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(a) 종피가 제거된 억새 성숙 종자를 살균하는 단계;(b) 상기 살균한 억새 종자를 캘러스 유도 배지에 치상하여 억새 배발생능 캘러스를 유도하는 단계;(c) 선발 마커 및 외래 유전자가 삽입된 식물 발현 벡터를 포함하는 아그로박테리움 튜머파시엔스 (Agrobacterium tumefaciens)와 상기 유도된 억새 배발생능 캘러스를 접종배지에서 접종 후, 공동배양 배지에서 공동배양하여 형질전환시키는 단계;(d) 상기 공동배양한 식물세포를 항생제 또는 제초제가 첨가된 선발 배지에서 선발하는 단계; 및(e) 상기 선발된 억새 세포를 재분화 배지에서 재분화하는 단계를 포함하는 형질전환 억새 식물체의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 (a)단계의 억새 성숙 종자의 살균은 0
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제1항에 있어서, 상기 (b)단계의 캘러스 유도 배지는 10~30 mM 프롤린이 첨가된 MS 배지인 것을 특징으로 하는 형질전환 억새 식물체의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 (b)단계의 배발생능 캘러스 유도는 2~4 mg/L 2,4-D 호르몬이 첨가된 pH 5
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제1항에 있어서, 상기 (c)단계의 접종 및 공동배양은 300~500μM AS (acetosyringone)가 첨가된 pH 5
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제1항에 있어서, 상기 (d)단계의 선발 배지 및 (e)단계의 재분화 배지는 10~30 mM 프롤린이 첨가된 MS 배지인 것을 특징으로 하는 형질전환 억새 식물체의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 (c)단계의 선발 마커는 하이그로마이신 저항성 유전자 (hyg) 또는 제초제 저항성 유전자 bar (phosphinothricin acetyltransferase)인 것을 특징으로 하는 형질전환 억새 식물체의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 (d)단계의 항생제는 하이그로마이신이고, 제초제는 포스피노트리신 (phosphinothricin)인 것을 특징으로 하는 형질전환 억새 식물체의 제조 방법
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제8항에 있어서, 상기 하이그로마이신의 농도는 40~60mg/L이고, 포스피노트리신의 농도는 4~6mg/L인 것을 특징으로 하는 형질전환 억새 식물체의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 (e)단계의 재분화는 신초 유도 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 형질전환 억새 식물체의 제조 방법
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제10항에 있어서, 상기 (e)단계의 신초 유도는 20~40mg/L 하이그로마이신을 첨가하거나 또는 2~4mg/L 포스피노트리신을 첨가한 신초 유도 배지에서 수행되는 것을 특징으로 하는 형질전환 억새 식물체의 제조 방법
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12
(a) 종피가 제거된 억새 성숙 종자를 0
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13
(a) 종피가 제거된 억새 성숙 종자를 0
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14
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 형질전환 억새 식물체
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제14항에 따른 형질전환 억새 식물체의 종자
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16
(a) 종피가 제거된 억새 성숙 종자를 살균하는 단계;(b) 상기 살균한 억새 종자를 캘러스 유도 배지에 치상하여 억새 배발생능 캘러스를 유도하는 단계;(c) 제초제 저항성 유전자 bar (phosphinothricin acetyltransferase) 및 외래 유전자가 삽입된 식물 발현 벡터를 포함하는 아그로박테리움 튜머파시엔스 (Agrobacterium tumefaciens)와 상기 유도된 억새 배발생능 캘러스를 접종배지에서 접종 후, 공동배양 배지에서 공동배양하여 형질전환시키는 단계;(d) 상기 공동배양한 식물세포를 포스피노트리신이 첨가된 선발 배지에서 선발하는 단계; 및(e) 상기 선발된 억새 세포를 재분화 배지에서 재분화하는 단계를 포함하는 제초제 저항성 형질전환 억새 식물체의 제조 방법
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17
제16항의 방법에 의해 제조된 제초제 저항성 형질전환 억새 식물체
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제17항에 따른 제초제 저항성 형질전환 억새 식물체의 종자
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