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재조합 메탄올 자화 효모를 이용한 제랄레논단일사슬항체의 제조방법

  • 기술번호 : KST2015183184
  • 담당센터 : 경기기술혁신센터
  • 전화번호 : 031-8006-1570
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 재조합 메탄올 자화 효모(recombinant methylotrophic yeast)로부터 곰팡이독소의 일종인 제랄레논(zearalenone)에 대한 단일사슬항체를 생산하는 방법에 관한 것으로, 제랄레논 항체 Fv 부분의 cDNA 또는 효모선호코돈으로 염기서열이 최적화된 제랄레논 단일사슬항체 유전자를 PCR로 증폭하고 알코올 옥시다아제(alcohol oxidase, AOX) 프로모터를 포함하는 발현벡터에 클로닝한 후 효모(Pichia pastoris)를 형질전환하고 메탄올로 발현을 유도하여 제랄레논 단일사슬항체가 배지로 분비되도록 함으로써 발현율, 용해성 및 항원 친화력이 우수한 안정된 항체를 효율적으로 생산하는 방법에 관한 것이다.메탄올 자화 효모, 피키아속, 제랄레논, 단일사슬항체, 효모선호코돈, 분비성 단백질
Int. CL C12P 21/08 (2006.01)
CPC C12N 15/815(2013.01) C12N 15/815(2013.01) C12N 15/815(2013.01)
출원번호/일자 1020070098279 (2007.09.28)
출원인 한국식품연구원
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2009-0032784 (2009.04.01) 문서열기
공고번호/일자
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 거절
심사진행상태 수리
심판사항
구분
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2007.09.28)
심사청구항수 7

출원인

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1 한국식품연구원 대한민국 전라북도 완주군

발명자

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1 장현주 대한민국 서울 송파구
2 전향숙 대한민국 서울 서초구
3 최성욱 대한민국 경기 수원시 장안구

대리인

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1 특허법인 웰 대한민국 서울특별시 서초구 방배로**길*, *~*층(방배동)

최종권리자

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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2007.09.28 수리 (Accepted) 1-1-2007-0702338-37
2 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2007.10.22 수리 (Accepted) 4-1-2007-5159529-44
3 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2008.01.03 수리 (Accepted) 4-1-2008-5001157-93
4 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2008.03.11 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
5 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2008.04.14 수리 (Accepted) 9-1-2008-0019486-31
6 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2009.04.29 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2009-0181967-29
7 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2009.06.25 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2009-0387056-80
8 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2009.06.25 수리 (Accepted) 1-1-2009-0387051-52
9 거절결정서
Decision to Refuse a Patent		 2009.10.28 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2009-0442347-32
10 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2010.10.06 수리 (Accepted) 4-1-2010-5184087-34
11 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.02.13 수리 (Accepted) 4-1-2014-0008534-79
12 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2017.09.25 수리 (Accepted) 4-1-2017-5155082-90
13 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.07.08 수리 (Accepted) 4-1-2019-5135028-45
14 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.09.02 수리 (Accepted) 4-1-2019-5176835-79
15 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.02.11 수리 (Accepted) 4-1-2020-5030341-61
16 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.06.04 수리 (Accepted) 4-1-2020-5124131-17
17 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.09.08 수리 (Accepted) 4-1-2020-5203003-57
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
제랄레논에 대한 단일사슬항체 유전자를 다단계 PCR법을 이용하여 증폭시키는 단계와;상기 증폭된 제랄레논에 대한 단일사슬항체 유전자를 발현벡터에 클로닝하고 그 여부를 확인하는 단계와; 상기 클로닝된 발현벡터를 메탄올 자화 효모에 형질전환한 후 선별하는 단계와; 상기 선별된 재조합 효모에서 제랄레논에 대한 단일사슬항체를 발현시키는 단계;로 구성된 것을 특징으로 하는 재조합 메탄올 자화 효모를 이용한 제랄레논에 대한 단일사슬항체 제조방법
2 2
청구항 1에 있어서, 상기 제랄레논에 대한 단일사슬항체 유전자는 제랄레논 항체 Fv 부분의 cDNA 또는 효모선호코돈을 이용하여 염기서열을 최적화한 것임을 특징으로 하는 재조합 메탄올 자화 효모를 이용한 제랄레논에 대한 단일사슬항체 제조방법
3 3
청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, 상기 발현벡터는 AOX 프로모터와 ampicillin 및 kanamycin 저항성 유전자를 지니며 분비 신호 펩타이드 유전자를 지닌 pPIC9K인 것을 특징으로 하는 재조합 메탄올 자화 효모를 이용한 제랄레논에 대한 단일사슬항체 제조방법
4 4
청구항 3에 있어서, 상기 발현벡터의 클로닝 여부 확인은 전기천공법에 의해 발현벡터로 대장균을 형질전환시킨 후, LB-kanamycin plate을 통해 선별된 형질전환 대장균으로부터 분리한 plasmid를 제한효소(EcoRI과 NotI)로 절단하여 제랄레논에 대한 단일사슬항체 유전자가 발현벡터 내에 제대로 cloning이 되었는지를 확인한 것으로 이루어짐을 특징으로 하는 재조합 메탄올 자화 효모를 이용한 제랄레논에 대한 단일사슬항체 제조방법
5 5
청구항 4에 있어서, 상기 메탄올 자화 효모에 형질전환은 클로닝된 발현 벡터를 제한효소(Pme I)로 절단하여 agarose gel상에서 추출한 후, 상기 추출물의 DNA를 전기천공법으로 메탄올 자화효모에 도입하는 것으로 이루어짐을 특징으로 하는 재조합 메탄올 자화 효모를 이용한 제랄레논에 대한 단일사슬항체 제조방법
6 6
청구항 5에 있어서, 상기 메탄올 자화효모는 피키아 패스토리스(Pichia pastoris GS115)인 것을 특징으로 하는 재조합 메탄올 자화 효모를 이용한 제랄레논에 대한 단일사슬항체 제조방법
7 7
청구항 6에 있어서, 상기 형질전환된 효모의 선별은 히스티틴 요구성에 따라 1차 선별한 후, 상기 선별된 형질전환 효모를 다시 MD plate와 MM plate에 점적하여 메탄올 이용성이 빠른 형질전환 효모(Mut+)와 느린 형질전환 효모(Muts)로 2차 선별하는 것으로 이루어짐을 특징으로 하는 재조합 메탄올 자화 효모를 이용한 제랄레논에 대한 단일사슬항체 제조방법
8 8
청구항 7에 있어서, 상기 형질전환된 효모에 제랄레논에 대한 단일사슬항체를 발현은 먼저 효모를 배지에서 30℃ shaking incubator를 사용하여 48시간 동안 배양한 다음, 원심분리하고 효모를 회수하여 다시 BMMY 배지에 분산시킨 후 매 24시간 마다 메탄올을 첨가하여 발현을 유도시키는 것으로 이루어짐을 특징으로 하는 재조합 메탄올 자화 효모를 이용한 제랄레논에 대한 단일사슬항체 제조방법
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