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자가저해 펩타이드(inhibitory peptide)인 p53 펩타이드(서열번호 1)와 자가저해 단백질 결합 도메인(inhibitory protein binding domain)인 MDM2(Mouse double minute 2 homolog)(서열번호 2)가 링커(linker)로 연결된 자가저해 단백질; 및 정제 및 검출용 태그(tag);를 포함하며, 상기 링커는 프로테아제(protease)에 의해 분해(cleavage)되는 아미노산 서열이 삽입되어 있고, p53 펩타이드의 N 말단과 MDM2의 C 말단을 연결하는 것인, 자가저해 단백질 구축물(autoinhibitory protein construct)
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제 1항에 있어서, 상기 링커 내에 삽입되는 프로테아제에 의해 분해(cleavage)되는 아미노산 서열은 MMP(Matrix metalloproteinases)에 의해 분해되는 아미노산 서열(서열번호 5 내지 11), 카스파제(caspase)에 의해 분해되는 아미노산 서열(서열번호 12 내지 21), 및 카텝신(Cathepsin B, E, K, L, S)에 의해 분해되는 아미노산 서열(서열번호 22 내지 26)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 자가 저해 단백질 구축물
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제 1항에 있어서, 상기 정제 및 검출용 태그는 His-태그, Flag-태그, HA-태그, GST-태그 및 GFP-태그로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 자가저해 단백질 구축물
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제 5항에 있어서, 상기 정제 및 검출용 태그는 His-태그인 것을 특징으로 하는, 자가저해 단백질 구축물
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제1항의 자가저해 단백질 구축물을 포함하는 프로테아제 활성 측정용 센서
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제7항에 있어서, 프로테아제에 의해 분해된 자가 저해 단백질 결합 도메인 MDM2와 결합하는 코팅 단백질을 추가로 포함하는, 프로테아제 활성 측정용 센서
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제 7항에 있어서, 상기 자가저해 단백질 구축물의 링커 내에 삽입되는, 프로테아제에 의해 분해되는 아미노산 서열은 MMP에 의해 분해되는 아미노산 서열(서열번호 5 내지 11), 카스파제(caspase)에 의해 분해되는 아미노산 서열(서열번호 12 내지 21), 및 카텝신(Cathepsin B, E, K, L, S)에 의해 분해되는 아미노산 서열(서열번호 22 내지 26)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 프로테아제 활성 측정용 센서
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제 7항에 있어서, 상기 자가저해 단백질 구축물의 정제 및 검출용 태그는 His-태그, Flag-태그, HA-태그, GST-태그 및 GFP-태그로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 프로테아제 활성 측정용 센서
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제 8항에 있어서, 상기 코팅 단백질은 GST-P27(서열번호 3) 또는 GST-PMI-N8A(서열번호 4)인 것을 특징으로 하는, 프로테아제 활성 측정용 센서
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(a) 제1항의 자가저해 단백질 구축물; 및(b) 프로테아제에 의해 분해된 자가저해 단백질 결합 도메인 MDM2와 결합하는, 코팅 단백질;을 포함하는 프로테아제 활성 측정용 키트
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(a) 제1항의 자가저해단백질 구축물의 링커를 활성을 측정하고자 하는 프로테아제로 분해하는 단계; 및 (b) 상기 링커로 결합된 자가저해 펩타이드 p53(서열번호 1) 이 제거된 후 자가저해 단백질 결합 도메인 MDM2(서열번호 2)의 농도를 측정하는 단계; 를 포함하는 프로테아제 활성 측정 방법
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제 15항에 있어서, 상기 (b) 단계의 자가저해 단백질 결합 도메인의 농도 측정은 효소결합면역흡착측정법(enzyme linked immunosorbent assay; ELISA), 방사면역측정법(Radio Immuno Assay; RIA), RET(resonance energy transfer), FRET(Forster resonance energy transfer), 단백질-단백질 상호작용을 이용한 단백질 농도 측정 방법, BRET (Bioluminescence resonance energy transfer) 및 겔 전기영동법(gel electrophoresis)으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 방법을 통해 이루어지는 것을 특징으로 하는, 프로테아제 활성 측정 방법
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