| 1 |
1
D-호모알라닌(D-homoalanine)에 비트레오실라 헤모글로빈과 D-아미노산 옥시다아제의 융합단백질(Vitreoscilla hemoglobin―D-amino acid oxidase, VHb―DAAO), 오메가-트랜스아미나아제(ω-transaminase, ω-TA) 및 아미노 공여체(amino donor)를 처리하는 단계를 포함하는, L-호모알라닌 생산을 위한 D-호모알라닌의 탈라세미화 방법
|
| 2 |
2
제 1항에 있어서, 카탈라제(catalase)를 함께 처리하는 것을 특징으로 하는 L-호모알라닌 생산을 위한 D-호모알라닌의 탈라세미화 방법
|
| 3 |
3
제 1항에 있어서, VHb―DAAO 융합단백질은 서열번호 3으로 나타내는 염기서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는 L-호모알라닌 생산을 위한 D-호모알라닌의 탈라세미화 방법
|
| 4 |
4
제 1항에 있어서, ω-TA는 서열번호 5로 나타내는 염기서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는 L-호모알라닌 생산을 위한 D-호모알라닌의 탈라세미화 방법
|
| 5 |
5
제 1항에 있어서, 아미노 공여체는 벤질아민(benzylamine)인 것을 특징으로 하는 L-호모알라닌 생산을 위한 D-호모알라닌의 탈라세미화 방법
|
| 6 |
6
제 1항에 있어서, VHb―DAAO 융합단백질이 D-호모알라닌을 산화시켜 2-케토부티레이트(2-ketobutyrate)를 생산하고, ω-TA가 아미노 공여체를 이용하여 2-케토부티레이트로부터 L-호모알라닌으로 전환시키는 것을 특징으로 하는 L-호모알라닌 생산을 위한 D-호모알라닌의 탈라세미화 방법
|
| 7 |
7
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 도 1에 기재된 반응으로 수행되는 것을 특징으로 L-호모알라닌 생산을 위한 D-호모알라닌의 탈라세미화 방법
|
| 8 |
8
1) D-호모알라닌, VHb―DAAO 효소, ω-TA 효소, FAD(Flavin Adenine Dinucleotide) 효소, 벤질아민, 및 카탈라제를 포함하는 인산완충용액에 이소옥탄을 첨가하여 유기/수용성의 이상계(biphasic) 반응물을 제조하는 단계; 및2) 상기 이상계 반응물을 인큐베이션(incubation)시키는 단계를 포함하는, L-호모알라닌 생산을 위한 D-호모알라닌의 탈라세미화 방법
|
| 9 |
9
제 8항에 있어서, 단계 1) D-호모알라닌 및 벤질아민은 수용액 상태인 것을 특징으로 하는 L-호모알라닌 생산을 위한 D-호모알라닌의 탈라세미화 방법
|
| 10 |
10
제 8항에 있어서, 단계 2)의 인큐베이션은 35 ~ 40℃에서 진탕으로 인큐베이션시키는 것을 특징으로 하는 L-호모알라닌 생산을 위한 D-호모알라닌의 탈라세미화 방법
|
| 11 |
11
1) D-호모알라닌, VHb―DAAO 발현 재조합 전세포(whole cell), ω-TA 발현 재조합 전세포, 및 벤질아민를 포함하는 인산완충용액에 이소옥탄을 첨가하여 유기/수용성의 이상계 반응물을 제조하는 단계; 및2) 상기 이상계 반응물을 인큐베이션(incubation)시키는 단계를 포함하는, L-호모알라닌 생산을 위한 D-호모알라닌의 탈라세미화 방법
|
| 12 |
12
제 11항에 있어서, 단계 1)의 VHb―DAAO 발현 재조합 전세포는 VHb―DAAO 유전자를 포함하는 발현벡터를 대장균에 형질전환시켜 제조된 형질전환체인 것을 특징으로 하는 L-호모알라닌 생산을 위한 D-호모알라닌의 탈라세미화 방법
|
| 13 |
13
제 11항에 있어서, 단계 1)의 ω-TA 발현 재조합 전세포는 ω-TA 유전자를 포함하는 발현벡터를 대장균에 형질전환시켜 제조된 형질전환체인 것을 특징으로 하는 L-호모알라닌 생산을 위한 D-호모알라닌의 탈라세미화 방법
|
| 14 |
14
제 11항에 있어서, 단계 1)에서 카탈라제 또는 FAD를 추가적으로 첨가하는 것을 특징으로 하는 L-호모알라닌 생산을 위한 D-호모알라닌의 탈라세미화 방법
|
| 15 |
15
VHb―DAAO 효소, ω-TA 효소, FAD, 벤질아민 및 카탈라제를 포함하는 D-호모알라닌의 탈라세미화를 위한 조성물
|
| 16 |
16
VHb―DAAO 발현 재조합 전세포, ω-TA 발현 재조합 전세포 및 벤질아민을 포함하는 D-호모알라닌의 탈라세미화를 위한 조성물
|
| 17 |
17
제 16항에 있어서, 카탈라제 또는 FAD를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 D-호모알라닌의 탈라세미화를 위한 조성물
|
