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아미노트랜스퍼라제(aminotransferase)의 유전자, 정지 코돈에 대응하는 tRNA의 유전자, 및 상기 tRNA에 비천연 아미노산을 전달하는 아미노아실 tRNA 합성효소의 유전자를 숙주 세포 내부로 도입하고,목적 단백질을 코딩하는 핵산 서열에 포함된 세 개의 연속된 코돈을 상기 정지 코돈으로 치환시키는 것을 포함하며,상기 비천연 아미노산은 4-아세틸-L-페닐알라닌(4-acetyl-L-phenylalanine), 4-아지도-L-페닐알라닌(4-azido-L-phenylalanine), 4-페닐-L-페닐알라닌(4-phenyl-L-phenylalanine), 4-시아노-L-페닐알라닌(4-cyano-L-phenyla lanine), 및 이들의 조합들로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 포함하는 목적 단백질의 돌연변이체를 생성하는 세포의 제조방법으로서, 상기 목적 단백질의 돌연변이체를 생성하는 세포는, 배양 배지 내에 존재하는 비천연 아미노산 전구체를 세포 내부에서 상기 아미노트랜스퍼라제를 이용하여 상기 비천연 아미노산으로 전환시키고, 상기 비천연 아미노산은 상기 아미노아실 tRNA 합성효소 및 상기 tRNA에 의하여 상기 치환된 코돈에 대응하는 상기 목적 단백질 내의 위치에 삽입되는 것이고, 상기 비천연 아미노산의 전구체는 4-아세틸페닐피루브산(4-acetylphenylpyruvic acid), 4-아지도페닐피루브산(4-azidophenylpyruvic acid), 4-페닐페닐피루브산(4-phenylphenylpyruvic acid), 4-시아노페닐피루브산(4-cyanophenylpyruvic acid), 및 이들의 조합들로 이루어지는 군으로부터 선택되는 α-케토산을 포함하는 것인, 목적 단백질의 돌연변이체를 생성하는 세포의 제조 방법
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제 1 항에 있어서,상기 목적 단백질의 돌연변이체는 상기 목적 단백질 서열 내에 상기 비천연 아미노산을 포함하는 것인, 목적 단백질의 돌연변이체를 생성하는 세포의 제조 방법
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제 1 항에 있어서,상기 아미노트랜스퍼라제의 유전자는 글루타민(glutamine) 아미노트랜스퍼라제를 포함하는 것인, 목적 단백질의 돌연변이체를 생성하는 세포의 제조 방법
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제 4 항에 있어서,상기 글루타민 아미노트랜스퍼라제는, 써모스 써모필러스(Thurmus thermophilus)의 글루타민 아미노트랜스퍼라제를 포함하는 것인, 목적 단백질의 돌연변이체를 생성하는 세포의 제조 방법
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제 1 항에 있어서,상기 숙주 세포는 원핵 세포 및 진핵 세포를 포함하는 것인, 목적 단백질의 돌연변이체를 생성하는 세포의 제조 방법
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제 1 항에 있어서,상기 아미노트랜스퍼라제의 유전자, 상기 정지 코돈에 대응하는 tRNA의 유전자, 및 상기 tRNA에 비천연 아미노산을 전달하는 아미노아실 tRNA 합성효소의 유전자를 상기 숙주 세포 내부로 도입하는 것은, 상기 아미노트랜스퍼라제의 유전자, 상기 정지 코돈에 대응하는 tRNA의 유전자, 및 상기 tRNA에 비천연 아미노산을 전달하는 아미노아실 tRNA 합성효소의 유전자 중 하나 이상을 포함하는 벡터를 상기 숙주 세포 내부로 도입하는 것을 포함하는 것인, 목적 단백질의 돌연변이체를 생성하는 세포의 제조 방법
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세포 내에 유전적으로 도입된 아미노트랜스퍼라제의 유전자, 정지 코돈에 대응하는 tRNA의 유전자, 및 상기 tRNA에 비천연 아미노산을 전달하는 아미노아실 tRNA 합성효소의 유전자를 포함하며,목적 단백질을 코딩하는 핵산 서열 중 세 개의 연속된 코돈이 상기 정지 코돈으로 치환된 것이고,상기 비천연 아미노산은 4-아세틸-L-페닐알라닌, 4-아지도-L-페닐알라닌, 4-페닐-L-페닐알라닌, 4-시아노-L-페닐알라닌, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 포함하는 것이며,제 1 항의 방법에 의해 제조되는 것인,목적 단백질의 돌연변이체를 생성하는 세포
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제 11 항에 있어서,상기 아미노트랜스퍼라제의 유전자는 글루타민 아미노트랜스퍼라제를 포함하는 것인, 목적 단백질의 돌연변이체를 생성하는 세포
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제 11 항에 있어서,상기 세포는 원핵 세포 및 진핵 세포를 포함하는 것인, 목적 단백질의 돌연변이체를 생성하는 세포
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제 11 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항의 목적 단백질의 돌연변이체를 생성하는 세포를 비천연 아미노산 전구체를 포함하는 배지에서 배양하는 것을 포함하며,상기 비천연 아미노산의 전구체는 4-아세틸페닐피루브산(4-acetylphenylpyruvic acid), 4-아지도페닐피루브산(4-azidophenylpyruvic acid), 4-페닐페닐피루브산(4-phenylphenylpyruvic acid), 4-시아노페닐피루브산(4-cyanophenylpyruvic acid), 및 이들의 조합들로 이루어지는 군으로부터 선택되는 α-케토산을 포함하는 것인,목적 단백질의 돌연변이체의 제조 방법
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제 14 항에 있어서,상기 목적 단백질의 돌연변이체는 상기 목적 단백질 서열 내에 상기 비천연 아미노산을 포함하는 것인, 목적 단백질의 돌연변이체의 제조 방법
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제 14 항에 있어서,상기 비천연 아미노산 전구체가 상기 아미노트랜스퍼라제에 의하여 상기 세포 내부에서 비천연 아미노산으로 전환되고,상기 비천연 아미노산은 상기 세포 내부에서 상기 아미노아실 tRNA 합성효소 및 상기 tRNA에 의하여 상기 치환된 코돈에 대응하는 상기 목적 단백질 내의 위치에 삽입되는 것을 포함하는 것인, 목적 단백질의 돌연변이체의 제조 방법
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제 14 항에 있어서,상기 단백질 돌연변이체는 상기 세포 외로 배출되는 것을 포함하는, 목적 단백질의 돌연변이체의 제조 방법
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