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신호서열 및 변이된 신호서열로 디자인된 분비증강자에의한 원래 형태의 수용성 재조합 단백질 생산 방법
- 기술번호 : KST2015206960
- 담당센터 :
- 전화번호 :
| 요약 | 본 발명은 신호서열(directional signal)의 N-영역 및/또는 N-영역을 포함하는 신호 서열의 소수성 단편을 포함하는 변이된 신호 서열 및/또는 친수성 폴리펩티드로 구성된 분비증강자를 이용한 분비효율 향상방법에 관한 것이다. 본 발명은 재조합 단백질의 불용성 침전을 방지하고, 세포질 밖 또는 페리플라즘으로의 분비 효율을 향상시킴으로써, 재조합 외래단백질의 생산에 유용하게 사용할 수 있을 뿐만 아니라, 강력한 분비증강자를 이용하여 막 침투성을 향상시켜, 유용 치료용 단백질의 이동(transduction)에 이용될 수 있다. 신호서열, 짧은 신호서열, 변이된 신호서열 영역, 소수성 평균값, 소수성 프로파일, 분비증강자, 수용성 단백질, 원래 형태의 재조합 단백질 |
|---|---|
| Int. CL | C12N 15/09 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) |
| CPC | |
| 출원번호/일자 | 1020070009453 (2007.01.30) |
| 출원인 | 대한민국(관리부서:국립수산과학원) |
| 등록번호/일자 | 10-0981356-0000 (2010.09.03) |
| 공개번호/일자 | 10-2007-0079025 (2007.08.03) 문서열기 |
| 공고번호/일자 | (20100914) 문서열기 |
| 국제출원번호/일자 | |
| 국제공개번호/일자 | |
| 우선권정보 |
대한민국 | 1020060022389 | 2006.03.09
대한민국 | 1020060009418 | 2006.01.31 |
| 법적상태 | 등록 |
| 심사진행상태 | 수리 |
| 심판사항 | |
| 구분 | |
| 원출원번호/일자 | |
| 관련 출원번호 | |
| 심사청구여부/일자 | Y (2007.01.30) |
| 심사청구항수 | 51 |
출원인
| 번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
|---|---|---|---|
| 1 | 대한민국(관리부서:국립수산과학원) | 대한민국 | 부산광역시 기장군 |
발명자
| 번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
|---|---|---|---|
| 1 | 이상준 | 대한민국 | 부산 수영구 |
| 2 | 김영옥 | 대한민국 | 부산 남구 |
| 3 | 남보혜 | 대한민국 | 부산 남구 |
대리인
| 번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
|---|---|---|---|
| 1 | 이원희 | 대한민국 | 서울특별시 강남구 테헤란로 ***, 성지하이츠빌딩*차 ***호 (역삼동) |
최종권리자
| 번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
|---|---|---|---|
| 1 | 대한민국 | 대한민국 |
| 번호 | 서류명 | 접수/발송일자 | 처리상태 | 접수/발송번호 |
|---|---|---|---|---|
| 1 | 특허출원서 Patent Application |
2007.01.30 | 수리 (Accepted) | 1-1-2007-0091529-96 |
| 2 | 의견제출통지서 Notification of reason for refusal |
2007.12.11 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2007-0670990-37 |
| 3 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 [Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief) |
2008.02.01 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0085554-76 |
| 4 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 [Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief) |
2008.03.10 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0171225-11 |
| 5 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 [Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief) |
2008.04.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0259003-12 |
| 6 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 [Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief) |
2008.05.13 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0337079-89 |
| 7 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 [Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief) |
2008.06.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0416501-32 |
| 8 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 [Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief) |
2008.07.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0500657-49 |
| 9 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 [Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief) |
2008.08.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0572377-81 |
| 10 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 [Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief) |
2008.09.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0644287-92 |
| 11 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 [Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief) |
2008.10.13 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0710232-74 |
| 12 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 [Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief) |
2008.11.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0780229-11 |
| 13 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 [Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief) |
2008.12.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0853749-20 |
| 14 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 [Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief) |
2009.01.09 | 수리 (Accepted) | 1-1-2009-0014002-88 |
| 15 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 [Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief) |
2009.02.10 | 수리 (Accepted) | 1-1-2009-0080707-38 |
| 16 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 [Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief) |
2009.03.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2009-0147420-34 |
| 17 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 [Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief) |
2009.04.13 | 수리 (Accepted) | 1-1-2009-0221481-23 |
| 18 | [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서 [Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation) |
2009.05.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2009-0279828-65 |
| 19 | [명세서등 보정]보정서 [Amendment to Description, etc.] Amendment |
2009.05.11 | 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) | 1-1-2009-0279827-19 |
| 20 | 의견제출통지서 Notification of reason for refusal |
2009.09.29 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2009-0404355-17 |
| 21 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 [Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief) |
2009.11.27 | 수리 (Accepted) | 1-1-2009-0733081-94 |
| 22 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 [Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief) |
2009.12.28 | 수리 (Accepted) | 1-1-2009-0806726-24 |
| 23 | [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서 [Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation) |
2010.02.26 | 수리 (Accepted) | 1-1-2010-0129775-28 |
| 24 | [명세서등 보정]보정서 [Amendment to Description, etc.] Amendment |
2010.02.26 | 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) | 1-1-2010-0129798-78 |
| 25 | 등록결정서 Decision to grant |
2010.07.27 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2010-0319840-02 |
| 26 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2011.06.23 | 수리 (Accepted) | 4-1-2011-5128289-93 |
| 27 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2020.11.06 | 수리 (Accepted) | 4-1-2020-5245973-82 |
| 번호 | 청구항 |
|---|---|
| 1 |
1 (ⅰ) 프로모터, 및 (ⅱ) 상기 프로모터에 작동 가능하도록 연결된 신호 서열(signal sequence)로서, 10 이상의 pI를 갖는 신호 서열의 N-말단에 위치한 1번째 내지 3번째 아미노산을 포함하는 3 내지 21 개 아미노산 길이의 N-영역으로 구성된 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 구성된 유전자 컨스트럭트를 포함하는, 내부에 막전위 도메인, 막전위-유사 도메인 및 양친매성 도메인이 없는 외래단백질의 분비효율 향상을 위한 발현 벡터 |
| 2 |
2 제 1항에 있어서, 상기 프로모터는 바이러스 기원의 프로모터, 원핵생물 기원의 프로모터 또는 진핵생물 기원의 프로모터인 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 3 |
3 제 2항에 있어서, 상기 바이러스 기원의 프로모터는 사이토메갈로바이러스(Cytomegalovirus, CMV) 프로모터, 폴리오마 바이러스 프로모터, 계두 바이러스 프로모터, 아데노바이러스 프로모터, 소 유두종 바이러스 프로모터, 조류 육종 바이러스 프로모터, 레트로바이러스 프로모터, B형 간염 바이러스 프로모터, 단순 포진 바이러스 티미딘 키나제 프로모터 또는 원숭이 바이러스 40(SV40) 프로모터인 것을 특징으로 하는 발현벡터 |
| 4 |
4 제 2항에 있어서, 상기 원핵생물 기원의 프로모터는 T7 프로모터, SP6 프로모터, 열충격단백질(heat-shock protein) 70 프로모터, β-락타마제, 락토스 프로모터, 알칼라인 포스파타제 프로모터, 트립토판 프로모터, 또는 tac 프로모터인 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 5 |
5 제 2항에 있어서, 상기 진핵생물 기원의 프로모터는 효모 기원의 프로모터, 식물 기원의 프로모터 또는 동물 세포 기원의 프로모터인 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 6 |
6 제 5항에 있어서, 효모 기원의 프로모터는 3-포스포글리세레이트 키나제 프로모터, 에놀라제 프로모터, 글리세르알데히드-3-포스페이트 디히드로게나제 프로모터, 헥소키나제 프로모터, 피루베이트 디카르복실라제 프로모터, 포스포프럭토키나제 프로모터, 글루코스-6-포스페이트 이소머라제 프로모터, 3-포스포글리세레이트 뮤타제 프로모터, 피루베이트 키나제 프로모터, 트리오스포스페이트 이소머라제 프로모터, 포스포글루코스 이소머라제 프로모터, 글루코키나제 프로모터, 알코올 데히드로게나제 2 프로모터, 이소시토크롬 C 프로모터, 애시딕포스파타제(acidic phosphatase) 프로모터, Saccharomyces cerevisiae GAL1 프로모터, Saccharomyces cerevisiae GAL7 프로모터, Saccharomyces cerevisiae GAL10 프로모터, 또는 Pichia pastoris AOX1 프로모터인 것을 특징으로 하는 발현벡터 |
| 7 |
7 제 5항에 있어서, 동물 세포 기원의 프로모터는 열-충격 단백질(heat-shock protein) 프로모터, 프로액틴 프로모터 또는 면역글로블린 프로모터인 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 8 |
8 제 1항에 있어서, 신호 서열(signal sequence)은 바이러스, 원핵생물 및 진핵생물 기원의 신호 서열(signal sequence) 및 선도 서열(leader sequence)인 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 9 |
9 제 1항에 있어서, 신호 서열(signal sequence)은 OmpA, 콜레라톡신 B(cholera toxin B, CT-B) 신호 서열, 대장균 이열성 엔테로톡신 B 서브유닛(E |
| 10 |
10 삭제 |
| 11 |
11 삭제 |
| 12 |
12 제 1항에 있어서, N-영역으로 구성된 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 작동 가능하도록 연결된 분비증강자로 아르기닌 또는 리신이 포함된 2 내지 50 개의 아미노산으로 구성된 친수성 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 13 |
13 제 12항에 있어서, 분비증강자는 6개의 아르기닌 또는 6개의 리신으로 구성된 친수성 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드인 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 14 |
14 제 1항에 있어서, N-영역으로 구성된 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드에 작동 가능하도록 연결된 단백질 절단효소 인식부위를 코딩하는 뉴클레오티드를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 15 |
15 제 14항에 있어서, 단백질 절단효소 인식부위는 Xa 인자 인식부위, 엔테로키나제 인식부위, 제네나제(Genenase) I 인식부위 및 퓨린(Furin) 인식부위로 이루어진 군으로부터 단독 또는 융합의 형태로 선택되는 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 16 |
16 제 12항에 있어서, 분비증강자를 코딩하는 뉴클레오티드에 작동 가능하도록 연결된 단백질 절단효소 인식부위를 코딩하는 뉴클레오티드를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 17 |
17 제 16항에 있어서, 단백질 절단효소 인식부위는 Xa 인자 인식부위, 엔테로키나제 인식부위, 제네나제(Genenase) I 인식부위 및 퓨린(Furin) 인식부위로 이루어진 군으로부터 단독 또는 융합의 형태로 선택되는 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 18 |
18 제 1항 또는 제 12항에 있어서, 외래단백질을 코딩하는 유전자의 삽입을 위한 제한효소 부위를 추가적으로 포함하는 발현 벡터 |
| 19 |
19 삭제 |
| 20 |
20 제 1항에 있어서, 내부에 막전위 도메인, 막전위-유사 도메인 및 양친매성 도메인이 없는 외래단백질은 Mefp1인 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 21 |
21 제 1항에 있어서, 유전자 컨스트럭트에 작동가능하도록 연결된 외래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 추가적으로 포함하는 발현 벡터 |
| 22 |
22 (ⅰ) 프로모터, (ⅱ) 상기 프로모터에 작동 가능하도록 연결된 신호 서열(signal sequence)로서 10 이상의 pI를 갖는 신호서열의 N-말단에 위치한 1번째 내지 3번재 아미노산을 포함하는 3 내지 21개 아미노산 길이의 N-영역 및 중앙 특이적 소수성 영역으로 구성된 신호 서열의 소수성 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 (ⅲ) 상기 폴리뉴클레오티드에 작동 가능하도록 연결된 분비증강자로 아르기닌 또는 리신이 포함된 2 내지 50 개의 아미노산으로 구성된 친수성 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 구성된 유전자 컨스트럭트를 포함하는, 내부에 하나 이상의 막전위 도메인, 막전위-유사 도메인 또는 양친매성 도메인을 갖는 외래단백질의 분비효율 향상을 위한 발현 벡터 |
| 23 |
23 제 22항에 있어서, 상기 프로모터는 바이러스 기원의 프로모터, 원핵생물 기원의 프로모터 또는 진핵생물 기원의 프로모터인 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 24 |
24 제 23항에 있어서, 상기 바이러스 기원의 프로모터는 사이토메갈로바이러스(Cytomegalovirus, CMV) 프로모터, 폴리오마 바이러스 프로모터, 계두 바이러스 프로모터, 아데노바이러스 프로모터, 소 유두종 바이러스 프로모터, 조류 육종 바이러스 프로모터, 레트로바이러스 프로모터, B형 간염 바이러스 프로모터, 단순 포진 바이러스 티미딘 키나제 프로모터 또는 원숭이 바이러스 40(SV40) 프로모터인 것을 특징으로 하는 발현벡터 |
| 25 |
25 제 23항에 있어서, 상기 원핵생물 기원의 프로모터는 T7 프로모터, SP6 프로모터, 열충격단백질(heat-shock protein) 70 프로모터, β-락타마제, 락토스 프로모터, 알칼라인 포스파타제 프로모터, 트립토판 프로모터, 또는 tac 프로모터인 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 26 |
26 제 23항에 있어서, 상기 진핵생물 기원의 프로모터는 효모 기원의 프로모터, 식물 기원의 프로모터 또는 동물 세포 기원의 프로모터인 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 27 |
27 제 26항에 있어서, 효모 기원의 프로모터는 3-포스포글리세레이트 키나제 프로모터, 에놀라제 프로모터, 글리세르알데히드-3-포스페이트 디히드로게나제 프로모터, 헥소키나제 프로모터, 피루베이트 디카르복실라제 프로모터, 포스포프럭토키나제 프로모터, 글루코스-6-포스페이트 이소머라제 프로모터, 3-포스포글리세레이트 뮤타제 프로모터, 피루베이트 키나제 프로모터, 트리오스포스페이트 이소머라제 프로모터, 포스포글루코스 이소머라제 프로모터, 글루코키나제 프로모터, 알코올 데히드로게나제 2 프로모터, 이소시토크롬 C 프로모터, 애시딕포스파타제(acidic phosphatase) 프로모터, Saccharomyces cerevisiae GAL1 프로모터, Saccharomyces cerevisiae GAL7 프로모터, Saccharomyces cerevisiae GAL10 프로모터, 또는 Pichia pastoris AOX1 프로모터인 것을 특징으로 하는 발현벡터 |
| 28 |
28 제 26항에 있어서, 동물 세포 기원의 프로모터는 열-충격 단백질(heat-shock protein) 프로모터, 프로액틴 프로모터 또는 면역글로블린 프로모터인 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 29 |
29 제 22항에 있어서, 신호 서열(signal sequence)은 바이러스, 원핵생물 및 진핵생물 기원의 신호 서열(signal sequence) 및 선도 서열(leader sequence)인 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 30 |
30 제 22항에 있어서, 신호 서열(signal sequence)은 OmpA 신호 서열, 콜레라톡신 B(cholera toxin B, CT-B) 신호 서열, 대장균 이열성 엔테로톡신 B 서브유닛(E |
| 31 |
31 제 22항에 있어서, 신호 서열의 소수성 단편은 신호서열의 1번째 내지 6번째 아미노산을 포함하는 6 내지 21개의 아미노산으로 구성되는 펩티드인 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 32 |
32 제 22항에 있어서, 분비증강자는 6개의 아르기닌 또는 6개의 리신으로 구성된 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드인 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 33 |
33 제 22항에 있어서, 분비증강자는 pI 값이 10 이상인 친수성 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드인 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 34 |
34 삭제 |
| 35 |
35 삭제 |
| 36 |
36 제 22항에 있어서, 분비증강자를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 작동 가능하게 연결된 단백질 절단효소 인식부위를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 추가적으로 포함하는 발현 벡터 |
| 37 |
37 제 22항에 있어서, 분비증강자를 코딩하는 폴리뉴크레오티드에 연결된, 외래 유전자의 삽입을 위한 제한효소 부위를 추가적으로 포함하는 발현 벡터 |
| 38 |
38 제 22항에 있어서, 유전자 컨스트럭트에 작동 가능하도록 연결된 외래단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 추가적으로 포함하는 발현 벡터 |
| 39 |
39 삭제 |
| 40 |
40 제 22항에 있어서, 내부에 하나 이상의 막전위 도메인, 막전위-유사 도메인 또는 양친매성 도메인을 갖는 외래단백질은 넙치 헵시딘 I인 것을 특징으로 하는 발현 벡터 |
| 41 |
41 제 1항 또는 제 22항의 발현벡터로 숙주세포를 형질전환하여 제조한 비인간 형질전환체 |
| 42 |
42 1) 외래단백질의 소수성 프로파일을 분석하는 단계; 2) 상기 단계 1)의 분석결과 외래단백질 내부에 하나 이상의 막전위 도메인, 막전위-유사 도메인 또는 양친매성 도메인이 존재하는지 여부를 판정하는 단계; 3) (a) 단계 2에서 상기 외래단백질 내부에 막전위 도메인, 막전위-유사 도메인 및 양친매성 도메인이 존재하지 않는 것으로 판정될 경우에는, 신호서열로서 10 이상의 pI를 갖는 신호 서열의 N-말단에 위치한 1번째 내지 3번째 아미노산을 포함하며, 3 내지 21 개 아미노산 길이의 N-영역으로 구성된 폴리펩티드 단편에 상기 외래단백질이 연결된 융합단백질 또는 상기 신호서열의 N-영역으로 구성된 폴리펩티드 단편 및 절단효소 인식부위에 상기 외래단백질이 연결된 융합단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 구성되는 유전자 컨스트럭트를 제조하고, (b) 단계 2에서 상기 외래단백질의 내부에 하나 이상의 막전위 도메인, 막전위-유사 도메인 또는 양친매성 도메인이 존재하는 것으로 판정될 경우에는, 신호서열로서 10 이상의 pI를 갖는 신호 서열의 N-말단에 위치한 1번째 내지 3번째 아미노산을 포함하는 3 내지 21개 아미노산 길이의 N-영역 및 중앙 특이적 소수성 서열로 구성된 신호 서열의 소수성 단편, 분비증강자(secretional enhancer)로서 아르기닌 또는 리신이 포함된 2 내지 50개의 아미노산으로 구성된 친수성 펩티드, 및 상기 외래단백질을 순차적으로 포함하는 융합단백질, 또는 신호서열로서 10 이상의 pI를 갖는 신호 서열의 N-말단에 위치한 1번째 내지 3번째 아미노산을 포함하는 3 내지 21개 아미노산 길이의 N-영역 및 중앙 특이적 소수성 서열로 구성된 신호 서열의 소수성 단편, 분비증강자(secretional enhancer)로서 아르기닌 또는 리신이 포함된 2 내지 50개의 아미노산으로 구성된 친수성 펩티드, 단백질 절단효소 인식 부위 및 상기 외래단백질을 순차적으로 포함하는 융합단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 구성되는 유전자 컨스트럭트를 제조하는 단계; 4) 단계 3)에서 제조된 유전자 컨스트럭트를 통상의 발현벡터에 작동 가능하도록 삽입하여 재조합 발현벡터를 제조하는 단계; 5) 단계 4)의 재조합 발현벡터로 숙주세포를 형질전환하여 형질전환체를 제조하는 단계; 및 6) 단계 5)의 형질전환체를 배양하는 단계를 포함하는 외래단백질의 분비 효율을 향상시키는 방법 |
| 43 |
43 제 42항에 있어서, 상기 외래단백질은 불용성 단백질인 것을 특징으로 하는 방법 |
| 44 |
44 제 42항에 있어서, 소수성 프로파일은 소수성 프로파일 분석용 컴퓨터 소프트웨어 또는 웹기반의 어플리케이션으로 분석되는 것을 특징으로 하는 방법 |
| 45 |
45 제 44항에 있어서, 컴퓨터 소프트웨어는 DNASISTM, Visual OMP, Lasergene, pDRAW32 및 NetSupport로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법 |
| 46 |
46 제 42항에 있어서, 분비증강자는 6개의 아르기닌 또는 6개의 리신으로 구성된 펩티드인 것을 특징으로 하는 방법 |
| 47 |
47 제 42항에 있어서, 분비증강자는 pI 값이 10 이상인 친수성 펩티드인 것을 특징으로 하는 방법 |
| 48 |
48 삭제 |
| 49 |
49 1) 외래단백질의 소수성 프로파일을 분석하는 단계; 2) 상기 단계 1)의 분석결과 외래단백질 내부에 하나 이상의 막전위 도메인, 막전위-유사 도메인 또는 양친매성 도메인이 존재하는지 여부를 판정하는 단계; 3) (a) 단계 2에서 상기 외래단백질 내부에 막전위 도메인, 막전위-유사 도메인 및 양친매성 도메인이 존재하지 않는 것으로 판정될 경우에는, 신호서열로서 10 이상의 pI를 갖는 신호서열의 N-말단에 위치한 1번째 내지 3번째 아미노산을 포함하는 3 내지 21개 아미노산 길이의 N-영역으로 구성된 폴리펩티드 단편 및 단백질 절단효소 인식 부위에 상기 외래단백질이 연결된 융합단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 구성되는 유전자 컨스트럭트를 제조하고, (b) 단계 2에서 상기 외래단백질의 내부에 하나 이상의 막전위 도메인, 막전위-유사 도메인 또는 양친매성 도메인이 존재하는 것으로 판정될 경우에는, 신호서열로서 10 이상의 pI를 갖는 신호서열의 N-말단에 위치한 1번째 내지 3번째 아미노산을 포함하는 3 내지 21 개 아미노산 길이의 N-영역 및 중앙 특이적 소수성 서열로 구성된 신호 서열의 소수성 단편, 분비증강자(secretional enhancer)로서 아르기닌 또는 리신이 포함된 2 내지 50 개의 아미노산으로 구성된 친수성 펩티드, 단백질 절단효소 인식 부위 및 상기 외래단백질을 순차적으로 포함하는 융합 외래단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 구성되는 유전자 컨스트럭트를 제조하는 단계; 4) 단계 3)에서 제조된 유전자 컨스트럭트를 통상의 발현벡터에 작동 가능하도록 삽입하여 재조합 발현벡터를 제조하는 단계; 5) 단계 4)의 재조합 발현벡터로 숙주세포를 형질전환하여 형질전환체를 제조하는 단계; 6) 단계 5)의 형질전환체를 배양하는 단계; 및 7) 단계 6)의 배양액으로부터 상기 융합 외래단백질을 분리하는 단계를 포함하는 융합 외래단백질의 제조방법 |
| 50 |
50 1) 외래단백질의 소수성 프로파일을 분석하는 단계; 2) 상기 단계 1)의 분석결과 외래단백질 내부에 하나 이상의 막전위 도메인, 막전위-유사 도메인 또는 양친매성 도메인이 존재하는지 여부를 판정하는 단계; 3) (a) 단계 2에서 상기 외래단백질 내부에 막전위 도메인, 막전위-유사 도메인 및 양친매성 도메인이 존재하지 않는 것으로 판정될 경우에는, 신호서열로서 10 이상의 pI를 갖는 신호서열의 N-말단에 위치한 1번째 내지 3번째 아미노산을 포함하는 3 내지 21개 아미노산 길이의 N-영역으로 구성된 폴리펩티드 단편 및 단백질 절단효소 인식 부위에 상기 외래단백질이 연결된 융합 외래단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 구성되는 유전자 컨스트럭트를 제조하고, (b) 단계 2에서 상기 외래단백질의 내부에 하나 이상의 막전위 도메인, 막전위-유사 도메인 또는 양친매성 도메인이 존재하는 것으로 판정될 경우에는, 신호서열로서 10 이상의 pI를 갖는 신호서열의 N-말단에 위치한 1번째 내지 3번째 아미노산을 포함하는 3 내지 21개 아미노산 길이의 N-영역 및 중앙 특이적 소수성 서열로 구성된 신호 서열의 소수성 단편, 분비증강자(secretional enhancer)로서 아르기닌 또는 리신이 포함된 2 내지 50 개의 아미노산으로 구성된 친수성 펩티드, 단백질 절단효소 인식 부위 및 상기 외래단백질을 순차적으로 포함하는 융합 외래단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 구성되는 유전자 컨스트럭트를 제조하는 단계; 4) 단계 3)에서 제조된 유전자 컨스트럭트를 통상의 발현벡터에 작동 가능하도록 삽입하여 재조합 발현벡터를 제조하는 단계; 5) 단계 4)의 재조합 발현벡터로 숙주세포를 형질전환하여 형질전환체를 제조하는 단계; 6) 단계 5)의 형질전환체를 배양하는 단계; 7) 단계 6)의 배양액으로부터 상기 융합 외래단백질을 분리하는 단계; 및 8) 단계 7)의 분리된 융합 외래단백질을 상기 단백질 절단효소 인식 부위를 절단할 수 있는 단백질 절단효소로 절단한 후 원래 형태의 외래단백질을 분리하는 단계를 포함하는 원래 형태의 외래단백질의 제조방법 |
| 51 |
51 1) 제 18항의 발현 벡터의 제한효소 부위에 외래단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 작동 가능하도록 연결하여 재조합 발현 벡터를 제조하는 단계; 2) 단계 1의 재조합 발현 벡터를 숙주세포에 형질전환하여 형질전환체를 제조하는 단계; 및 3) 단계 2의 형질전환체를 배양하는 단계를 포함하는 외래단백질의 분비 효율을 향상시키는 방법 |
| 52 |
52 1) 제 37항의 발현 벡터의 제한효소 부위에 외래단백질을 코딩하는 유전자를 작동 가능하도록 연결하여 재조합 발현 벡터를 제조하는 단계; 2) 단계 1의 재조합 발현 벡터를 숙주세포에 형질전환하여 형질전환체를 제조하는 단계; 및 3) 단계 2의 형질전환체를 배양하는 단계를 포함하는 외래단백질의 분비 효율을 향상시키는 방법 |
| 53 |
53 1) 제 38항의 발현 벡터를 숙주세포에 형질전환하여 형질전환체를 제조하는 단계; 2) 단계 2의 형질전환체를 배양하는 단계; 3) 배양액으로부터 상기 외래단백질을 분리하는 단계; 및 4) 상기 분리된 외래단백질에 단백질 절단효소를 처리한 뒤, 원래 형태의 외래 단백질을 분리하는 단계를 포함하는 원래 형태의 외래단백질의 제조방법 |
| 54 |
54 제 52항에 있어서, 외래단백질은 뇌를 표적으로 하는 치료용 단백질인 것을 특징으로 하는 방법 |
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55 삭제 |
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56 삭제 |
| 57 |
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| 58 |
58 제 41항에 있어서, 숙주세포는 원핵생물세포 또는 진핵생물세포인 것을 특징으로 하는 형질전환체 |
| 59 |
59 제 58항에 있어서, 원핵생물세포는 바이러스, 대장균, 바실러스(Bacillus)로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 형질전환체 |
| 60 |
60 제 58항에 있어서, 진핵생물세포는 포유동물 세포, 곤충 세포, 효모, 식물 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 형질전환체 |
| 61 |
61 1) 프로모터, 신호서열로서 10 이상의 pI를 갖는 신호서열의 N-말단에 위치한 1번째 내지 3번째 아미노산을 포함하는 3 내지 21 개의 아미노산 길이의 N-영역으로 구성된 폴리펩티드 단편 또는 상기 신호서열의 N-영역 및 중앙 특이적 소수성 지역을 포함하는 소수성 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 분비증강자 후보 서열의 삽입을 위한 제한효소부위 및 외래단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 서로 작동 가능하도록 연결된 유전자 컨스트럭트를 포함하는 발현벡터를 제조하는 단계; 2) 상기 발현벡터의 제한효소부위에 친수성 아미노산을 포함하는 분비증강자 후보서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 틀에 맞게 삽입하여 재조합 발현벡터를 제조하는 단계; 3) 단계 2의 재조합 발현벡터로 숙주세포를 형질전환하여 형질전환체를 제조하는 단계; 4) 상기 단계 3의 형질전환체를 배양하는 단계; 5) 단계 1의 발현벡터로 형질전환된 형질전환체(대조군)와 단계 4의 형질전환체의 배양액에서 상기 외래단백질의 발현정도를 측정하는 단계; 및 6) 대조군과 비교하여 유의하게 상기 외래단백질의 발현 수준을 증가시킨 분비증강자를 선별하는 단계를 포함하는 외래단백질의 분비향상을 유도하는 분비증강자의 스크리닝방법 |
| 지정국 정보가 없습니다 |
|---|
| 순번 | 패밀리번호 | 국가코드 | 국가명 | 종류 |
|---|---|---|---|---|
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| 18 | WO2011142529 | WO | 세계지적재산권기구(WIPO) | FAMILY |
DOCDB 패밀리 정보
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|---|---|---|---|---|
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| 국가 R&D 정보가 없습니다. |
|---|
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| 특허 등록번호 | 10-0981356-0000 |
|---|
권리란
| 표시번호 | 사항 |
|---|---|
| 1 |
출원 연월일 : 20070130 출원 번호 : 1020070009453 공고 연월일 : 20100914 공고 번호 : 특허결정(심결)연월일 : 20100727 청구범위의 항수 : 51 유별 : C12N 15/63 발명의 명칭 : 신호서열 및 변이된 신호서열로 디자인된 분비증강자에의한 원래 형태의 수용성 재조합 단백질 생산 방법 존속기간(예정)만료일 : |
특허권자란
| 순위번호 | 사항 |
|---|---|
| 1 |
(관리청) 특허청장 |
| 1 |
(승계청) 국립수산과학원장 부산광역시 기장군... |
| 1 |
(승계권리자) 대한민국 |
등록료란
| 제 1 - 20 년분 | 금 액 | 0 원 | 2010년 09월 03일 | 납입 |
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| 번호 | 서류명 | 접수/발송일자 | 처리상태 | 접수/발송번호 |
|---|---|---|---|---|
| 1 | 특허출원서 | 2007.01.30 | 수리 (Accepted) | 1-1-2007-0091529-96 |
| 2 | 의견제출통지서 | 2007.12.11 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2007-0670990-37 |
| 3 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 | 2008.02.01 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0085554-76 |
| 4 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 | 2008.03.10 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0171225-11 |
| 5 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 | 2008.04.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0259003-12 |
| 6 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 | 2008.05.13 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0337079-89 |
| 7 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 | 2008.06.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0416501-32 |
| 8 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 | 2008.07.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0500657-49 |
| 9 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 | 2008.08.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0572377-81 |
| 10 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 | 2008.09.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0644287-92 |
| 11 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 | 2008.10.13 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0710232-74 |
| 12 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 | 2008.11.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0780229-11 |
| 13 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 | 2008.12.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2008-0853749-20 |
| 14 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 | 2009.01.09 | 수리 (Accepted) | 1-1-2009-0014002-88 |
| 15 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 | 2009.02.10 | 수리 (Accepted) | 1-1-2009-0080707-38 |
| 16 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 | 2009.03.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2009-0147420-34 |
| 17 | [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서 | 2009.04.13 | 수리 (Accepted) | 1-1-2009-0221481-23 |
| 18 | [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서 | 2009.05.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2009-0279828-65 |
| 19 | [명세서등 보정]보정서 | 2009.05.11 | 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) | 1-1-2009-0279827-19 |
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| 23 | [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서 | 2010.02.26 | 수리 (Accepted) | 1-1-2010-0129775-28 |
| 24 | [명세서등 보정]보정서 | 2010.02.26 | 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) | 1-1-2010-0129798-78 |
| 25 | 등록결정서 | 2010.07.27 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2010-0319840-02 |
| 26 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2011.06.23 | 수리 (Accepted) | 4-1-2011-5128289-93 |
| 27 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2020.11.06 | 수리 (Accepted) | 4-1-2020-5245973-82 |
| 기술정보가 없습니다 |
|---|
| 과제고유번호 | 1525002846 |
|---|---|
| 세부과제번호 | B10200107A200000100 |
| 연구과제명 | 수산생물유전체및이용연구 |
| 성과구분 | 출원 |
| 부처명 | 농림수산식품부 |
| 연구관리전문기관명 | 농림부 |
| 연구주관기관명 | 국립수산과학원 |
| 성과제출연도 | 2007 |
| 연구기간 | 200201~201312 |
| 기여율 | 0.5 |
| 연구개발단계명 | 기초연구 |
| 6T분류명 | BT(생명공학기술) |
| 과제고유번호 | 1525002868 |
|---|---|
| 세부과제번호 | Ⅳ-12-가-3) |
| 연구과제명 | 수산생물유전자은행구축및정보관리 |
| 성과구분 | 출원 |
| 부처명 | 농림수산식품부 |
| 연구관리전문기관명 | 해양수산부 |
| 연구주관기관명 | 국립수산과학원 |
| 성과제출연도 | 2007 |
| 연구기간 | 200401~210012 |
| 기여율 | 0.5 |
| 연구개발단계명 | 기초연구 |
| 6T분류명 | BT(생명공학기술) |
| 과제고유번호 | 1545002123 |
|---|---|
| 세부과제번호 | 10-BT-01 |
| 연구과제명 | 수산생물 유용유전자 개발 및 산업화 |
| 성과구분 | 등록 |
| 부처명 | 농림수산식품부 |
| 연구관리전문기관명 | 농림수산식품부 |
| 연구주관기관명 | 국립수산과학원 |
| 성과제출연도 | 2010 |
| 연구기간 | 200201~201112 |
| 기여율 | 1 |
| 연구개발단계명 | 기초연구 |
| 6T분류명 | BT(생명공학기술) |
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| [KST2014006466][충남대학교] | 고추역병균 파이토프쏘라 캡시사이 진단용 디엔에이표지인자 | 새창보기 |
| [KST2014008865][] | 항원 결정기를 포함하는 재조합 개 로타바이러스 VP4 단백질 및 이에 대한 항체 | 새창보기 |
| [KST2014058436][한림대학교] | 세포침투 효율이 향상된 ＰＲＡＳ40 융합단백질 | 새창보기 |
| [KST2014003248][영남대학교] | 한우의 경제형질과 연관된 마이크로새틀라이트 ＤＮＡ프라이머 | 새창보기 |
| [KST2014009630][부산대학교] | 조직재생능이 향상된 중간엽 줄기세포 및 그의 제조방법 | 새창보기 |
| [KST2014013363][한국원자력연구원] | 뉴로텐신 ｍＲＮＡ에 특이적인 작은 간섭 ＲＮＡ 및 이를유효성분으로 포함하는 종양 치료제 | 새창보기 |
| [KST2016011777][한국과학기술원] | rnpA 유전자 발현감소를 통한 재조합단백질의 제조방법(Method for Preparing Recombinant Proteins Through Reduced Expression of rnpA) | 새창보기 |
| [KST2015231177][한양대학교] | 신경교종 줄기세포 검출용 펩타이드(Peptide for Detection of Glioma Stem Cell) | 새창보기 |
| [KST2019003698][선문대학교] | 1-데옥시노지리마이신 생산능을 가지는 재조합 미생물 및 이를 이용한 1-데옥시노지리마이신의 제조방법 | 새창보기 |
| [KST2015012283][충북대학교] | 루코노스톡 메젠테로이데스 균주를 이용한 페닐락트산 생산방법 | 새창보기 |
| [KST2016010114][충남대학교] | 억새 유래의 WRKY4 단백질(WRKY4 protein from Miscanthus species) | 새창보기 |
| [KST2016012066][서울대학교] | 발육란 고증식성 및 무병원성 인플루엔자 바이러스(HIGHLY REPLICATIVE AND AVIRULENT INFLUENZA VIRUS) | 새창보기 |
| [KST2014000971][광주테크노파크] | 미도콘드리아 DNA COIII-ND3-ND4L 지역 단염기다형성을 이용한 연어의 유전자형 판별 및 소속 계군 구별법 | 새창보기 |
| [KST2014003254][영남대학교] | 신규 프라이머 세트 및 이를 이용한 한우육 판별방법 | 새창보기 |
| [KST2015231096][서울대학교] | 가용성 단백질 발현량이 증대된 헬리코박터 파일로리 유래 α-1,2 푸코실 전달효소의 유전자와 단백질 및 α-1,2 푸코실올리고당 생산에의 응용(HELICOBACTER PYLORI α-1,2 FUCOSYLTRANSFERASE GENE AND PROTEIN WITH IMPROVED SOLUBLE PROTEIN EXPRESSION, AND THEREOF APPLICATION FOR SYNTHESIS OF α-1,2 FUCOSYLOLIGOSACCHARIDE) | 새창보기 |
| [KST2016010073][한국과학기술원] | SepRS와 EF-Tu의 변이체를 이용한 인산화 단백질의 제조방법(Method for Producing Phosphoserine Incorporated Proteins by Using SepRS Mutants and EF-Tu Mutants) | 새창보기 |
| [KST2015231119][한국과학기술원] | 당지질 합성 회로 조절을 통한 고 시알산 함량의 재조합 당단백질 제조 방법(Method for preparing recombinant glycoproteins with high content of sialic acid by modulating glycosphingolipid biosynthesis pathway) | 새창보기 |
| [KST2015231095][서울대학교] | 가용성 단백질 발현량 및 활성이 증대된 헬리코박터 파일로리 유래 α-1,3 푸코실 전달효소의 유전자와 단백질 및 α-1,3 푸코실올리고당 생산에의 응용(HELICOBACTER PYLORI α-1,3 FUCOSYLTRANSFERASE GENE AND PROTEIN WITH IMPROVED SOLUBLE PROTEIN EXPRESSION AND ACTIVITY, AND THEREOF APPLICATION FOR SYNTHESIS OF α-1,3 FUCOSYLOLIGOSACCHARIDE) | 새창보기 |
| [KST2015011155][건국대학교] | 고농도 당 스트레스 저항성 돌연변이체 제조방법 및 고농도 당과 식물호르몬에 의하여 유도되는 프로모터 및 그 응용 | 새창보기 |
| [KST2014000370][광주테크노파크] | 딸기 유래 과실 특이적 발현 프로모터를 함유하는 과실 특이적 발현벡터 | 새창보기 |
| [KST2014004058][가톨릭대학교] | 인슐린 분비에 관련된 인자들을 조절하는 안티센스 핵산분자를 이용한 당뇨병 치료 | 새창보기 |
| [KST2016008961][한국화학연구원] | 피키아 파스토리스 균주를 이용한 캔디다 앤탁티카 균주 유래 리파제의 생산방법(Process for preparing lipase derived from Candida antarctica using Pichia pastoris) | 새창보기 |
| [KST2015011319][영남대학교] | 유전자코드엔지니어링을 이용한 Ｌ―３，４―디하이드록시페닐알라닌의 단백질 내 도입 및 이를 이용한 단백질의 컨쥬게이션 방법 | 새창보기 |
| [KST2016012070][서울대학교] | 발육란 고증식성 무병원성 재조합 인플루엔자 바이러스 및 이의 용도(HIGHLY REPLICATIVE AND AVIRULENT RECOMBINANT INFLUNEZA VIRUS, AND USE THEREOF) | 새창보기 |
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