| 1 |
1
LoxP (locus of X-over P1) 부위, 생쥐 Mis8α 게놈 유전자 1번째 엑손(exon)의 5'방향에서 두 번째로 가까운 EcoRI 절단부위에서부터 2번 엑손까지의 유전자 절편, 네오마이신 저항 유전자 및 EcoRI 절단부위의 순서로 이루어진 DNA 서열을 포함하는 생쥐 Mis18α 유전자 적중 벡터(targeting vector)
|
| 2 |
2
제 1항에 있어서, 상기 네오마이신 저항 유전자는 FRT (Flippase Recognition Target) 부위, LoxP 부위, 네오마이신 저항 유전자, FRT 부위 및 LoxP 부위의 순서로 이루어진 것을 특징으로 하는 생쥐 Mis18α 유전자 적중 벡터
|
| 3 |
3
제1항의 생쥐 Mis18α 유전자 적중 벡터가 도입되어 상동재조합(homologous recombination) 된 생쥐의 배아간세포(embryo stem cell)
|
| 4 |
4
제3항의 배아간세포를 정상 생쥐의 낭배(blastocyst)에 미세주입하고 이를 대리모에 착상시켜 제조한 키메라(chimera) 생쥐
|
| 5 |
5
제4항의 키메라 생쥐를 정상 생쥐와 교배시켜 제조한 Mis18αf/+ 유전자형을 갖는 Mis18α 한쪽 유전자가 플록스드(floxed)된 생쥐
|
| 6 |
6
제5항의 Mis18αf/+ 유전자형 생쥐와 Cre 재조합효소를 발현하는 생쥐를 교배하여 제조한 Mis18α+/Δ 유전자형을 갖는 Mis18α 한쪽 유전자 결핍 생쥐
|
| 7 |
7
제6항의 Mis18α 한쪽 유전자 결핍 생쥐를 교배시켜 제조되는 Mis18αΔ/Δ 유전자형을 갖는 Mis18α 유전자 결핍 생쥐 배아
|
| 8 |
8
유전체(genome) 상의 Mis18α 한쪽 유전자가 제거된 Mis18α+/Δ 형질전환 생쥐를 제조하는 방법에 있어서,제 1항에 따른 생쥐 Mis18α 유전자 적중 벡터를 제작하는 단계;상기 적중 벡터를 배아간세포에 도입하여 상동재조합에 의해 Mis18α 유전자의 일부가 제거된 배아간세포 클론을 얻는 단계;상기 Mis18α 유전자 결핍 배아간세포를 정상 생쥐의 낭배(blastocyte)의 내괴세포(inner cell mass)에 미세주입하고 이를 대리모 생쥐에 착상시켜 키메라(chimera) 생쥐를 얻는 단계; 및상기 키메라 생쥐로부터 교배를 통해 Mis18α+/Δ 유전자형을 갖는 Mis18α 한쪽 유전자 결핍 생쥐를 얻는 단계를 포함하는 Mis18α 유전자 결핍 생쥐의 제조방법
|
| 9 |
9
삭제
|
| 10 |
10
제 8항에 있어서,상기 키메라 생쥐로부터 교배를 통해 Mis18α+/Δ 유전자형을 갖는 Mis18α 한쪽 유전자 결핍 생쥐를 얻는 단계는,상기 키메라 생쥐를 Flp 재조합 효소(Flippase)를 발현하는 생쥐와 교배시키는 단계;상기 교배를 통해 얻은 자손 중에서 Flp 재조합 효소를 발현하면서 동시에 Mis18α 한쪽 유전자 플록스드(floxed)(f/+) 유전형을 보이는 생쥐를 선별하는 단계;상기 선별된 생쥐를 정상 생쥐와 교배시켜 네오마이신 저항 유전자가 제거된 생쥐를 얻는 단계;상기 네오마이신 저항 유전자가 제거된 생쥐를 Cre 재조합 효소를 발현하는 생쥐와 교배시키는 단계;상기 교배를 통해 얻은 자손 중 Mis18α 한쪽 유전자 플록스드(f/+) 유전형을 갖는 동시에 Cre 재조합 효소를 발현하는 생쥐들을 선별하는 단계; 및상기 선별된 생쥐를 정상 생쥐와 교배시켜 Mis18α의 한쪽 유전자에서 1번 및 2번 엑손이 제거된 생쥐를 얻는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 Mis18α 유전자 결핍 생쥐의 제조방법
|
| 11 |
11
삭제
|
| 12 |
12
제 7항에 있어서, 상기 배아는 세포분열시 염색체 분열 이상으로 인해 개체로 발달하지 못하고 사멸하는 것을 특징으로 하는 Mis18αΔ/Δ 형질전환 생쥐 배아
|
| 13 |
13
암 또는 자가면역질환 치료제 및 예방제 후보물질을 제12항의 Mis18αΔ/Δ 배아에 처리하는 단계; 및 상기 치료물질을 처리한 배아와 처리하지 않은 Mis18αΔ/Δ 배아의 세포분열 과정을 비교하여 세포분열 능력을 회복시킨 물질을 선별하는 단계를 포함하는 암 또는 자가면역질환 치료체 및 예방제의 스크리닝 방법
|
| 14 |
14
삭제
|
