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갈락토키나아제(galactokinase)를 암호화하는 galK 유전자가 녹아웃(knock out)된 대장균에 슈도모나스 시린가에 유래 갈락토오스 탈수소효소를 암호화하는 gld 유전자를 포함하는 발현벡터를 형질도입시켜 제조된, D-갈락토네이트 고생산 대장균 균주
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갈락토키나아제를 암호화하는 galK 유전자 및 2-데히드로-3-데옥시-갈락토네이트 키나아제(2-dehydro-3-deoxy-galactonate kinase)를 암호화하는 dogK 유전자가 녹아웃된 대장균에 슈도모나스 시린가에 유래 갈락토오스 탈수소효소를 암호화하는 gld 유전자를 포함하는 발현벡터를 형질도입시켜 제조된, D-갈락토네이트 고생산 대장균 균주
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제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 gld 유전자는 서열번호 1의 염기서열로 구성되는 것을 특징으로 하는 D-갈락토네이트 고생산 대장균 균주
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4
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 galK 유전자는 서열번호 2의 염기서열로 구성되는 것을 특징으로 하는 D-갈락토네이트 고생산 대장균 균주
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제 2항에 있어서, 상기 dogK 유전자는 서열번호 4의 염기서열로 구성되는 것을 특징으로 하는 D-갈락토네이트 고생산 대장균 균주
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1) 슈도모나스 시린가에 유래 갈락토오스 탈수소효소를 암호화하는 gld 유전자를 포함하는 발현벡터를 제조하는 단계;2) 대장균에서 갈락토키나아제(galactokinase)를 암호화하는 galK 유전자를 녹아웃(knock out)시키는 단계; 및3) 상기 단계 1)의 발현벡터를 상기 단계 2)의 대장균에 형질도입하는 단계를 포함하는, D-갈락토네이트 고생산 대장균 균주의 제조방법
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1) 슈도모나스 시린가에 유래 갈락토오스 탈수소효소를 암호화하는 gld 유전자를 포함하는 발현벡터를 제조하는 단계;2) 대장균에서 갈락토키나아제를 암호화하는 galK 유전자 및 2-데히드로-3-데옥시-갈락토네이트 키나아제를 암호화하는 dogK 유전자를 녹아웃시키는 단계; 및3) 상기 단계 1)의 발현벡터를 상기 단계 2)의 대장균에 형질도입하는 단계를 포함하는, D-갈락토네이트 고생산 대장균 균주의 제조방법
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제 6항 또는 제 7항에 있어서, 상기 단계 1)의 발현벡터는 pET28a 발현벡터인 것을 특징으로 하는 D-갈락토네이트 고생산 대장균 균주의 제조방법
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제 6항 또는 제 7항에 있어서, 상기 단계 2)의 대장균은 E
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제 6항 또는 제 7항에 있어서, 상기 녹아웃은 유전자 파괴 카세트(gene disruption cassette)를 이용하여 유전자를 파괴시키는 것으로 수행하는 것을 특징으로 하는 D-갈락토네이트 고생산 대장균 균주의 제조방법
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제 6항 또는 제 7항에 있어서, 상기 형질도입은 전기 천공법(electroporation)을 이용하여 수행하는 것을 특징으로 하는 D-갈락토네이트 고생산 대장균 균주의 제조방법
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12
1) 제 1항의 대장균 균주를 배양하는 단계; 및2) 상기 단계 1)에서 배양된 배양액에서 D-갈락토네이트를 회수하는 단계를 포함하는, D-갈락토네이트의 대량 생산 방법
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1) 제 2항의 대장균 균주를 배양하는 단계; 및2) 상기 단계 1)에서 배양된 배양액에서 D-갈락토네이트를 회수하는 단계를 포함하는, D-갈락토네이트의 대량 생산 방법
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제 12항 또는 제 13항에 있어서, 상기 단계 1)의 배양은 탄소원 및 D-갈락토오스(D-galactose)를 포함하는 배지에서 수행하는 것을 특징으로 하는 D-갈락토네이트의 대량 생산 방법
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제 12항 또는 제 13항에 있어서, 상기 단계 1)의 배양은 pH 7 내지 8에서 수행하는 것을 특징으로 하는 D-갈락토네이트의 대량 생산 방법
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제 12항 또는 제 13항에 있어서, 상기 단계 1)의 배양은 36 내지 72시간 동안 수행하는 것을 특징으로 하는 D-갈락토네이트의 대량 생산 방법
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제 12항 또는 제 13항에 있어서, 상기 단계 2)에서 회수한 후 정제하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 D-갈락토네이트의 대량 생산 방법
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