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체세포 핵이식에 의해 태어난 복제산양 유래 체세포의 핵과 산양 유래의 탈핵된 난자가 융합된 산양의 재복제 수정란
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(1) 체세포 핵이식에 의해 태어난 복제산양 유래 체세포를 재복제를 위한 공핵세포로 준비하는 단계; (2) 산양으로부터 난자를 회수하여 수핵난자를 준비하는 단계; (3) 상기 수핵난자를 탈핵하고 공핵세포를 이식한 후 융합시키고 활성화시켜 수정란을 제조하는 단계를 포함한 산양 재복제 수정란의 제조방법
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제 2항에 있어서, 단계 (1)의 체세포는 FBS가 첨가된 TCM-199 또는 DMEM 배지를 이용하여 5% CO2, 95~99% 습도, 37~40℃ 조건에서 배양하는 것을 특징으로 하는 산양 재복제 수정란의 제조방법
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제 2항에 있어서, 상기 단계 (2)에서는 산양에게 프로게스테론을 일정기간 주입하고, 상기 주입기간이 완료될 무렵에 FSH를 투여하며, PMSG 및 PGF2α도 투여한 다음 앞서 주입된 프로게스테론을 제거한 후에 hCG를 투여하여 과배란을 유도하는 것을 특징으로 하는 산양 재복제 수정란의 제조방법
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제 2항에 있어서, 상기 단계 (3)에서는 레이저 시스템이 부착된 도립현미경 하에서 레이저 전용 렌즈로 천공할 수핵난자의 투명대에 초점을 맞춘 다음 20~40μsec의 강도로 레이저를 1~2회 투과시키는 것을 특징으로 하는 산양 재복제 수정란의 제조방법
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제 5항에 있어서, 투명대 두께의 60~80% 정도를 천공하는 것을 특징으로 하는 산양 재복제 수정란의 제조방법
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제 2항에 있어서, 단계 (3)에서는 핵 이식란에 직류 전류를 2
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제 2항에 있어서, 단계 (3)에서는 융합 후 활성화 이전에 핵 이식란을 1 내지 10 시간 동안 M16 또는 mSOF 배지를 이용하여 전배양하는 것을 특징으로 하는 산양 재복제 수정란의 제조방법
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제 2항에 있어서, 단계 (3)에서는 핵 이식란을 이오노마이신 용액으로 1 내지 10분 동안 처리한 후 6-DMAP 용액으로 3 내지 5시간 동안 처리하여 활성화시키는 것을 특징으로 하는 산양 재복제 수정란의 제조방법
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제 2항에 있어서, 재복제 수정란은 BSA 또는 FBS가 첨가된 mSOF 또는 CR1aa 배지를 이용하여 5% CO2, 5-10% O2, 85-90% N2 95-98% 습도, 38-40℃의 조건에서 12-20시간동안 배양을 실시하면서 2-4세포기로의 발달을 유도하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 산양 재복제 수정란의 제조방법
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