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(a) 에프린-A5의 프로모터, (b) 그 프로모터의 하위에 위치하고 박테리오파지 P1의 Cre 재조합 효소가 특이적으로 인식하는 재조합 서열인 loxP 서열이 양끝에 달린 리포터 유전자와 그 유전자의 3' 조절 서열, (c) 그 리포터 유전자의 하위에 위치하는 에프린-A5-Fc 유전자와 그 유전자의 3' 조절 서열, 및 (d) 그 에프린-A5-Fc 유전자의 하위에 위치하는 에프린-A5의 인핸서를 포함하되,상기 에프린-A5의 프로모터는 서열번호 2에 개시된 서열로 구성되며,상기 에프린-A5-Fc 유전자는 서열번호 4에 개시된 서열로 구성되고,상기 에프린-A5의 인핸서 인자는 서열번호 1에 개시된 서열로 구성되는 것을 특징으로 하는 재조합 발현벡터
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제1항에 있어서,상기 리포터 유전자는 녹색 형광 단백질(GFP) 유전자, 적색 형광 단백질(RFP) 유전자, 루시퍼라제 유전자, GUS 유전자, lacZ 유전자 및 클로람페니콜 아세틸트란스퍼라제 유전자로 구성된 군에서 선택된 유전자인 것을 특징으로 하는 재조합 발현벡터
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제1항 또는 제2항의 기재의 재조합 발현벡터가 도입된 형질전환 마우스
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(Ⅰ) 에프린-A5의 프로모터, 그 프로모터의 하위(downstream)에 위치한 박테리오파지 P1의 Cre 재조합 효소가 특이적으로 인식하는 재조합 서열인 loxP 서열이 양끝에 달린 리포터 유전자와 그 유전자의 3' 조절 서열, 그 리포터 유전자의 하위에 위치한 에프린-A5-Fc 유전자와 그 유전자의 3' 조절 서열, 및 그 에프린-A5-Fc 유전자의 하위에 위치한 에프린-A5의 인핸서를 포함하는 재조합 발현벡터를 제작하는 단계, 및 (Ⅱ) 그 재조합 발현벡터를 숙주 유기체인 마우스에 도입시키는 단계를 포함하되,상기 에프린-A5의 프로모터는 서열번호 2에 개시된 서열로 구성되며,상기 에프린-A5-Fc 유전자는 서열번호 4에 개시된 서열로 구성되고,상기 에프린-A5의 인핸서 인자는 서열번호 1에 개시된 서열로 구성되는 것을 특징으로 하는 형질전환 마우스의 제조 방법
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제6항에 있어서,상기 (Ⅰ)의 재조합 발현벡터의 제작 단계는, (Ⅰ-1) 플라스미드 벡터에, (a) 에프린-A5 유전자의 첫 번째 엑손 서열의 5'쪽 말단 서열을 기초로 제작되고 에프린-A5의 프로모터로서 기능하는 서열번호 2에 개시된 서열로 구성된 호모로지 A 암 서열, (b) 그 호모로지 A 암의 하위(downstream)에 위치하고 박테리오파지 P1의 Cre 재조합 효소가 특이적으로 인식하는 재조합 서열인 loxP 서열이 양끝에 달린 리포터 유전자와 그 유전자의 3' 조절 서열, (c) 그 리포터 유전자의 하위에 위치한 에프린-A5-Fc 유전자와 3' 조절 서열, (d) 그 에프린-A5-Fc 유전자의 하위에 위치하고 양끝에 효모(Saccharomyces cerevisiae) 유래의 Flp 재조합 효소가 특이적으로 인식하는 FRT 재조합 서열이 달린 항생제 내성 유전자, 그리고 (e) 그 항생제 내성 유전자 하위에 위치하고 에프린-A5 유전자의 첫 번째 엑손 서열의 3'쪽 말단 서열을 기초로 제작되며 서열번호 3에 개시된 서열로 구성되는 호모로지 B 암 서열을 삽입하여, 표적벡터를 제작하는 단계, (Ⅰ-2) 상기 제작된 표적벡터를 에프린-A5 인핸서 인자를 포함하고 에프린-A5 첫 번째 엑손 서열을 포함하는 BAC 숙주세포에, 동종 재조합을 유도하는 재조합 효소 유전자의 발현벡터와 함께 형질전환시켜 상기 재조합 효소에 의하여 상기 표적벡터의 호모로지 A 암과 B 암을 매개로 표적벡터를 BAC 첫 번째 엑손 서열에 동종 재조합시키는 단계, (Ⅰ-3) 상기 표적벡터의 항생제 내성 유전자에 의해서 항생제에 내성을 가지는, 상기 표적벡터가 BAC에 재조합된 형질전환 BAC 숙주세포를 선별하는 단계, 및 (Ⅰ-4) 그 숙주세포에서 표적벡터가 재조합된 BAC를 분리하는 단계를 포함하여 구성되는 것을 특징으로 하는 형질전환 마우스의 제조 방법
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제7항에 있어서,상기 (Ⅰ-2) 단계의 동종 재조합을 유도하는 재조합 효소는 람다 파아지 재조합 효소인 것을 특징으로 하는 형질전환 마우스의 제조 방법
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제7항에 있어서,상기 (Ⅰ-3) 단계 후에, 항생제 내성 유전자의 양끝의 상기 재조합 서열을 특이적으로 인식하여 그 재조합 서열 사이의 항생제 유전자를 절단 결합시키는 재조합 효소를 포함하는 발현벡터를 그 BAC 숙주세포에 형질전환시켜, 상기 재조합 발현 벡터의 항생제 내성 유전자를 제거하는 단계가 추가로 포함되는 것을 특징으로 하는 형질전환 마우스의 제조 방법
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제6항에 있어서,상기 리포터 유전자는 녹색 형광 단백질(GFP) 유전자, 적색 형광 단백질(RFP) 유전자, 루시퍼라제 유전자, GUS 유전자, lacZ 유전자 및 클로람페니콜 아세틸트란스퍼라제 유전자로 구성된 군에서 선택된 유전자인 것을 특징으로 하는 형질전환 마우스의 제조 방법
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제6항에 있어서,상기 (Ⅱ) 단계는 상기 (Ⅰ) 단계의 발현벡터를 수정란에 도입하고 그 수정란을 대리모에 이식하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 형질전환 마우스의 제조 방법
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