-glucosidase), 사이토리신A(Cytolysin A, ClyA), 재조합항체(single chain Fv, scFv),아스파라기나제B(asparaginaseB), 테트라-세포접합분자(T-CAM) 또는 B3(Fv)PE38 를 코딩하는 것을 특징으로 하는 단백질의 발현 효율을 증가시키는 방법
21 21
제12항에 있어서, 램프 태그는 목적 유전자의 5'-말단 또는 3'-말단에 융합되거나, 목적 유전자의 내부에 도입되거나, 또는 독립적으로 번역되도록 위치하는 것을 특징으로 하는 단백질의 발현 효율을 증가시키는 방법
22 22
제12항에 있어서, 램프 태그는 추가적으로 다른 태그 또는 융합 단백질과 함께 사용되는 것을 특징으로 하는 단백질의 발현 효율을 증가시키는 방법
23 23
제22항에 있어서, 다른 태그는 His tag, T7 tag, S-tag, Flag-tag, HA-tag, V5 epitope, PelB 및 Xpress epitope로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 단백질의 발현 효율을 증가시키는 방법
24 24
제22항에 있어서, 융합 단백질은 GST, MBP, NusA, CBP, GFP, Thioredoxin, Mistic, Sumo 및 DSB로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 방법
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순번 패밀리번호 국가코드 국가명 종류
1 CN105143464 CN 중국 FAMILY
2 US10227595 US 미국 FAMILY
3 US20160017341 US 미국 FAMILY
4 WO2014142453 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY

DOCDB 패밀리 정보

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순번 패밀리번호 국가코드 국가명 종류
1 CN105143464 CN 중국 DOCDBFAMILY
2 CN105143464 CN 중국 DOCDBFAMILY
3 US10227595 US 미국 DOCDBFAMILY
4 US2016017341 US 미국 DOCDBFAMILY
5 WO2014142453 WO 세계지적재산권기구(WIPO) DOCDBFAMILY
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 교육과학기술부 전남대학교 글로벌 프론티어 연구 사업 인공 유전자회로 구축 및 제어기술 개발