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다환방향족탄화수소 노출에 대응하는 분홍바다맨드라미의 유전자 및 이를 이용한 연안 환경 오염 진단 방법

  • 기술번호 : KST2015192293
  • 담당센터 : 부산기술혁신센터
  • 전화번호 : 051-606-6561
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 다환방향족탄화수소(Polycyclic aromatic hydrocarbons)의 노출에 대응하는 분홍바다맨드라미(Scleronephthya gracillimum)의 유전자 및 이를 이용한 연안 환경 오염 진단 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 분홍바다맨드라미로부터 유래한 특정 유전자군이 다환방향족탄화수소 노출에 의해 특이적인 발현 변화를 나타내어, 이들을 생체지표로 도입함으로써, 다환방향족탄화수소 노출에 따른 해양 생태계의 스트레스 검출 및 환경 시료에서 다환방향족탄화수소의 오염을 모니터링 및 판정하는데 유용하게 사용될 수 있으며, 다환방향족탄화수소에 의해 유발되는 독성 및 발암 작용 기작을 규명하는 도구로 이용될 수 있다.
Int. CL C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) G01N 33/52 (2006.01)
CPC C12Q 1/6888(2013.01) C12Q 1/6888(2013.01) C12Q 1/6888(2013.01) C12Q 1/6888(2013.01)
출원번호/일자 1020100017165 (2010.02.25)
출원인 한국해양연구원
등록번호/일자 10-1199440-0000 (2012.11.02)
공개번호/일자 10-2011-0097359 (2011.08.31) 문서열기
공고번호/일자 (20121109) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2010.02.25)
심사청구항수 12

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국해양연구원 대한민국 경기도 안산시 상록구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 염승식 대한민국 경상남도 거제시 중곡로*길 **
2 우선옥 대한민국 경상남도 거제시 중곡로*길 **
3 이택견 대한민국 경기도 안성시 중앙로 ***-
4 전혜영 대한민국 경상남도 하동군
5 이종락 대한민국 제주특별자치도 서귀포시 김정문화로
6 송준임 대한민국 서울특별시 종로구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이원희 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로 ***, 성지하이츠빌딩*차 ***호 (역삼동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 주식회사 워터핀 충청남도 천안시 서북구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2010.02.25 수리 (Accepted) 1-1-2010-0124556-75
2 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2011.10.20 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2011-0603016-71
3 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2011.11.21 수리 (Accepted) 1-1-2011-0917850-17
4 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2011.11.21 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2011-0917851-52
5 최후의견제출통지서
Notification of reason for final refusal
2012.04.25 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2012-0240891-69
6 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2012.05.18 보정승인 (Acceptance of amendment) 1-1-2012-0398374-34
7 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2012.05.18 수리 (Accepted) 1-1-2012-0398373-99
8 등록결정서
Decision to grant
2012.10.24 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2012-0633640-23
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번호 청구항
1 1
서열번호 1로 기재되는 유전자(calmodulin)의 핵산 서열의 전부 또는 이의 단편인 올리고뉴클레오티드 또는 그의 상보 가닥 분자가 집적된, 유전독성 유발 수준의 다환방향족탄화수소(Polycyclic aromatic hydrocarbons)에 대한 노출 여부 확인용 마이크로어레이 칩
2 2
제 1항에 있어서, 상기 유전자는 분홍바다맨드라미(Scleronephthya gracillimum)로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 마이크로어레이 칩
3 3
제 1항에 있어서, 마이크로어레이 칩은 하기의 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 유전자의 핵산 서열의 전부 또는 이의 단편인 올리고뉴클레오티드 또는 그의 상보 가닥 분자가 추가적으로 집적된 것을 특징으로 하는 마이크로어레이 칩:서열번호 2로 기재되는 유전자(cytosolic malate dehydrogenase), 서열번호 3으로 기재되는 유전자(40S ribosomal protein S23), 서열번호 4로 기재되는 유전자(protein disulfide isomerase), 서열번호 5로 기재되는 유전자(dipeptidyl aminopeptidase Ⅳ), 서열번호 6으로 기재되는 유전자(proteasome beta 3 subunit), 서열번호 7로 기재되는 유전자(ATP synthase F0 subunit 6), 서열번호 8로 기재되는 유전자(40S ribosomal protein S8), 서열번호 9로 기재되는 유전자(myosin heavy chain), 서열번호 10으로 기재되는 유전자(MAK10 homolog, amino-acid N-acetyltransferase subunit), 서열번호 11로 기재되는 유전자(heletron 5 helitron-like transposon replicase/helicase/endonuclease), 서열번호 12로 기재되는 유전자(ral guanine nucleotide dissociation stimulator-like 1), 서열번호 13으로 기재되는 유전자(allene oxide synthase/8R-lipoxygenase fusion protein), 서열번호 14로 기재되는 유전자(triacylglycerol lipase-like protein), 서열번호 15로 기재되는 유전자(bromodomain adjacent to zinc finger domain 1A), 서열번호 16으로 기재되는 유전자(60S ribosomal protein L6), 서열번호 17로 기재되는 유전자(short-chain dehydrogenase/reductase 9), 서열번호 18로 기재되는 유전자(cardiac troponin C), 서열번호 19로 기재되는 유전자(calcium dependent mitochondrial carrier protein), 서열번호 20으로 기재되는 유전자(mannose-binding lectin 2), 서열번호 21로 기재되는 유전자{CXXC finger 1 (PHD domain), isoform}, 서열번호 22로 기재되는 유전자(myosin light chain kinase isoform 3A), 서열번호 23으로 기재되는 유전자(transcriptional regulator, XRE family), 서열번호 24로 기재되는 유전자(ubiquitin-ptotein ligase), 서열번호 25로 기재되는 유전자(astacin protease 4), 서열번호 26으로 기재되는 유전자{poly (ADP-ribose) polymerase 4}, 서열번호 27로 기재되는 유전자{ADAM metallopeptidase domain 28(ADAM28)}, 서열번호 28로 기재되는 유전자(Collagen, type ⅩⅩⅤ), 서열번호 29로 기재되는 유전자(eukaryotic translation initiation factor 4 gamma), 서열번호 30으로 기재되는 유전자(peptidylglycine alpha-hydroxylating monooxygenase), 서열번호 31로 기재되는 유전자(Ras-related and estrogen-regulated growth inhibitor) 및 서열번호 32로 기재되는 유전자(small acid-soluble spore protein)
4 4
제 3항에 있어서, 서열번호 1로 기재되는 유전자(calmodulin), 서열번호 2로 기재되는 유전자(cytosolic malate dehydrogenase), 서열번호 3으로 기재되는 유전자(40S ribosomal protein S23), 서열번호 4로 기재되는 유전자(protein disulfide isomerase), 서열번호 5로 기재되는 유전자(dipeptidyl aminopeptidase Ⅳ), 서열번호 6으로 기재되는 유전자(proteasome beta 3 subunit), 서열번호 7로 기재되는 유전자(ATP synthase F0 subunit 6), 서열번호 8로 기재되는 유전자(40S ribosomal protein S8), 서열번호 9로 기재되는 유전자(myosin heavy chain), 서열번호 10으로 기재되는 유전자(MAK10 homolog, amino-acid N-acetyltransferase subunit), 서열번호 11로 기재되는 유전자(heletron 5 helitron-like transposon replicase/helicase/endonuclease), 서열번호 12로 기재되는 유전자(ral guanine nucleotide dissociation stimulator-like 1), 서열번호 13으로 기재되는 유전자(allene oxide synthase/8R-lipoxygenase fusion protein), 서열번호 14로 기재되는 유전자(triacylglycerol lipase-like protein), 서열번호 15로 기재되는 유전자(bromodomain adjacent to zinc finger domain 1A), 서열번호 16으로 기재되는 유전자(60S ribosomal protein L6), 서열번호 17로 기재되는 유전자(short-chain dehydrogenase/reductase 9) 및 서열번호 18로 기재되는 유전자(cardiac troponin C)는 다환방향족탄화수소 노출에 대응하여 발현이 증가하고, 서열번호 19로 기재되는 유전자(calcium dependent mitochondrial carrier protein), 서열번호 20으로 기재되는 유전자(mannose-binding lectin 2), 서열번호 21로 기재되는 유전자{CXXC finger 1 (PHD domain), isoform}, 서열번호 22로 기재되는 유전자(myosin light chain kinase isoform 3A), 서열번호 23으로 기재되는 유전자(transcriptional regulator, XRE family), 서열번호 24로 기재되는 유전자(ubiquitin-ptotein ligase), 서열번호 25로 기재되는 유전자(astacin protease 4), 서열번호 26으로 기재되는 유전자{poly (ADP-ribose) polymerase 4}, 서열번호 27로 기재되는 유전자{ADAM metallopeptidase domain 28(ADAM28)}, 서열번호 28로 기재되는 유전자(Collagen, type ⅩⅩV), 서열번호 29로 기재되는 유전자(eukaryotic translation initiation factor 4 gamma), 서열번호 30으로 기재되는 유전자(peptidylglycine alpha-hydroxylating monooxygenase), 서열번호 31로 기재되는 유전자(Ras-related and estrogen-regulated growth inhibitor) 및 서열번호 32로 기재되는 유전자(small acid-soluble spore protein)는 다환방향족탄화수소 노출에 대응하여 발현이 감소하는 것을 특징으로 하는 마이크로어레이 칩
5 5
1) 다환방향족탄화수소 노출 여부를 확인하고자 하는 해수를 처리한 실험군의 분홍바다맨드라미와, 다환방향족탄화수소가 포함되지 않은 해수를 처리한 대조군의 분홍바다맨드라미에서 각각 RNA를 분리하는 단계;2) 단계 1)의 실험군 및 대조군의 RNA로부터 cDNA를 합성하면서 실험군과 대조군을 각기 다른 형광물질로 표지하는 단계;3) 단계 2)의 각기 다른 형광물질로 표지된 cDNA를 제 1항의 마이크로어레이 칩과 혼성화시키는 단계;4) 반응한 마이크로어레이 칩을 분석하는 단계; 및 5) 분석한 데이터에서 제 1항의 마이크로어레이 칩에 집적된 유전자 발현 정도를 대조군과 비교하여 확인하는 단계를 포함하는, 유전독성 유발 수준의 다환방향족탄화수소(Polycyclic aromatic hydrocarbons)에 대한 노출 여부 확인 방법
6 6
제 5항에 있어서, 단계 2)의 형광물질은 Cy3, Cy5, FITC(poly L-lysine-fluorescein isothiocyanate), RITC(rhodamine-B-isothiocyanate) 및 로다민(rhodamine)으로 이루어진 군으로부터 선택되어지는 것을 특징으로 하는 방법
7 7
1) 다환방향족탄화수소 노출 여부를 확인하고자 하는 해수를 처리한 실험군의 분홍바다맨드라미와, 다환방향족탄화수소가 포함되지 않은 해수를 처리한 대조군의 분홍바다맨드라미에서 각각 RNA를 분리하는 단계;2) 단계 1)의 RNA를, 제 1항의 유전자에 상보적이고 유전자를 증폭할 수 있는 프라이머 쌍을 사용하여 실시간 RT-PCR(Real-time reverse transcript polymerase chain reaction)을 수행하는 단계; 및3) 단계 2)의 유전자 산물을 대조군과 비교하여 발현 정도를 확인하는 단계를 포함하는, 유전독성 유발 수준의 다환방향족탄화수소(Polycyclic aromatic hydrocarbons)에 대한 노출 여부 확인 방법
8 8
제 1항의 마이크로어레이 칩을 포함하는, 유전독성 유발 수준의 다환방향족탄화수소(Polycyclic aromatic hydrocarbons)에 대한 노출 여부 확인용 키트
9 9
제 8항에 있어서, 스트렙타비딘-알칼리 탈인화효소 접합물질(strepavidin-like phosphatease conjugate), 화학형광물질(chemiflurorensce) 및 화학발광물질(chemiluminescent)로 이루어진 형광물질군으로부터 선택되는 어느 하나를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 키트
10 10
제 8항에 있어서, 혼성화에 사용되는 완충용액, RNA로부터 cDNA를 합성하기 위한 역전사효소, dNTPs 및 rNTP(사전 혼합형 또는 분리 공급형), 표식시약, 및 세척 완충용액으로 이루어진 반응시약군으로부터 선택되는 어느 하나를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 키트
11 11
제 1항의 마이크로어레이 칩에 집적된 유전자에 상보적이고 상기 유전자를 증폭할 수 있는 프라이머 쌍을 포함하는, 유전독성 유발 수준의 다환방향족탄화수소(Polycyclic aromatic hydrocarbons)에 대한 노출 여부 확인용 키트
12 12
제 11항에 있어서, RNA로부터 cDNA를 합성하기 위한 역전사효소, cNTPs 및 rNTP(사전 혼합형 또는 분리 공급형), DNA 중합효소 및, 세척 완충용액으로 구성된 반응시약군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 키트
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 국토해양부(한국해양기술진흥원) 이화여자대학교 해양과학기술연구개발사업 지속가능한 산호자원 보전 복원 기술개발