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PCR용 프라이머, 10배 농도 PCR 완충용액, dNTP(dATP,dCTP,dTTP 및 dGTP) 및 내열성 중합효소를 포함하는 B형 간염 바이러스 DNA 검출 키트에 있어서, (가)1차 PCR용 프라이머는 BSO1(5'-GACAAGAATCCTCACAATACC-3') 및 BSO2(5'-ACCACATCATCCATATAACTGAAAG-3'), 및 (나)2차 PCR용 프라이머는 BSI1(5'-ACCTCCAATCACTCACCAACC-3) 및 BSI2(5'-AGGATGATGGGATGGGAATA-3'), 및 (다)10배 농도 PCR 완충용액은 200내지 500mM의 트리스/HCl, pH8
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(가) 혈청을 끓인 후 증류수로 희석하고 원심분리하여 상층액을 얻고, (나) 상기 상층액을 이용하여 1창 중합효소 연쇄 반응(PCR)을 수행하고, (다) 상기 PCR 산물중 일부를 이용하여 2창 PCR을 수행하여 혈청중에 존재하는 B형 간염 바이러스의 DNA를 증폭한후, (라) 상기 증폭된 DNA를 확인함을 포함하는, 혈청내 B형 간염 바이러스 DNA 검출 방법
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제2항에 있어서, 상기 (가)단계에서 혈청을 94℃에서 4분 동안 끓이는 것을 특징으로하는 검출방법
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제2항에 있어서, 1차 및 2차 PCR을 모세관 온도 순환기(capillary thermal cycler)를 이용하여 수행하는 것을 특징으로하는 검출방법
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제2항에 있어서, 상기(b)단계의 1창 PCR반응액이 상기(a)단계의 상층액, 제1항의 1차 PCR용 프라이머 BSO1 및 BSP2 및 10배 농도 PCR 완충액, 및 각 dNTR(dGTP,dATP,dTTP,dCTP) 및 Taq DNA 중합효소를 포함하는 것을 특징으로 하는 검출방법
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제5항에 있어서, 상기 (나)단계의 1차 PCR반응액의 총부피가 10㎕로서 상기 (가)단계의 상층액1㎕, 프라이머 BSO1 및 BSO2 각 1μM, 10배 농도 PCR 완충액 1㎕를 포함하며, dNTP의 농도가 50μM이고 0
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제2항에 있어서, 상기 (나)단계의 1차 PCR 반응을 95℃, 5초; 55℃, 10초; 및 72℃, 15초의 PCR사이클을 30회 실시하는 것을 특징으로 하는 검출 방법
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제2항에 있어서, 상기 (다)단계의 2차 PCR반응액이 상기 (나)단계의 반응산물 일부, 제1항의 프라이머 BSI1 및 BSI2 및 10배 농도 PCR 완충액, 및 각 dNTP 및 Tap DNA 중합효소를 포함하는 것을 특징으로 하는 검출방법
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제8항에 있어서, 상기 (다)단계의 2차 PCR반응액의 총 부피가 10㎕로서 상기(나)단계의 반응산물 1㎕, 프라이머 BSI1 및 BSI2 각 1μM, 10배 농도 PCR 완충액 1㎕를 포함하며, dNTP의 농도가 50μM이고 0
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제1항에 있어서, 상기 (다)의 10배 농도 PCR 완충 용액이 500mM 트리스/HCl, pH8
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제2항에 있어서, 상기 (다)단계의 2차 PCR 반응을 1차와 동일한 조건으로 30회 실시하는 것을 특징으로 하는 검출 방법
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