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분자 비컨을 이용한 엑소좀 miRNA의 검출 방법(METHOD FOR DETECTING EXOSOME miRNA USING MOLECULAR BEACON)

  • 기술번호 : KST2016004754
  • 담당센터 : 인천기술혁신센터
  • 전화번호 : 032-420-3580
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 분자 비컨(molecular beacon)을 이용한 엑소좀에 존재하는 유전자를 검출하는 방법에 관한 것으로, 관심 질병이 의심되는 세포로부터 나온 엑소좀을 분리하는 제 1단계; 비파쇄된 엑소좀 자체에서, 관심 질병과 연관된 특이적인 유전자와 상보적으로 결합할 수 있는 염기서열 말단에 검출라벨 및 검출라벨과 결합하는 ??처(quencher)가 결합된 분자 비컨(molecular beacon)을 엑소좀에 접촉시켜 엑소좀 내부에 도입시키는 제 2단계; 및 상기 엑소좀 내에 포함되어 있는 관심 질병과 관련된 유전자와 상기 분자 비컨(molecular beacon)이 특이적으로 결합될 때 분자 비컨에 결합된 검출라벨에서 나타나는 신호를 측정하는 제 3단계를 포함하는 것이다.본 발명의 분자 비컨(molecular beacon)을 이용한 엑소좀에 존재하는 유전자를 검출하는 방법은 종래의 검출 방법에 비해 신속성, 편리성, 정확성을 증대시킬 수 있으며, 보다 다양한 질병의 진단 방법을 통해 조기 진단이 어려운 질병에 대한 새로운 진단 가능성을 제시하여 암, 면역질환, 신경 질환 등에 대해 새로운 건강 진단 센서로 활용할 수 있다.
Int. CL C12Q 1/68 (2018.01.01) C12N 15/11 (2006.01.01)
CPC C12Q 1/6813(2013.01)
출원번호/일자 1020140066915 (2014.06.02)
출원인 인천대학교 산학협력단
등록번호/일자 10-1758428-0000 (2017.07.10)
공개번호/일자 10-2015-0139096 (2015.12.11) 문서열기
공고번호/일자 (20170718) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2014.06.02)
심사청구항수 1

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 인천대학교 산학협력단 대한민국 인천광역시 연수구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 이원종 대한민국 인천광역시 연수구
2 이지혜 대한민국 서울특별시 관악구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 차준용 대한민국 서울특별시 구로구 디지털로**길 ***(구로동) 제이엔케이디지털타워 ****호(거번국제특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 인천대학교 산학협력단 대한민국 인천광역시 연수구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2014.06.02 수리 (Accepted) 1-1-2014-0520416-18
2 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2014.10.14 수리 (Accepted) 4-1-2014-0091252-23
3 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search
2014.12.05 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
4 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search
2015.01.09 수리 (Accepted) 9-1-2015-0001327-67
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2016.01.28 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2016-0074681-21
6 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2016.03.04 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2016-0210677-59
7 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2016.03.04 수리 (Accepted) 1-1-2016-0210663-10
8 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2016.06.10 수리 (Accepted) 4-1-2016-5075573-17
9 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2016.07.26 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2016-0539435-35
10 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)
2016.09.22 수리 (Accepted) 1-1-2016-0917370-86
11 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2016.10.18 수리 (Accepted) 1-1-2016-1010671-74
12 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2016.10.18 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2016-1010672-19
13 거절결정서
Decision to Refuse a Patent
2017.02.22 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2017-0137960-11
14 [명세서등 보정]보정서(재심사)
Amendment to Description, etc(Reexamination)
2017.03.21 보정승인 (Acceptance of amendment) 1-1-2017-0278503-30
15 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2017.03.21 수리 (Accepted) 1-1-2017-0278502-95
16 보정요구서
Request for Amendment
2017.04.18 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2017-0276357-60
17 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2017.04.20 불수리 (Non-acceptance) 1-1-2017-0388171-77
18 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment
2017.04.20 수리 (Accepted) 1-1-2017-0388172-12
19 서류반려이유통지서
Notice of Reason for Return of Document
2017.04.24 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2017-0055533-74
20 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment
2017.04.28 수리 (Accepted) 1-1-2017-0420757-63
21 [반려요청]서류반려요청(반환신청)서
[Request for Return] Request for Return of Document
2017.04.28 수리 (Accepted) 1-1-2017-0418772-45
22 서류반려통지서
Notice for Return of Document
2017.05.01 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2017-0059324-21
23 등록결정서
Decision to Grant Registration
2017.07.09 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2017-0477962-87
24 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2019.10.14 수리 (Accepted) 4-1-2019-5212872-93
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번호 청구항
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세포로부터 나온 엑소좀(exosome)에 존재하는 유전자를 검출하기 위한 방법으로서,관심 질병이 의심되는 세포로부터 나온 엑소좀을 분리하는 제 1단계;비(非)파쇄된 엑소좀 자체에서, 관심 질병과 연관된 특이적인 유전자인 miRNA와 상보적으로 결합할 수 있는 염기서열 말단에 검출라벨 및 검출라벨과 결합하는 퀀처(quencher)가 결합된 분자 비컨(molecular beacon)을, 엑소좀에 접촉시켜 엑소좀 내부에 도입시키는 반응을 진행하는 제 2단계; 및상기 엑소좀 내에 포함되어 있는 miRNA와 상기 분자 비컨이 특이적으로 결합될 때 분자 비컨에 결합된 검출라벨에서 나타나는 형광신호를 측정하는 제 3단계;를 포함하며,상기 제 1단계는 관심 질병이 의심되는 세포를 FBS(Fetal Bovine Serum)가 포함된 배지에서 배양하는 단계를 포함하되, 초기 배지에서 배양한 후 상기 세포가 70% 내지 80% 자랐을 때 엑소좀이 제거된 FBS를 포함하는 배지로 교체하는 단계를 추가적으로 포함하고,상기 제 2단계에서, 상기 분자 비컨과 엑소좀의 접촉은 분자 비컨을 포함하는 용액에 엑소좀을 첨가 및 혼합하여 이루어지는 것으로, SLO(Streptolysin O) 및 TCEP(Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride)가 혼합된 혼합용액 하에서 분자 비컨이 엑소좀과 접촉되는 것이며,상기 SLO는 상기 TCEP에 의해 활성화되어 엑소좀 막에 존재하는 콜레스테롤을 밀어내고 엑소좀 막에 구멍을 뚫어 분자 비컨의 엑소좀 내부로의 운반 효율을 높여주는 것이고,상기 관심 질병이 의심되는 세포는 인간의 유방암 세포주인 MCF-7(Michigan Cancer Foundation-7) 세포이며,상기 miRNA는 miRNA-21이고,상기 분자 비컨은 양전하를 띠는 Cyanine 계열의 형광물질을 포함하는 것으로서, 하기 서열번호 1로 표시되는 염기서열을 갖는 것이며,상기 제 1단계에서, 엑소좀의 분리는 Total exosome isolation kit를 이용하여 수행되는 것이고,상기 제 2단계에서, 상기 분자 비컨과 엑소좀의 접촉에 사용되는 용액은 PBS(Phosphate Buffer Saline)로 희석된 엑소좀을 포함하는 용액으로서, 분자 비컨의 농도가 100 nM, 엑소좀의 농도가 10 vol%, SLO의 농도가 0
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 교육부 인천대학교 산학협력단 신진연구지원사업 Molecular beacon을 이용한 살아 있는 세포에서 mRNA 검출기술 개발 및 생물학적 응용