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(a) 임신견에서 주사기로 양수를 채취하는 단계;
(b) 채취한 양수를 원심분리하여 펠렛(pellet)을 회수하는 단계;
(c) bFGF(basic Fibroblast Growth Factor) 및 EGF(Epidermal Growth Factor) 함유 배지에서 배양하여 배양세포를 수집하는 단계; 및
(d) 상기 수집한 세포로부터 개 양수 유래 줄기세포를 분리 및 정제하는 단계;를 포함하여 이루어지는 개 양수 유래 중간엽 줄기세포의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (d) 단계에 앞서, 수집한 배양세포를 PBS(Phosphate Buffered Saline)로 세정하여, bFGF 및 EGF 함유 배지의 배양접시 바닥에 세포부착을 유도하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법
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제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 배지는 L-DMEM((low-glucose Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지에 0
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제1항의 방법에 의하여 제조되고, 다음과 같은 특성을 가지는 중간엽 줄기세포:
(a) CD34에 대하여 음성 면역학적 특성을 나타내고, 동시에 CD44, CD29, CD90에 대하여 모두 양성 면역학적 특성을 나타냄;
(b) 배양접시 바닥에 부착하여 성장하며, 콜로니를 형성하며, 섬유아세포(fibroblast) 모양의 형태학적 특성을 나타냄;
(c) Nanog, Oct4, Sox2, 및 SSEA-4 유전자를 발현함;
(d) SRY 유전자 검사에서 성별검사가 가능함; 및
(e) 내배엽, 외배엽 및 중배엽 유래 세포로 분화하는 능력을 가짐
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제4항에 있어서, 상기 중배엽 유래 세포는 골아세포, 연골세포 또는 지방세포인 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포
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제4항의 중간엽 줄기세포를 FBS, 페니실린/스트렙토마이신, IBMX (3-isobutyl-1-methylxanthine), 덱사메타손(dexamethasone), 인도메타신(indometacinum), 및 인슐린(insuline)이 포함된 L-DMEM 배지; 또는 FBS, 페니실린/스트렙토마이신, IBMX, 덱사메타손, 인도메타신, 인슐린, EGF 및 bFGF이 포함된 L-DMEM 배지에 배양하여 지방세포로 분화시키는 방법
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FBS, IBMX, 덱사메타손, 인도메타신, 및 인슐린을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포의 지방세포로의 분화 조절 조성물
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FBS, IBMX, 덱사메타손, 인도메타신, 인슐린, EGF 및 bFGF를 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포의 지방세포로의 분화조절 조성물
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제4항의 중간엽 줄기세포를 FBS, 페니실린/스트렙토마이신, 덱사메타손, β-인산글리세롤(β-glycerophosphate), 및 아스코르빅 2-인산(ascorbate-2-phosphate)이 포함된 L-DMEM 배지에 배양하여 골아세포로 분화시키는 방법
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덱사메타손, β-인산글리세롤, 및 아스코르빅 2-인산을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포의 골아세포로의 분화 조절 조성물
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다음의 단계를 포함하는 중간엽 줄기세포를 연골세포로 분화시키는 방법:
(a) 제4항의 중간엽 줄기세포를 FBS, 페니실린/스트렙토마이신, TGF-β1(Transforming Growth Factor-β Type 1 Receptor), 인슐린, 아스코르빅 2-인산이 포함된 L-DMEM 배지에 배양하여 연골세포로 분화시키는 단계; 및
(b) 상기 분화된 연골세포를 페니실린/스트렙토마이신, TGF-β1, 덱사메타손, 아스코르빅 2-인산, 피루브산나트륨(sodium pyruvate), ITS, 프롤린이 포함된 L-DMEM 배지에 배양하여 분화된 연골세포를 유지시키는 단계
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TGF-β1, 인슐린 및 아스코르빅 2-인산을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포의 연골세포로의 분화 조절 조성물
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제4항의 중간엽 줄기세포 또는 제7항의 방법에 의해 분화된 지방세포를 유효성분으로 함유하는 세포치료제
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제4항의 중간엽 줄기세포 또는 제10항의 방법에 의해 분화된 골아세포를 유효성분으로 함유하는 근골격계 질환 치료용 세포치료제
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제4항의 중간엽 줄기세포 또는 제12항의 방법에 의해 분화된 연골세포를 유효성분으로 함유하는 연골계 질환 치료용 세포치료제
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제4항의 중간엽 줄기세포를 유효성분으로 함유하는 개의 난치성 질환 치료용 세포치료제
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