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배큘로바이러스의 다각체 프로모터, 상기 프로모터의 다운스트림에 위치한 IgM 시그널 펩타이드를 암호화하는 서열, 상기 IgM 시그널 펩타이드를 암호화하는 서열의 다운스트림에 위치한 IgG 결합 도메인을 암호화하는 서열, 상기 IgG 결합 도메인을 암호화하는 서열의 다운스트림에 위치한 제한효소 자리가 있는 클로닝 부위, 상기 클로닝 부위의 다운스트림에 위치한 전사 종결 서열, 상기 배큘로바이러스의 다각체 프로모터의 업스트림에 위치한 트랜스포존의 양 말단 반복서열 중 한 서열, 상기 전사 종결 서열의 다운스트림에 위치한 트랜스포존의 양 말단 반복서열 중 다른 서열 및 선택표지로서의 항생제 내성 유전자를 포함하는 재조합 배큘로바이러스 발현벡터
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제 1 항에 있어서, 상기 시그널 펩타이드를 암호화하는 서열은 IgM 시그널 펩타이드, GP64 시그널 펩타이드 및 꿀벌의 멜리틴 시그널 펩타이드로 구성된 그룹으로부터 선택되는 시그널 펩타이드를 암호화하는 서열인 것을 특징으로 하는 재조합 배큘로바이러스 발현벡터
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제 1 항에 있어서, 상기 IgG 결합 도메인은 스태파이로코커스 오리우스 (Staphylococcus aureus)의 단백질 A에서 유래된 것임을 특징으로 하는 재조합 배큘로바이러스 발현벡터
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제 1 항에 있어서, 상기 트랜스포존의 반복서열은 Tn1, Tn2, Tn3, Tn4, Tn5, Tn7, Tn9 및 Tn10으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 트랜스포존으로부터 유래된 것임을 특징으로 하는 재조합 배큘로바이러스 발현벡터
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제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 발현벡터는 상기 클로닝 부위에 당전이효소, 사이토카인 및 바이러스 구조 당단백질로 구성된 그룹으로부터 선택되는 효소를 암호화하는 외래 유전자가 추가적으로 포함되어 있는 것을 특징으로 하는 재조합 배큘로바이러스 발현벡터
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제 5 항에 있어서, 상기 당전이효소를 암호화 하는 외래 유전자는 시알산전이효소를 암호화 하는 외래 유전자인 것을 특징으로 하는 재조합 배큘로바이러스 발현벡터
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제 6 항에 있어서, 상기 시알산전이효소를 암호화 하는 외래 유전자는 시그널 펩타이드, 세포질 꼬리 부위 및 막통과 도메인이 제거된 활성 도메인만을 암호하는 유전자인 것을 특징으로 하는 재조합 배큘로바이러스 발현벡터
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다음과 같은 단계를 포함하는 곤충세포에서 외래 효소의 발현방법: (ⅰ) 배큘로바이러스의 다각체 프로모터, 상기 프로모터의 다운스트림에 위치한 시그널 펩타이드를 암호화하는 서열, 상기 시그널 펩타이드를 암호화하는 서열의 다운스트림에 위치한 IgG 결합 도메인을 암호화하는 서열, 상기 IgG 결합 도메인을 암호화하는 서열의 다운스트림에 위치한 특정 효소를 암호화하는 외래 유전자, 상기 외래 유전자의 다운스트림에 위치한 전사 종결 서열, 상기 배큘로바이러스의 다각체 프로모터의 업스트림에 위치한 트랜스포존의 양 말단 반복서열 중 한 서열, 상기 전사 종결 서열의 다운스트림에 위치한 트랜스포존의 양 말단 반복서열 중 다른 서열 및 선택표지로서의 항생제 내성 유전자를 포함하는 재조합 배큘로바이러스 발현벡터로 배큘로바이러스 지놈 DNA 및 상기 트랜스포존의 반복서열과 동종의 트랜스포존 활성서열을 갖는 백미드를 포함하고 있는 세포를 형질전환시켜 재조합 백미드를 형성시키는 단계; (ⅱ) 상기 재조합 백미드를 세포로부터 분리하는 단계; (ⅲ) 상기 분리된 재조합 백미드를 곤충세포에 형질감염시키는 단계; 및 (ⅳ) 상기 형질감염된 곤충세포를 배양하는 단계
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제 8 항에 있어서, 상기 발현방법은 (ⅴ) 형질감염된 곤충세포로부터 재조합 배큘로바이러스를 분리하고 이를 곤충세포에 2차로 형질감염시키는 단계; 및 (ⅵ) 형질감염된 곤충세포를 배양하는 단계를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 곤충세포에서 외래 효소의 발현방법
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제 8 항에 있어서, 상기 시그널 펩타이드를 암호화하는 서열은 IgM 시그널 펩타이드, GP64 시그널 펩타이드 및 꿀벌의 멜리틴 시그널 펩타이드로 구성된 그룹으로부터 선택되는 시그널 펩타이드를 암호화하는 서열인 것을 특징으로 하는 곤충세포에서 외래 효소의 발현방법
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제 8 항에 있어서, 상기 IgG 결합 도메인은 스태파이로코커스 오리우스 (Staphylococcus aureus)의 단백질 A에서 유래된 것임을 특징으로 하는 곤충세포에서 외래 효소의 발현방법
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제 8 항에 있어서, 상기 재조합 배큘로바이러스 발현벡터내에 삽입되어 있는 외래 유전자는 당전이효소, 사이토카인 및 바이러스 구조 당단백질로 구성된 그룹으로부터 선택되는 효소를 암호화하는 유전자인 것을 특징으로 하는 곤충세포에서 외래 효소의 발현방법
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제 12 항에 있어서, 상기 당전이효소를 암호화 하는 유전자는 시알산전이효소를 암호화 하는 유전자인 것을 특징으로 하는 곤충세포에서 외래 효소의 발현방법
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제 13 항에 있어서, 상기 시알산전이효소를 암호화 하는 외래 유전자는 시그널 펩타이드, 세포질 꼬리 부위 및 막통과 도메인이 제거된 활성 도메인만을 암호하는 유전자인 것을 특징으로 하는 곤충세포에서 외래 효소의 발현방법
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제 8 항에 있어서, 상기 트랜스포존의 반복서열은 Tn1, Tn2, Tn3, Tn4, Tn5, Tn7, Tn9 및 Tn10으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 트랜스포존으로부터 유래된 것임을 특징으로 하는 곤충세포에서 외래 효소의 발현방법
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제 8 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 곤충세포는 SF-9, SF-21, 하이 파이브 세포, Tn-368 및 Tn-368A로 구성된 그룹으로부터 선택되는 세포인 것을 특징으로 하는 곤충세포에서 외래 효소의 발현방법
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상기 제 8 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 따른 곤충세포에서의 발현방법에 의해 발현된 외래 효소를 함유하는 배양물을 정제하는 단계를 포함하는 외래 효소의 제조방법
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제 17 항에 있어서, 상기 곤충세포는 SF-9, SF-21, 하이 파이브 세포, Tn-368 및 Tn-368A로 구성된 그룹으로부터 선택되는 세포인 것을 특징으로 하는 곤충세포에서 외래 효소의 외래 효소의 제조방법
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제 17 항에 있어서, 상기 정제 단계는 상기 발현된 외래 효소에 결합되어 있는 IgG 결합 도메인에 대하여 친화성을 나타내는 IgG가 결합된 레진으로 충진된 컬럼을 이용하여 실시되는 것을 특징으로 하는 외래 효소의 제조방법
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