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서열번호 1 내지 4 및 서열번호 6 내지 9의 프라이머로 구성된 프라이머 세트 및 서열번호 5 및 서열번호 10 내지 11로 구성된 프로브를 포함하고,여기서, 상기 서열번호 1 내지 4의 프라이머들은 rpo(RNA 중합효소의 베타 소단위)B 유전자를 증폭시키기 위하여 그리고 서열번호 6 내지 9의 프라이머들은 IS6110(Mycobacterium tuberculosis 특이적인 Insertion Sequence) 유전자를 증폭시키기 위하여 사용하고 상기 각 유전자에 특이적인 2쌍의 프라이머들을 같은 튜브 안에 넣어서 증폭시키는 원-튜브 네스티드 PCR을 위한 것을 특징으로 결핵균 검출용 키트
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제 1항에 있어서, 상기 프로브의 5'말단과 3'말단은 형광물질로 표지된 것을 특징으로 하는 결핵균 검출용 키트
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제 5항에 있어서, 상기 5' 말단 표지된 형광물질은 6-카르복시플루오레세인(6-carboxyfluorescein, FAM), 헥사클로로-6-카르복시플루오레세인(hexachloro-6-carboxyfluorescein, HEX), 테트라클로로-6-카르복시플루오레세인(tetrachloro-6-carboxyfluorescein), 및 Cyanine-5(Cy5)으로 이루어진 군에서 선택된 것을 특징으로 하는 결핵균 검출용 키트
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제 5항에 있어서, 상기 3' 말단에 표지된 형광물질은 6-카르복시테트라메틸-로다민(6-carboxytetramethyl-rhodamine, TAMRA) 또는 블랙 홀 켄처(black hole quencher)-1,2,3 (BHQ-1,2,3)인 것을 특징으로 하는 결핵균 검출용 키트
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제 1항에 있어서, 상기 결핵균은 Mycobacterium tuberculosis,M
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샘플로부터 DNA를 얻고, 그 DNA를 주형으로 하여서 실시간(real-time) PCR을 수행할 때, 첫 번째 프라이머로 서열번호 1 내지 2 및 서열번호 6 내지 7의 프라이머를, 두 번째 프라이머로 서열번호 3 내지 4 및 서열번호 8 내지 9의 프라이머를 그 DNA와 같은 튜브 안에 넣어서 증폭시키는 단계를 포함하는 결핵균 검출방법
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제 9항에 있어서, 상기 튜브는 프로브를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 결핵균 검출방법
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제 10항에 있어서, 상기 프로브는 서열번호 5 및 서열번호 10 내지 11로 구성된 군으로부터 선택된 프로브인 것을 특징으로 하는 결핵균 검출방법
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제 10항에 있어서, 상기 프로브의 5'말단과 3'말단은 형광물질로 표지된 것을 특징으로 하는 결핵균 검출방법
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제 9항에 있어서, 상기 결핵균은 Mycobacterium tuberculosis,M
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제 9항에 있어서, 상기 첫 번째 프라이머 및 두 번째 프라미어 농도는 10피코그램(pg)인 것을 특징으로 하는 결핵균 검출방법
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제 9항에 있어서, 상기 샘플은 객담, 소변, 혈액 또는 종양조직인 것을 특징으로 하는 결핵균 검출방법
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a) 하나의 튜브에 존재하는 서열번호 1 내지 4 및 서열번호 6 내지 9의 프라이머 조성물에 시료로부터 추출한 균의 DNA를 혼합하여 유전자 분석 시료를 준비하는 단계;b) 단계(a)의 유전자 분석 시료에 실시간 Nested PCR을 수행하여 PCR 산물을 수득하는 단계;c) 단계(b)의 PCR 산물을 정량하여 정량 곡선을 수득하는 단계; 및d) 상기 정량 곡선을 이용하여, 시료로부터 추출한 균의 DNA에 존재하는 rpoB 유전자 및 IS6110 유전자를 정량하는 방법
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제 16항에 있어서, 상기 방법은 튜브에 서열번호 5 및 서열번호 10 내지 11로 구성된 군으로부터 선택된 프로브를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법
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Nested 실시간(Real-time) PCR을 이용하여 결핵균을 검출하는 방법에 있어서, 첫 번째 프라이머로 서열번호 1 내지 2 및 서열번호 6 내지 7의 프라이머를, 두 번째 프라이머로 서열번호 3 내지 4 및 서열번호 8 내지 9의 프라이머를 같은 튜브 안에 넣어서 증폭시켜서 Mycobacterium tuberculosis,M
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