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단백질의 가용성 발현을 위한 고효율 발현벡터 시스템

  • 기술번호 : KST2015214522
  • 담당센터 : 경기기술혁신센터
  • 전화번호 : 031-8006-1570
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 목적단백질의 발현율 및 가용성을 최대로 달성하기 위한 발현 벡터 및 이를 이용한 최적 발현시스템의 구축방법에 관한 것으로서, 더욱 자세하게는, 목적단백질의 발현이 가능하도록 연결된, a) 프로모터, b) 히스티딘 Taq이 결합된, 목적 단백질의 수용성을 높이는 융합 파트너, c) TEV (Tobacco Etch Virus) 단백질 분해효소 인식서열, d) 아미노산 2 내지 10개로 이루어지는 링커, 및 e) 다중 클로닝 자리 (multicloning site)를 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 본 발명은 다양한 융합 파트너 결합을 통한 목적 단백질의 가용성 증가 여부를 빠른 시간에 확인할 수 있으며, 최적의 발현 효율 및 가용성을 보이는 재조합체를 선택할 수 있고, 융합 파트너와 목적단백질간의 절단 효율 및 정확성이 높은 말단을 제공한다. 목적 단백질, 융합 파트너, 가용성 발현, 다중 클로닝 자리
Int. CL C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/67 (2006.01) C12N 15/64 (2006.01)
CPC C12N 15/63(2013.01) C12N 15/63(2013.01) C12N 15/63(2013.01)
출원번호/일자 1020050051893 (2005.06.16)
출원인 학교법인 성균관대학
등록번호/일자 10-0690230-0000 (2007.02.27)
공개번호/일자 10-2006-0131445 (2006.12.20) 문서열기
공고번호/일자 (20070312) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 소멸
심사진행상태 수리
심판사항
구분
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2005.06.16)
심사청구항수 2

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 학교법인 성균관대학 대한민국 서울 종로구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김경규 대한민국 경기 군포시
2 정진희 대한민국 경기 수원시 장안구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 유미특허법인 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로 ***, 서림빌딩 **층 (역삼동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 성균관대학교 산학협력단 경기도 수원시 장안구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 특허출원서
Patent Application		 2005.06.16 수리 (Accepted) 1-1-2005-0318869-37
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2006.07.05 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2006.08.10 수리 (Accepted) 9-1-2006-0049349-63
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2006.09.22 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2006-0549856-87
5 의견서
Written Opinion		 2006.11.22 수리 (Accepted) 1-1-2006-0858004-27
6 명세서등보정서
Amendment to Description, etc.		 2006.11.22 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2006-0858005-73
7 등록결정서
Decision to grant		 2007.02.20 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2007-0095285-80
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번호 청구항
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목적 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 중합효소 연쇄반응으로 증폭하고,상기 증폭된 산물을 상이한 융합파트너 및 동일한 다중 클로닝 자리를 포함하는 발현벡터인 pVFT1L 내지 pVFT6L 및 발현벡터 pVFT1S 내지 pVFT6S의 12종의 벡터의 각각의 다중 클로닝 자리에 도입하고, 상기 발현벡터로 숙주세포를 형질전환시켜 상기 목적단백질을 발현시키고,상기 목적단백질의 발현율과 가용성을 측정하여 목적단백질의 최적 융합 파트너를 선택하는 것을 포함하는 목적단백질의 최적 융합 파트너를 선택하는 방법으로서,상기 발현벡터인 pVFT1L 내지 pVFT6L 및 발현벡터 pVFT1S 내지 pVFT6S는 각각 목적단백질를 암호화하는 유전자의 발현이 가능하도록 연결된, a) T7 프로모터, 하기 표의 목적단백질의 수용성을 높이는 융합 파트너를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, c) TEV(Tobacco Etch Virus) 단백질 분해효소 인식서열, d)아미노산 2개 또는 5개로 이루어진 링커, 및 e) 다중 클로닝 자리 (multicloning site)를 포함하는 것인 목적단백질의 최적 발현 시스템을 구축하는 방법
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제4항에 있어서, 상기 pVFT1L는 서열번호 1 및 서열번호 2로 이루어진 삽입체를, 제한효소 NheI과 BamHI으로 처리한 pET28a에 삽입하여 제조한 것이고, 상기 pVFT2L는 서열번호 1 및 서열번호 2로 이루어진 삽입체를, 제한효소 SpeI과 BamHI으로 처리한 pET41a에 삽입하여 제조한 것이며, 상기 pVFT1S는 서열번호 8의 서열을 가진 정방향 프라이머 및 서열번호 9의 서열을 가진 역방향 프라이머를 이용하여 pVFT1L를 주형으로 증폭한 후, 상기 증폭산물을 제한효소 NcoI과 BamHI으로 처리한 삽입체를, 제한효소 NcoI과 BamHI으로 처리한 pET28a에 삽입하여 제조한 것이고,상기 pVFT2S는 pET41a를 제한효소 NdeI과 NheI으로 처리하여 얻어진 글루타티온-S-트랜스퍼라제인 삽입체를, 제한효소 NdeI과 NheI으로 처리한 pVFT1S에 삽입하여 제조한 것인 목적단백질의 최적 발현 시스템을 구축하는 방법
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