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1
4-hydroxybutyryl CoA를 4-hydroxybutyraldehyde로 전환을 촉매하는 활성을 갖는 부틸알데히드 디히드로게나제(butyraldehyde dehydrogenase, bld) 또는 bld 변이체
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2
청구항 1에 있어서, 상기 bld는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 것인 bld
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3
청구항 1에 있어서, 상기 bld 변이체는 서열번호 1에서 409번째 Asn, 361번째 Arg, 467번째 Ala, 371번째 Met, 176번째 Ala, 273번째 Leu 및 279번째 Lys으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 것인 bld 변이체
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4
청구항 3에 있어서, 상기 bld 변이체는 서열번호 1에서 409번째 Asn이 Thr로 치환되고, 361번째 Arg이 Ser으로 치환되고, 467번째 Ala이 Ser으로 치환된 것인 bld 변이체
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5
청구항 3에 있어서, 상기 bld 변이체는 서열번호 1에서 361번째 Arg이 Ser으로 치환되고, 467번째 Ala이 Ser으로 치환된 것인 bld 변이체
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| 6 |
6
청구항 3에 있어서, 상기 bld 변이체는 서열번호 1에서 371번째 Met이 Arg으로 치환되고, 361번째 Arg이 Ser으로 치환되고, 467번째 Ala이 Ser으로 치환된 것인 bld 변이체
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7
청구항 3에 있어서, 상기 bld 변이체는 서열번호 1에서 176번째 Ala이 Thr로 치환되고, 273번째 Leu이 Ile으로 치환되고, 279번째 Lys이 Arg으로 치환되고, 361번째 Arg이 Ser으로 치환되고, 467번째 Ala이 Ser으로 치환된 것인 bld 변이체
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8
청구항 3에 있어서, 상기 bld 변이체는 서열번호 1에서 176번째 Ala이 Thr로 치환된 것인 bld 변이체
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9
청구항 3에 있어서, 상기 bld 변이체는 서열번호 1에서 273번째 Leu이 Ile으로 치환된 것인 bld 변이체
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10
청구항 3에 있어서, 상기 bld 변이체는 서열번호 1에서 279번째 Lys이 Arg으로 치환된 것인 bld 변이체
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11
청구항 3에 있어서, 상기 bld 변이체는 서열번호 1에서 361번째 Arg이 Ser으로 치환된 것인 bld 변이체
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12
청구항 3에 있어서, 상기 bld 변이체는 서열번호 1에서 467번째 Ala이 Ser으로 치환된 것인 bld 변이체
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13
청구항 3에 있어서, 상기 bld 변이체는 서열번호 1에서 409번째 Asn이 Thr로 치환된 것인 bld 변이체
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14
청구항 3에 있어서, 상기 bld 변이체는 서열번호 1에서 361번째 Arg이 Ser으로 치환된 것인 bld 변이체
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15
청구항 1에 있어서, 상기 변이체의 활성 부위(catalytic site)가 서열번호 1에서, 43번째에 위치한 Thr, 144번째에 위치한 Asn, 241번째에 위치한 Ala, 242번째에 위치한 Gly, 243번째에 위치한 Ala, 244번째에 위치한 Gly, 246번째에 위치한 Pro, 273번째에 위치한 Leu, 274번째에 위치한 Pro, 276번째에 위치한 Ile, 277번째에 위치한 Ala, 279번째에 위치한 Lys, 368번째에 위치한 Glu, 398번째에 위치한 His, 432번째에 위치한 Val 및 441번째에 위치한 Thr으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 것인 bld 변이체
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16
청구항 15에 있어서, 상기 변이체의 활성 부위는 43번째에 위치한 Thr이 Asp, 144번째에 위치한 Asn이 Asp, 241번째에 위치한 Ala이 Val, 242번째에 위치한 Gly이 Ser, 243번째에 위치한 Ala이 Gly, 244번째에 위치한 Gly이 Ser, 246번째에 위치한 Pro이 Tyr, 273번째에 위치한 Leu이 Ile, 274번째에 위치한 Pro이 Tyr, 276번째에 위치한 Ile이 Leu, 277번째에 위치한 Ala이 Val, 279번째에 위치한 Lys이 Arg, 368번째에 위치한 Glu이 Gln, 398번째에 위치한 His이 Lys, 432번째에 위치한 Val이 Leu 및 441번째에 위치한 Thr이 Asp으로 치환된 것인 bld 변이체
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17
청구항 1에 있어서, 상기 변이체는 서열번호 1에서 91번째에 위치한 Met, 139번째에 위치한 Ile, 140번째에 위치한 Thr, 141번째에 위치한 Pro, 142번째에 위치한 Ser, 143번째에 위치한 Thr, 166번째에 위치한 Asn, 167번째에 위치한 Gly, 168번째에 위치한 His, 169번째에 위치한 Pro, 170번째에 위치한 Gly, 201번째에 위치한 Asn, 202번째에 위치한 Pro, 203번째에 위치한 Thr, 204번째에 위치한 Met, 207번째에 위치한 Leu, 208번째에 위치한 Asp, 210번째에 위치한 Ile, 211번째에 위치한 Ile, 212번째에 위치한 Lys, 222번째에 위치한 Thr, 223번째에 위치한 Gly, 224번째에 위치한 Gly, 225번째에 위치한 Pro, 227번째에 위치한 Met, 230번째에 위치한 Thr, 231번째에 위치한 Leu, 241번째에 위치한 Ala, 242번째에 위치한 Gly, 243번째에 위치한 Ala, 244번째에 위치한 Gly, 273번째에 위치한 Leu, 274번째에 위치한 Pro, 275번째에 위치한 Cys, 326번째에 위치한 Ser, 327번째에 위치한 Ile, 328번째에 위치한 Asn, 329번째에 위치한 Lys, 332번째에 위치한 Val, 367번째에 위치한 Thr, 368번째에 위치한 Glu, 369번째에 위치한 Leu, 370번째에 위치한 Met 및 396번째에 위치한 Arg으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 것인 bld 변이체
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18
청구항 1에 있어서, 상기 변이체는 서열번호 1에서 91번째에 위치한 Met이 Asp, 139번째에 위치한 Ile이 Leu, 140번째에 위치한 Thr이 Lys, 141번째에 위치한 Pro이 Tyr, 142번째에 위치한 Ser이 Gly, 143번째에 위치한 Thr이 Lys, 166번째에 위치한 Asn이 Asp, 167번째에 위치한 Gly이 Ser, 168번째에 위치한 His이 Lys, 169번째에 위치한 Pro이 Tyr, 170번째에 위치한 Gly이 Ser, 201번째에 위치한 Asn이 Asp, 202번째에 위치한 Pro이 Tyr, 203번째에 위치한 Thr이 Lys, 204번째에 위치한 Met이 Asp, 207번째에 위치한 Leu이 Ile, 208번째에 위치한 Asp이 Asn, 210번째에 위치한 Ile이 Leu, 211번째에 위치한 Ile이 Leu, 212번째에 위치한 Lys, 222번째에 위치한 Thr이 Lys, 223번째에 위치한 Gly이 Ser, 224번째에 위치한 Gly이 Ser, 225번째에 위치한 Pro이 His, 227번째에 위치한 Met이 Lys, 230번째에 위치한 Thr이 Lys, 231번째에 위치한 Leu이 Val, 241번째에 위치한 Ala이 Val, 242번째에 위치한 Gly이 Ser, 243번째에 위치한 Ala이 Val, 244번째에 위치한 Gly이 Ser, 273번째에 위치한 Leu이 Ile, 274번째에 위치한 Pro이 His, 275번째에 위치한 Cys이 Met, 326번째에 위치한 Ser이 Gly, 327번째에 위치한 Ile이 Leu, 328번째에 위치한 Asn이 Asp, 329번째에 위치한 Lys, 332번째에 위치한 Val이 Leu, 367번째에 위치한 Thr이 Lys, 368번째에 위치한 Glu이 Gln, 369번째에 위치한 Leu이 Leu, 370번째에 위치한 Met이 Lys 및 396번째에 위치한 Arg이 Lys으로 치환된 것인 bld 변이체
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19
청구항 1에 있어서, 상기 bld 변이체는 서열번호 2의 서열의 폴리펩티드인 것인 재조합 bld
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청구항 1 내지 19 중 어느 하나의 bld 또는 bld 변이체를 코딩하는 부틸알데히드 디히드로게나제 유전자
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청구항 20에 있어서, 상기 BLD를 코딩하는 유전자는 Clostridium saccharoperbutylacetonicum에서 유래한 것인 유전자
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청구항 20의 유전자가 도입된 1,4-BDO를 생산할 수 있는 미생물
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23
청구항 22에 있어서, 상기 미생물은 4-hydroxybutyraldehyde를 1,4-butanediol로 전환을 촉매하는 활성을 갖는 부탄올 디히드로게나제(butanol dehydrogenase, bdh) 유전자가 더 도입된 것인 미생물
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24
청구항 23에 있어서, 상기 bdh 유전자는 clostridium sacchroperbutylacetonicum 유래의 것인 미생물
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25
청구항 23에 있어서, 상기 균주는 추가적으로 succinate를 succinyl CoA로 전환하는 활성을 가진 cat1을 코딩하는 유전자, succinyl CoA를 succinic semialdehyde로 전환하는 활성을 가진 sucD 을 코딩하는 유전자, succinic semialdehyde를 4-hydroxybutyrate로 전환하는 활성을 가진 4hbd을 코딩하는 유전자 및 4-hydroxybutyrate를 4-hydroxybutyl CoA로 전환하는 활성을 가진 cat2 을 코딩하는 유전자를 포함하는 것인 미생물
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26
청구항 22 내지 청구항 25 증 어느 하나에 있어서, 상기 미생물은 E
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4-hydroxybutyryl CoA와 bld 또는 bld 변이체를 접촉하는 단계를 포함하는 4-hydroxybutyaldehyde를 생산하는 방법
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28
청구항 27에 있어서, 상기 bld 또는 bld 변이체는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 것인 방법
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29
4-hydroxybutyaldehyde와 Bdh를 접촉하는 단계를 포함하는 1,4-butanediol을 생산하는 방법
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30
4-hydroxybutyryl CoA와 bld 또는 bld 변이체를 접촉하는 단계; 및상기에서 수득된 반응물에 Bdh를 접촉하는 단계를 포함하는 1,4-butanediol을 생산하는 방법
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31
bld 또는 bld 변이체, bdh를 미생물에 도입하여 미생물을 제공하는 단계;상기 미생물을 배양하는 단계; 및상기 미생물을 1,4-BDO 분리 단계를 포함하는 1,4-BDO를 생산하는 방법
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32
청구항 31 있어서, 상기 미생물을 제공하는 단계에 있어서, succinate를 succinyl CoA로 전환하는 활성을 가진 cat1을 코딩하는 유전자, succinyl CoA를 succinic semialdehyde로 전환하는 활성을 가진 sucD 을 코딩하는 유전자, succinic semialdehyde를 4-hydroxybutyrate로 전환하는 활성을 가진 4hbd을 코딩하는 유전자 및 4-hydroxybutyrate를 4-hydroxybutyl CoA로 전환하는 활성을 가진 cat2 을 코딩하는 유전자가 더 도입된 것인 1,4-BDO를 생산하는 방법
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33
bld 또는 bld 변이체를 미생물에 도입하여 미생물을 제공하는 단계;상기 배양물에 schiff’s reagent를 접촉시키는 단계; 및흡광도를 측정하여 1,4-BDO 생산량을 확인방법
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34
청구항 33에 있어서, 상기 1,4-BDO의 생산량 확인은 4-hydroxybutyraldehyde 생산량을 측정을 통하여 이루어지는 것인 방법
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