도 2로 표시되며, 삽입될 외래 유전자를 E3(early region 3) 프로모터하에서 발현시키기 위한 재조합 발현벡터 pXBK에 있어서,

상기 발현벡터는 돼지아데노바이러스 4형 유래의 E3 유전자 위치에서 5'영역에 해당하며, 크기가 817bp인 제한효소 XbaⅠ-BamHⅠ단편의 pVⅢ 유전자와, 돼지 아데노바이러스 4형 유래의 E3 유전자 위치에서 3'영역에 해당하며, 크기가 979bp인 제한 효소 BamHⅠ-KpnⅠ단편의 fiber 유전자를 순서대로 포함함을 특징으로 하는 벡터 pXBK

제 1항에 있어서, 외래 유전자는 발현벡터 pXBK의 1636bp의 BamHⅠ사이트에 삽입되며, 상기 외래 유전자는 형광발현단백질임(Green Fluorescent protein)임을 특징으로 하는 벡터

제 1항에 있어서, 상기 pVⅢ유전자는 프라이머 P8XF 5'-GCT CTA GAA TGA CCC TGG CGA AAG AG-3'와 프라이머 P8BR 5'-CGG GAT CCT TAT GGC GCG CTG TAG AG-3'를 사용하여 폴리머라제 연쇄반응(polymerase chain reaction; PCR)으로 증폭시킨 것이며, 도 3의 서열로 표시되는 것임을 특징으로 하는 벡터

제 1항에 있어서, 상기 fiber유전자는 프라이머 FIBBF 5'-CGG GAT CCT GAA TAA AAA CAT ACA CC-3'와 프라이머 FIBKR 5'-GGG GTA CCA AAT GAG GTG GGG GGA GA-3'를 사용하여 PCR 반응으로 증폭시킨 것이며, 도 4의 서열로 표시되는 것임을 특징으로 하는 벡터

(1) 제 2항에 기재된 발현벡터의 pVⅢ 유전자-외래 유전자-fiber 유전자 부위를 KpnⅠ과 XbaⅠ으로 절단하는 단계;

(2) 플라스미드 pRLITR를 HindⅢ로 절단한 것과 돼지아데노바이러스 4형 게놈 유전자를 대장균내에서 동질성 재조합(homologous recombination)하여 제작한 pPAV4의 E3 위치를 SalI으로 절단하여 선형화 DNA를 얻는 단계;

(3) 상기 (1)단계의 유전자와 상기 (2) 단계의 선형화 DNA를 대장균내에서 동질성 재조합하여 재조합 돼지아데노바이러스 4형을 클로닝하는 단계; 및

(4) 클로닝된 재조합 돼지아데노바이러스 4형을 I-pPolⅠ으로 절단한 후, 이를 돼지신장세포(porcine kidney 15 cells)에 형질도입시켜 재조합 돼지아데노바이러스 4형을 획득하는 단계;

를 포함함을 특징으로 하는 유전자 재조합 돼지아데노바이러스 4형의 제조방법

제 5항에 있어서, 플라스미드 pRLITR은 돼지아데노바이러스 4형 게놈 유전자의 왼쪽 말단 ITR 영역에 해당하는 1986bp 부위와 오른쪽 말단 E4 영역에 해당하는 3