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소나무 재선충병 탐지용 바이오마커 및 이를 이용한 소나무 재선충병 탐지방법

  • 기술번호 : KST2015210810
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 새로운 펙테이트 라이에이즈 3 (Bx-PEL3) 유전자가 버사펠렌쿠스 자일로필러스의 단계 특이적으로 발현되는 서열 태그 라이브러리로부터 클론되었다. Bx-PEL1 및 Bx-PEL2는 정량적 실시간 PCR 분석에서 Bx-PEL3보다 상대적으로 많았다. 다른 생애단계에 따른 다양한 Bx-PELs의 발현수준은 각 Bx-PEL이 발병에서 각기 다른 생화학적 기능을 수행함을 제시한다. 재조합 Bx-PEL3는 폴리갈락투론산에 대한 활성을 나타내며 최적 pH와 최적 Ca2+ 농도는 각각 9.0 및 0.5 mM였다. 상동관계 모델링을 통해 Bx-PELs는 구조적으로 바실러스속 KSM P-15의 PEL과 유사하며 칼슘 결합부위 및 촉매활성에 필수적인 잔기를 공유하는 것으로 나타났다. Bx-PEL3는 다른 Bx-PELs와 같이 식도샘 근처에서 발현되는 것으로 나타나, Bx-PEL3가 침에서 분비된어 세포벽 분해에 관여할 것임을 가리킨다. 데이타들은 새로운 PEL3 유전자가 생화학적으로 기능적인 추정 발병인자임을 제시한다.본 발명자들은 소나무 재선충병의 원인인 병원성 버사펠렌쿠스 자일로필러스를 탐지하는 두 가지 LAMP 프로토콜을 발명하였다. 먼저, 본 발명자들은 LAMP 탐지 킷트를 개발하기 위해 바이오마커로서 B. 자일로필러스와 구조적으로 매우 유사한 비병원성 선충들과 상동관계를 갖지 않는 펙테이트 라이에이즈 3 유전자를 확인하였다. Genie Ⅱ와 Geobacillus sp. M 2.0 큰 단편 (GspM 2.0) DNA 폴리머레이즈를 포함하는 등온성 마스터 믹스를 이용하는 첫 번째 LAMP 프로토콜은 형광 금속 지시약 칼세인과 가공된 Bacillus stearothemophilus DNA 폴리머레이즈 I, 큰 단편 (Bst 2.0 DNA 폴리머레이즈)를 이용한 다른 LAMP 프로토콜과 비교하여 배양시간이 짧고 민감도가 ~ 10배 정도 높다. 그렇지만, 칼세인과 Bst2.0 폴리머레이즈를 이용한 LAMP 반응은 경제적이다.
Int. CL C12Q 1/68 (2006.01) C12N 9/88 (2006.01) C12N 15/60 (2006.01)
CPC C12N 9/88(2013.01) C12N 9/88(2013.01)
출원번호/일자 1020130062728 (2013.05.31)
출원인 한림대학교 산학협력단
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2014-0141225 (2014.12.10) 문서열기
공고번호/일자
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 거절
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2013.05.31)
심사청구항수 13

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한림대학교 산학협력단 대한민국 강원도 춘천시 한림

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 고영호 대한민국 경기 안양시 동안구
2 강재순 대한민국 서울특별시 서대문구
3 한혜림 대한민국 서울 강남구
4 문일성 대한민국 서울 도봉구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 강성혜 대한민국 대전 유성구 지족로***번길 **, ***-*호 (지족동, 성훈프라자)(아이앤아이특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2013.05.31 수리 (Accepted) 1-1-2013-0487665-15
2 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2013.11.19 수리 (Accepted) 4-1-2013-5154718-13
3 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2013.12.17 수리 (Accepted) 4-1-2013-5170246-39
4 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search
2014.03.06 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
5 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search
2014.04.10 수리 (Accepted) 9-1-2014-0032936-33
6 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2014.09.24 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2014-0652933-65
7 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)
2014.11.24 수리 (Accepted) 1-1-2014-1132194-55
8 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2014.12.09 수리 (Accepted) 1-1-2014-1194762-10
9 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment
2014.12.09 수리 (Accepted) 1-1-2014-1194766-03
10 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2014.12.09 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2014-1194754-55
11 거절결정서
Decision to Refuse a Patent
2015.04.21 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2015-0266915-89
12 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2016.12.27 수리 (Accepted) 4-1-2016-5194076-39
13 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2018.03.06 수리 (Accepted) 4-1-2018-5038639-99
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번호 청구항
1 1
서열번호 17로 표시되는 버사펠렌쿠스 자일로필러스의 펙테이트 라이에이즈 3 유전자
2 2
서열번호 32로 표시되는 버사펠렌쿠스 자일로필러스의 펙테이트 라이에이즈 3 단백질
3 3
서열번호 17로 표시되는 버사펠렌쿠스 자일로필러스의 펙테이트 라이에이즈 3 유전자, 상기 유전자의 센스 프라이머 및 상기 유전자의 안티센스 프라이머 중 1종 이상을 포함하는, 소나무 재선충병 진단용 조성물
4 4
서열번호 32로 표시되는 버사펠렌쿠스 자일로필러스의 펙테이트 라이에이즈 3 단백질을 포함하는, 소나무 재선충병 진단용 조성물
5 5
서열번호 32로 표시되는 버사펠렌쿠스 자일로필러스의 펙테이트 라이에이즈 3 단백질에 대한 항체를 포함하는, 소나무 재선충병 진단용 조성물
6 6
서열번호 17로 표시되는 버사펠렌쿠스 자일로필러스의 펙테이트 라이에이즈 3 유전자의 일부 또는 전부를 이용하여 소나무 재선충병 감염을 탐지하는 방법
7 7
서열번호 32로 표시되는 버사펠렌쿠스 자일로필러스의 펙테이트 라이에이즈 3 단백질 또는 이 단백질에 대한 항체를 이용하여 소나무 재선충병 감염을 탐지하는 방법
8 8
a) DNA 폴리머레이즈를 포함하는 등온성 마스터 믹스 (Isothermal Master Mix)에 프라이머와 시료 게놈 DNA를 혼합하여 PCR 반응 혼합물을 제조하는 단계;b) 버사펠렌쿠스 펙테이트 라이에이즈 3에 대한 정방향 프라이머 및 역방향 프라이머; 정방향 내부 프라이머 (forward internal primer; FIP) 및 역방향 내부 프라이머 (backward internal primer; BIP); 루프 정방향 프라이머 (loop forward primer) 및 루프 역방향 프라이머 (loop backward primer) 중 하나 또는 양자 모두;를 a) 단계에서 제조된 PCR 반응 혼합물에 가해 주는 단계; c) b) 단계에서 얻은 혼합물을 Genie® Ⅱ에 넣어 시료 게놈 DNA를 증폭하는 단계; 및d) 증폭된 DNA 중 버사펠렌쿠스 자일로필러스 펙테이트 라이에이즈 3 유전자를 확인하는 단계;를 포함하는, LAMP (Loop-mediated isothermal amplication)를 이용한 소나무 재선충병 탐지방법
9 9
청구항 8에 있어서,상기 a) 단계의 DNA 폴리머레이즈는 Gsp (Geobacillus sp
10 10
a) 완충액, 이중가닥 DNA에 결합하여 형광을 내는 표지제, 베타인, dNTPs, MnCl2, DNA 폴리머레이즈, 칼슘 지시약, 시료 게놈 DNA 및 프라이머를 포함하는 반응 혼합물을 제조하는 단계; b) a) 단계에서 얻은 반응 혼합물을 LAMP (Loop-mediated isothermal amplication) 반응시켜 시료 게놈 DNA를 증폭하는 단계; 및c) 증폭된 DNA 중 버사펠렌쿠스 자일로필러스 펙테이트 라이에이즈 3 유전자를 확인하는 단계;를 포함하는, LAMP (Loop-mediated isothermal amplication)를 이용한 소나무 재선충병 탐지방법
11 11
청구항 10에 있어서,상기 a) 단계의 DNA 폴리머레이즈는 Gsp (Geobacillus sp
12 12
청구항 10에 있어서,이중가닥 DNA에 결합하여 형광을 내는 표지제는 SYBR 그린을 포함하는 사이아나인 (Cyanine) 염색제, 5,5'-(6,22-dioxo-11,14,17-trioxa-7,21-diazaheptacosane-1,27-diyl)bis(3,8-diamino-6-phenylphenanthridin-5-ium) iodide (젤 레드) 및 10,10'-(6,22-dioxo-11,14,17-trioxa-7,21-diazaheptacosane-1,27-diyl)bis(3,6-bis(dimethylamino)acridin-10-ium) iodide (젤그린) 중 선택된 것임을 특징으로 하는, LAMP (Loop-mediated isothermal amplication)를 이용한 소나무 재선충병 탐지방법
13 13
청구항 10에 있어서,칼슘 지시약은 칼세인 및 하이드록시나프톨 블루 중 선택된 1종 이상임을 특징으로 하는, LAMP (Loop-mediated isothermal amplication)를 이용한 소나무 재선충병 탐지방법
지정국 정보가 없습니다
패밀리정보가 없습니다
순번, 연구부처, 주관기관, 연구사업, 연구과제의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 국가R&D 연구정보 정보 표입니다.
순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 교육과학기술부 한림대학교 산학협력단 일반연구자 Torsin family 단백질에 의한 UPR활성과 신경가소성 조절기작연구