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다음의 단계를 포함하는 Rac 또는 Cdc42 (Cell Division Cycle 42) 단백질과 PBD (p21 binding domain)사이의 결합을 저해하는 물질의 스크리닝 방법:
(1) (a) 플레이트(plate) 상에 고정화된 PBD에, 후보 물질(candidate substance)와 함께 Rac-GTP 또는 Cdc42-GTP를 접촉시킨 후, 상기 PBD에 결합된 Rac-GTP 또는 Cdc42-GTP의 양을 측정하는 단계;
(b) 플레이트상에 고정화된 PBD에, 후보물질의 부존재하에 Rac-GTP 또는 Cdc42-GTP를 접촉시킨 후, 상기 PBD에 결합된 Rac-GTP 또는 Cdc42-GTP의 양을 측정하는 단계; 및
(2) 상기 단계 (1)의 (a)에서 측정된 PBD에 결합된 Rac 또는 Cdc42 단백질의 양이 상기 단계 (1)의 (b)에서 측정된 PBD에 결합된 Rac 또는 Cdc42 단백질의 양보다 적은 경우 상기 후보물질을 Rac 또는 Cdc42 단백질과 PBD 사이의 결합을 저해하는 물질로 결정하는 단계
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제 1 항에 있어서, 상기 PBD 는 서열목록 제 1 서열의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 Rac 단백질은 서열목록 제 2 서열의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 Cdc42 단백질은 서열목록 제 3 서열의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법
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제 1 항에 있어서, 상기 Rac 단백질, Cdc42 단백질 또는 PBD는 추가의 펩타이드 또는 폴리펩타이드와 융합된 융합 단백질 형태인 것을 특징으로 하는 방법
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제 3 항에 있어서, 상기 Rac 단백질, Cdc42 단백질 또는 PBD에 융합되는 추가의 펩타이드 또는 폴리펩타이드는 글루타티온 S-트랜스퍼라제 (Glutathione S-transferase, GST), 6× His (hexahistidine), 티오레독신 (Thioredoxin), 말토스 결합 단백질 (Maltose binding protein), FLAG (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Lys), 또는 NusA (N utilization substance A) 인 것을 특징으로 하는 방법
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제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PBD에 결합된 Rac-GTP 또는 Cdc42-GTP 단백질 양의 측정은 Rac, Cdc42, Rac 또는 Cdc42에 융합된 펩타이드 또는 폴리펩타이드에 대한 일차 항체(primary antibody)를 사용하여 행하는 것을 특징으로 하는 방법
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제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PBD에 결합된 Rac-GTP 또는 Cdc42-GTP의 양의 측정은 Rac, Cdc42, Rac 또는 Cdc42에 융합된 펩타이드 또는 폴리펩타이드에 대한 일차 항체 및 상기 일차 항체에 대한 이차 항체(secondary antibody)를 사용하여 행하는 것을 특징으로 하는 방법
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제 5 항에 있어서, 상기 일차 항체는 방사능 동위원소(radioisotope), 효소(enzyme) 또는 형광 물질(fluorescent substance)로 표지(label)된 것을 특징으로 하는 방법
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제 6 항에 있어서, 상기 이차 항체는 방사능 동위원소(radioisotope), 효소(enzyme) 또는 형광 물질(fluorescent substance)로 표지(label)된 것을 특징으로 하는 방법
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