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⑴ 돼지의 수컷 종으로부터 정자 세포를 수집하는 단계;
⑵ 상기 복수의 정자 세포를 서열번호 1 내지 4의 서열을 갖는 프로브를 이용하여 CISH (Chromogenic in situ hybridization) 분석으로 분류하는 단계;
⑶ 상기 성 선별된 정자를 돼지 난자의 세포질 내에 주입하여 인공 수정시키는 단계; 및
⑷ 목적하는 성별의 돼지 산자 (産子)를 생산하는 단계; 를 포함함을 특징으로 하는, 특정 성별을 갖는 돼지의 생산방법
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제1항에 있어서
상기 성 선별된 정자의 생존률을 측정하는 단계를 더 포함함을 특징으로 하는 방법
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제2항에 있어서,
상기 성 선별된 정자의 DNA 손상 여부를 확인하는 단계를 더 포함함을 특징으로 하는 방법
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제2항에 있어서,
상기 생존률 측정은 MTT 환원분석을 사용하여 측정하는 단계임을 특징으로 하는 방법
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제 3항에 있어서,
상기 DNA 손상여부 확인은 MTT 환원 분석법으로 생존이 확인된 정자를 겔 속에 넣고 굳힌 후, 겔 속의 세포를 용해액 속에 넣어 용해시킨 뒤, 전기영동을 한 다음, DNA 부착 염색을 하여 관찰함으로써 DNA 손상여부를 확인하는 단계로 이루어짐을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서,
상기 (2) 단계의 CISH 분석은,
돼지 정자의 X- 또는 Y-염색체에 특이적인 서열번호 1 내지 4의 서열을 갖는 비오틸레이티브 프로브 (biotinylated probe)를 같이 슬라이드 상에 배양함으로써 프로브를 변성시키는 단계;
상기 슬라이드를 다시 배양하여, HRP-Streptavidin (Horseradish peroxidase-Streptavidin)과 반응시킨 후 세척한 다음 DAB (Diaminobenzidine)와 반응시키는 단계;
헤마톡실린 (hematoxylin)으로 대조염색시켜 확인하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법
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제14항에 있어서,
상기 프로브와 정자의 비율은 8:2, 5:5, 2:8로 이루어진 군 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법
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제14항에 있어서,
상기 프로브와 정자의 비율은 1:1인 것을 특징으로 하는 방법
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제 14항에 있어서,
상기 프로브의 변성 단계는 고무시멘트 또는 테이프를 이용하는 것을 포함한 씰링 방법으로 슬라이드를 씰링하는 단계를 더 포함함을 특징으로 하는 방법
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제14항에 있어서,
상기 확인 단계는 정자 두부(頭部)의 첨체에 치우친 전방에서 프로브를 탐지하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법
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