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위장관 점막하조직, 말초신경 외막조직 및 혈관 외막조직으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 조직을 하이드로젤 내에 함입시켜 배양하는 단계; 및 하이드로젤만을 분해하여 위장관 점막하조직, 말초신경 외막조직 및 혈관 외막조직으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 조직으로부터 하이드로젤 내로 이동, 성장한 중간엽줄기세포를 회수하는 단계;를 포함하는 중간엽줄기세포의 배양방법
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제1항에 있어서,1) 위장관 점막하조직, 말초신경 외막조직 및 혈관 외막조직으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 조직을 피브린 하이드로젤 내에 함입시키는 제 1단계;2) 성장배양액을 첨가하여 5 내지 30rpm 속도의 셰이커에서 3차원 장기배양 (organ culture)하는 제 2단계; 및3) 유로키나아제, 스트렙토키나아제 및 플라즈민으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 분해효소를 처리하여 피브린 하이드로젤만을 분해시켜, 위장관 점막하조직, 말초신경 외막조직 및 혈관 외막조직으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 조직으로부터 하이드로젤 내로 이동, 성장한 중간엽줄기세포 및 위장관 점막하조직, 말초신경 외막조직 및 혈관 외막조직으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 조직을 회수하는 제 3단계; 및4) 상기 회수된 중간엽줄기세포를 단층배양법으로 증폭시키는 제 4단계;를 포함하는 중간엽줄기세포의 배양방법
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제1항에 있어서,상기 위장관 점막하조직은 위 점막하조직, 소장 점막하조직 및 대장 점막하조직으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 조직인, 중간엽줄기세포의 배양방법
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제1항에 있어서,상기 말초신경 외막조직은 상지 말초신경 외막조직 및 하지 말초신경 외막조직으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 조직인, 중간엽줄기세포의 배양방법
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제1항에 있어서,상기 혈관 외막조직은 대정맥 외막조직, 대동맥 외막조직, 중정맥 외막조직 및 중동맥 외막조직으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 조직인, 중간엽줄기세포의 배양방법
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제1항 또는 제2항에 있어서,상기 하이드로젤은 콜라겐(collagen), 젤라틴(gelatin), 콘드로이틴(chondroitin), 하알루로닉산(hyaluronic acid), 알지닌(alginic acid), 메트리젤(MatrigelTM), 키토산(chitosan), 펩티드(peptide), 피브린(fibrin), PGA(polyglycolic acid), PLA(polylactic acid), PEG(polyethylene glycol) 및 폴리아크릴아미드(polyacrylamide)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 것인, 중간엽줄기세포의 배양방법
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제1항 또는 제2항에 있어서,상기 하이드로젤의 분해는 콜라지나아제, 젤라티나아제, 유로키나아제, 스트렙토키나아제, TPA(tissue plasminogen activator), 플라즈민(plasmin) 및 히알루로니다아제로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 효소를 통하여 분해되는, 중간엽줄기세포의 배양방법
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제1항에 있어서, 상기 중간엽줄기세포는 (i) CD29, CD44, CD73, CD90, CD105 및 STRO-1으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 표지자 군에 양성인 면역학적 특성; (ⅱ) flk-1, CD14, CD34, 및 CD45으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 표지자 군에 음성인 면역학적 특성; 및 (ⅲ) CD140b, CD146, 및 α-민무늬근 액틴 (α-smooth muscle actin)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 표지자 군에 양성인 면역학적 특성;으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 면역학적 특성을 가지는, 중간엽줄기세포의 배양방법
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제2항에 있어서,상기 제3단계에서 회수된 위장관 점막하조직, 말초신경 외막조직 및 혈관 외막조직으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 조직을 다시 제 1단계의 하이드로젤 내에 함입시켜 배양하는, 중간엽줄기세포의 배양방법
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