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(a) 아밀로이드-베타 42 유전자를 포함하는 저온발현(cold expression) 벡터를 제조하는 단계;(b) 상기 발현 벡터를 숙주세포에 도입하여 형질전환체를 제조하는 단계;(c) 상기 형질전환체로부터 아밀로이드-베타 펩타이드 단백질의 발현을 저온에서 유도하는 단계; 및(d) 상기 저온 유도된 단백질 발현산물을 정제하는 단계를 포함하는, 가용성(soluble) 아밀로이드-베타 42의 제조방법
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제1항에 있어서,상기 (a)단계에서 아밀로이드-베타 42 유전자는 서열번호 1로 표시되는 염기서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 가용성(soluble) 아밀로이드-베타 42의 제조방법
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제1항에 있어서,상기 (a)단계에서 저온발현 벡터는 N 말단에 His-tag 및 TF(trigger factor) 유전자를 포함하거나 또는 GFP(green fluorescent protein) 유전자를 포함하는 것을 특징으로 하는 가용성(soluble) 아밀로이드-베타 42의 제조방법
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제1항에 있어서,상기 (b)단계에서 숙주세포는 원핵세포인 것을 특징으로 하는 가용성(soluble) 아밀로이드-베타 42의 제조방법
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제4항에 있어서,상기 원핵세포는 E
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제1항에 있어서,상기 (c) 단계에서 아밀로이드-베타 42 단백질 발현을 유도하는 온도는 16℃인 것을 특징으로 하는 가용성(soluble) 아밀로이드-베타 42의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (d) 단계에서 단백질 정제는 1) 형질전환체 배양액을 수득하고 파쇄한 후 원심분리하여 상층액을 회수하여 여과하는 단계;2) 상기 여과된 상측액을 Ni-NTA 친화성 크로마토그래피에 로딩하여 융합단백질(TF-Aβ42 또는 GFP-Aβ42)을 Ni-NTA 수지에 흡착시키는 단계;3) Ni-NTA 수지에 부착된 상기 융합단백질(TF-Aβ42 또는 GFP-Aβ42)에 트롬빈을 처리하여 TF와 아밀로이드-베타 42를 절단하거나, 또는 GFP와 아밀로이드-베타 42를 절단단하는 단계; 및4) 상기 절단된 아밀로이드-베타 42 단백질을 용출하는 단계에 의해 이루어지는 것을 특징으로 하는 가용성(soluble) 아밀로이드-베타 42의 제조방법
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제1항에 있어서,상기 제조방법은 불용성 단백질의 용해과정이 없이 가용성 아밀로이드-베타 42를 얻을 수 있는 것을 특징으로 하는 가용성(soluble) 아밀로이드-베타 42의 제조방법
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제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 제조방법으로 제조된 가용성 아밀로이드-베타 42
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