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(i) 별개의 기증자로부터 분리된 각 편도조직으로부터 단핵세포를 각각 수득하는 단계; (ii) 상기 수득한 단핵세포를 배양하여 중간엽 줄기세포를 선별하는 단계; 및, (iii) 상기 선별된 중간엽 줄기세포를 혼합하여 배양하는 단계를 포함하는, 키메라 중간엽 줄기세포군의 제조방법
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제1항의 방법에 의하여 제조되고, 하기의 특성을 나타내는 키메라 중간엽 줄기세포군:(i) 별개의 기증자로부터 수득한 별개의 편도조직으로부터 분리된 중간엽 줄기세포를 포함하고;(ii) 단일 기증자로부터 수득한 편도조직 유래 중간엽 줄기세포와 동일한 세포활성을 나타내며;(iii) CD14, CD34 및 CD45에 대해 음성인 면역 표현형의 특성을 가지며;(iv) CD73, CD95 및 CD105에 대해 양성인 면역 표현형의 특성을 가지며;(v) HLA-DR, CD40, CD80, CD86 또는 이들의 조합인 면역관련 표현 항체에 대하여 음성을 나타내고;(vi) 중배엽성 세포로 분화될 수 있으며; 및(vii) 내배엽성 세포로 분화될 수 있다
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제2항에 있어서,상기 중배엽성 세포는 지방세포, 골세포, 연골세포 또는 이들의 조합인 것인 키메라 중간엽 줄기세포군
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제2항에 있어서,상기 내배엽성 세포는 부갑상선 조직세포인 것인 키메라 중간엽 줄기세포군
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제2항의 키메라 중간엽 줄기세포군을 냉동 및 해동하는 단계를 포함하는 증식능이 향상된 키메라 중간엽 줄기세포군의 제조방법
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제6항에 있어서,상기 냉동은 냉각매체, 동결보호제 또는 이들의 조합을 이용하여 수행되는 것인 방법
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제7항에 있어서,상기 냉각매체는 액체질소인 것인 방법
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제7항에 있어서,상기 동결보호제는 글라이세롤, 설탕, 글루코스 또는 이들의 조합인 것인 방법
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제6항의 방법으로 제조되고, 하기의 특성을 나타내는 증식능이 향상된 키메라 중간엽 줄기세포군:(i) 냉동 및 해동을 수행하지 않은 키메라 중간엽 줄기세포군와 동등한 수준의 분화능을 나타내고; 및,(ii) 냉동 및 해동을 수행하지 않은 키메라 중간엽 줄기세포군보다 향상된 수준의 증식능을 나타낸다
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제2항의 키메라 중간엽 줄기세포군 또는 제10항의 증식능이 향상된 키메라 중간엽 줄기세포군을 덱사메타손, 아스코빅 산, L-프롤린, TGF-3, BMP-6 및 ITS를 함유한 연골세포 분화배지에서 배양하는 단계를 포함하는 키메라 중간엽 줄기세포군을 연골세포로 분화시키는 방법
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제2항의 키메라 중간엽 줄기세포군 또는 제10항의 증식능이 향상된 키메라 중간엽 줄기세포군을 아스코빅산 2-포스페이트, 덱사메타손 및 β-글리세로포스페이트를 함유한 배양배지에 배양하는 단계를 포함하는 키메라 중간엽 줄기세포군을 골세포로 분화시키는 방법
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제2항의 키메라 중간엽 줄기세포군 또는 제10항의 증식능이 향상된 키메라 중간엽 줄기세포군을 3-이소부틸-1-메틸-젠틴, 덱사메타손, 인도메타신 및 인슐린을 함유한 배양배지에 배양하는 단계를 포함하는 키메라 중간엽 줄기세포군을 지방세포로 분화시키는 방법
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제2항의 키메라 중간엽 줄기세포군 또는 제10항의 증식능이 향상된 키메라 중간엽 줄기세포군을 우태아혈청(FBS), 액티빈 A(activin A) 및 Shh(sonic hedgehog)를 함유한 배양배지에 배양하는 단계를 포함하는 키메라 중간엽 줄기세포군을 부갑상선 조직세포로 분화시키는 방법
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제2항의 키메라 중간엽 줄기세포군 또는 제10항의 증식능이 향상된 키메라 중간엽 줄기세포군으로부터 분리된 줄기세포, 또는 상기 키메라 중간엽 줄기세포군으로부터 분화된 세포를 유효성분으로 포함하는 세포 치료제
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(i) 별개의 기증자로부터 분리된 각 편도조직으로부터 단핵세포를 각각 수득하는 단계; (ii) 상기 수득한 단핵세포를 배양하여 중간엽 줄기세포를 선별하는 단계; 및, (iii) 상기 선별된 중간엽 줄기세포를 혼합하여 배양하는 단계를 포함하는, 편도조직 유래 중간엽 줄기세포를 혼합배양하는 방법
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