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1) 징크 핑거 단백질(zinc finger protein)의 징크 핑거 도메인의 알파-나선(α-helix) 부위의 아미노산 서열에서 알라닌(Ala, A), 아스파르트산(Asp, D), 글루탐산(Glu, E), 페닐알라닌(Phe, F), 이소루신(Ile, I), 라이신(Lys, K), 루신(Leu, L), 메티오닌(Met, M), 아스파라긴(Asn, N), 세린(Ser, S), 트레오닌(Thr, T), 발린(Val, V), 또는 타이로신(Tyr, Y)의 13개의 아미노산으로의 랜덤화, 또는 글라이신(Gly, G), 프롤린 (Pro, P), 시스테인(Cys, C) 및 히스티딘(His, H)을 포함하지 않도록 랜덤화하여 조작된 라이브러리를 제작하는 단계;2) 상기 단계 1)의 라이브러리를 파지미드(phagemid) 벡터에 도입하는 단계;3) 상기 단계 2)의 파지미드 벡터를 박테리아에 형질도입하는 단계; 및4) 상기 단계 3)의 박테리아와 보조 파지(helper phage)를 함께 배양한 뒤 징크 핑거(Zinc finger, ZnF) 라이브러리를 표면 제시(phage display)하는 파지 라이브러리를 수득하는 단계를 포함하는 비-핵산 표적 분자에 특이적인 클론을 포함하는 징크 핑거 단백질 라이브러리의 제조방법
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제 1항에 있어서, 상기 단계 1)의 징크 핑거 단백질은 서열번호 1의 Zif268인 것을 특징으로 하는 비-핵산 표적 분자에 특이적인 클론을 포함하는 징크 핑거 단백질 라이브러리의 제조방법
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제 1항에 있어서, 상기 알파-나선(α-helix) 부위는 랜덤화 이전의 징크 핑거 단백질에서 DNA 결합 부위인 것을 특징으로 하는 비-핵산 표적 분자에 특이적인 클론을 포함하는 징크 핑거 단백질 라이브러리의 제조방법
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제 1항에 있어서, 상기 단계 1) 다음에 올리고뉴클레오티드 합성 과정 또는 PCR 과정 오류를 수정하는 단계를 추가로 포함하는 비-핵산 표적 분자에 특이적인 클론을 포함하는 징크 핑거 단백질 라이브러리의 제조방법
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제 5항에 있어서, 상기 PCR 과정 오류의 수정은 항생제 선별에 의한 것을 특징으로 하는 비-핵산 표적 분자에 특이적인 클론을 포함하는 징크 핑거 단백질 라이브러리 제조방법
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제 1항에 있어서, 상기 단계 2)의 파지미드 벡터는 pComb3X 파지미드 벡터인 것을 특징으로 하는 비-핵산 표적 분자에 특이적인 클론을 포함하는 징크 핑거 단백질 라이브러리 제조방법
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제 1항에 있어서, 상기 단계 3)의 박테리아는 대장균인 것을 특징으로 하는 비-핵산 표적 분자에 특이적인 클론을 포함하는 징크 핑거 단백질 라이브러리 제조방법
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제 1항의 제조방법으로 제조된 비-핵산 표적 분자에 특이적인 클론을 포함하는 징크 핑거 단백질 라이브러리
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제 9항의 징크 핑거 단백질 라이브러리를 포함하는 비-핵산 표적 분자에 특이적인 징크 핑거 단백질 선별용 키트
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삭제
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1) 제 9항의 징크 핑거 단백질 라이브러리를 패닝하는 단계; 및2) 단계 1)의 패닝한 라이브러리에서 표적-결합 징크 핑거 단백질 생산 클론을 선별하는 단계를 포함하는 비-핵산 표적 분자에 특이적인 징크 핑거 단백질 스크리닝 방법
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제 12항에 있어서, 상기 패닝은 2 내지 5번 수행하는 것을 특징으로 하는 비-핵산 표적 분자에 특이적인 징크 핑거 단백질 스크리닝 방법
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제 12항에 있어서, 선별된 징크 핑거 단백질 라이브러리 클론의 표적 분자와의 결합력을 확인하는 단계를 추가로 포함하는 비-핵산 표적 분자에 특이적인 징크 핑거 단백질 스크리닝 방법
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제 12항에 있어서, 상기 비-핵산 표적 분자는 펩타이드, 단백질 또는 소분자 물질인 것을 특징으로 하는 비-핵산 표적 분자에 특이적인 징크 핑거 단백질 스크리닝 방법
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제 12항에 있어서, 상기 표적 분자는 달걀 리소자임(hen egg lysozyme), 오브알부민(ovalbumin), 리툭시맙(rituximab), 쥐(murine) RANKL 또는 FITC인 것을 특징으로 하는 비-핵산 표적 분자에 특이적인 징크 핑거 단백질 스크리닝 방법
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