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(i) 두 가지 이상의 유전자형 DNA가 혼합된 분리된 시료 내의 특정 유전자형 DNA를, 상기 특정 유전자형 특이적인 뉴클레아제를 이용하여 절단하여 제거하는 단계; 및(ii) 상기 특정 유전자형 DNA가 제거된 시료 내에 존재하는 다른 유전자형 DNA를 분석하는 단계를 포함하고,상기 (ii) 단계는,(b) 상기 특정 유전자형 DNA가 제거된 시료 내에 존재하는 다른 유전자형 DNA를 증폭하는 단계; 및(c) 상기 증폭된 다른 유전자형 DNA를 분석하는 단계를 포함하여 수행하는 것이고,상기 뉴클레아제는 상기 특정 유전자형 DNA에 특이적인 가이드 RNA 및 Cas9 단백질로 이루어진 RGEN (RNA-guided engineered nuclease)인,유전자형 분석 방법
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제1항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 스트렙토코커스 피요젠스 (Streptococcus pyogenes) 유래의 것이고, 상기 가이드 RNA 는 crRNA (CRISPR RNA) 및 tracrRNA(trans-activating crRNA)를 포함하는 이중 RNA (dualRNA) 또는 sgRNA (single-chain RNA)인, 유전자형 분석 방법
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제1항에 있어서, 상기 (i) 단계에서 특정 유전자형 DNA는 야생형 DNA로서, 분리된 시료 내의 야생형 DNA에 특이적인 뉴클레아제에 의해 상기 야생형 DNA를 절단하여 시료 내에서 제거하는 단계이고;상기 (ii) 단계의 다른 유전자형 DNA는 암 특이적인 돌연변이를 포함하는 DNA로서, 상기 야생형 DNA가 제거된 시료 내의 암 특이적인 돌연변이 DNA를 분석하는 단계를 포함하는, 암의 진단을 위한 정보를 제공하기 위한, 유전자형 분석 방법
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제4항에 있어서, 상기 암의 진단은 암의 초기 진단인 것인, 유전자형 분석 방법
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제4항에 있어서, 상기 암의 진단은 암의 예후를 예측하는 것인 유전자형 분석 방법
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제4항에 있어서, 두 가지 이상의 유전자형 DNA가 혼합된 분리된 시료는 암 의심 개체로부터 분리된 혈액 시료인, 유전자형 분석 방법
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제1항에 있어서,상기 (i) 단계에서 특정 유전자형 DNA는 세포 또는 장기 이식을 받은 개체의 DNA로서, 상기 (i) 단계는 두 가지 이상의 유전자형 DNA가 포함된, 세포 또는 장기 이식을 받은 개체의 분리된 시료에서 상기 개체의 DNA를, 이에 특이적인 뉴클레아제를 이용하여 절단하여 제거하는 단계이고,상기 (ii) 단계에서 다른 유전자형 DNA는 이식된 세포 또는 장기의 DNA로서, 상기 (ii) 단계는 상기 개체의 DNA가 제거된 시료 내에, 이식된 세포 또는 장기의 DNA를 분석하는 단계를 포함하는, 세포 또는 장기 이식을 받은 개체의 예후 예측에 대한 정보를 제공하기 위한, 유전자형 분석 방법
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제1항에 있어서,상기 (i) 단계에서 특정 유전자형 DNA는 피해자의 DNA로서, 상기 (i) 단계는 두 가지 이상의 유전자형 DNA가 포함된, 범죄현장에서 유래한 분리된 DNA 시료에서 상기 피해자의 DNA를, 이에 특이적인 뉴클레아제를 이용하여 절단하여 제거하는 단계이고,상기 (ii) 단계에서 다른 유전자형 DNA는 가해자의 DNA로서, 상기 (ii) 단계는 상기 피해자의 DNA가 제거된 시료 내에, 가해자의 DNA를 분석하는 단계를 포함하는, 범죄 현장에 대한 정보를 수집하기 위한,유전자형 분석 방법
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제1항에 있어서,상기 (i) 단계에서 특정 유전자형 DNA는 가해자의 DNA로서, 상기 (i) 단계는 두 가지 이상의 유전자형 DNA가 포함된, 범죄현장에서 유래한 분리된 DNA 시료에서 상기 가해자의 DNA를, 이에 특이적인 뉴클레아제를 이용하여 절단하여 제거하는 단계이고,상기 (ii) 단계에서 다른 유전자형 DNA는 피해자의 DNA로서, 상기 (ii) 단계는 상기 가해자의 DNA가 제거된 시료 내에, 피해자의 DNA를 분석하는 단계를 포함하는, 범죄 현장에 대한 정보를 수집하기 위한,유전자형 분석 방법
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(i) 특정 유전자형 DNA에 특이적인 가이드 RNA (guide RNA, gRNA) 및 뉴클레아제 기능이 불활성화된 Cas9 단백질 (dCas9) 을 이용하여, 두 가지 이상의 유전자형 DNA가 혼합된 분리된 시료 내의 특정 유전자형 DNA를, 다른 유전자형 DNA를 인식하는 RGEN의 절단으로부터 매스킹하여 보호하여, 상기 다른 유전자형 DNA를 절단하여 제거하는 단계; 및(ii) 상기 다른 유전자형 DNA가 제거된 시료 내에 존재하는 특정 유전자형 DNA를 분석하는 단계를 포함하고,상기 (ii) 단계는,(b) 상기 다른 유전자형 DNA가 제거된 시료 내의 특정 유전자형 DNA를 증폭하는 단계; 및(c) 상기 증폭된 특정 유전자형 DNA를 분석하는 단계를 포함하여 수행하는 것인,유전자형 분석 방법
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제11항에 있어서, 상기 불활성화된 Cas9 단백질 (dCas9)은 스트렙토코커스 피요젠스 (Streptococcus pyogenes) 유래의 Cas9 단백질에 D10A 돌연변이와 H840A 돌연변이가 도입된 것인, 유전자형 분석 방법
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제11항에 있어서, 상기 (i) 단계에서 다른 유전자형 DNA는 야생형 DNA이고, 특정 유전자형 DNA는 암 특이적인 돌연변이를 포함하는 DNA로서, 상기 암 특이적인 돌연변이를 포함하는 특정 유전자형 DNA에 특이적으로 결합하는 가이드 RNA 및 불활성화된 Cas9 단백질 (dCas9)을 이용하여, 야생형 DNA에 특이적인 RGEN의 절단으로부터 특정 유전자형 DNA를 매스킹하여 보호하여, 분리된 시료 내의 야생형 DNA를 절단하여 제거하는 단계; 및 (ii) 상기 야생형 DNA가 제거된 시료 내에 존재하는 암 특이적 돌연변이를 포함하는 DNA를 분석하는 단계를 포함하는, 암의 진단을 위한 정보를 제공하기 위한,유전자형 분석 방법
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제13항에 있어서, 상기 암의 진단은 암의 초기 진단인 것인 유전자형 분석 방법
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제13항에 있어서, 상기 암의 진단은 암의 예후를 예측하는 것인 유전자형 분석 방법
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제13항에 있어서, 두 가지 이상의 유전자형 DNA가 혼합된 분리된 시료는 암 의심 개체로부터 분리된 혈액 시료인, 유전자형 분석 방법
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제11항에 있어서,상기 (i) 단계에서 다른 유전자형 DNA는 세포 또는 장기 이식을 받은 개체의 DNA로서, 특정 유전자형 DNA는 이식된 세포 또는 장기의 DNA로서, 상기 이식된 세포 또는 장기의 DNA에 특이적으로 결합하는 가이드 RNA 및 불활성화된 Cas9 단백질 (dCas9)을 이용하여, 세포 또는 장기 이식을 받은 개체의 DNA에 특이적인 RGEN의 절단으로부터 상기 특정 유전자형 DNA를 매스킹하여 보호하여, 분리된 시료 내의 세포 또는 장기 이식을 받은 개체의 DNA를 절단하여 제거하는 단계; 및 (ii) 상기 세포 또는 장기 이식을 받은 개체의 DNA가 제거된 시료 내에 존재하는 이식된 세포 또는 장기의 DNA를 분석하는 단계를 포함하는, 세포 또는 장기 이식을 받은 개체의 예후 예측에 대한 정보를 제공하기 위한,유전자형 분석 방법
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제11항에 있어서,상기 (i) 단계에서 다른 유전자형 DNA는 피해자의 DNA로서, 특정 유전자형 DNA는 가해자의 DNA로서, 상기 가해자의 DNA에 특이적으로 결합하는 가이드 RNA 및 불활성화된 Cas9 단백질 (dCas9)을 이용하여, 피해자의 DNA에 특이적인 RGEN의 절단으로부터 상기 특정 유전자형 DNA를 매스킹하여 보호하여, 분리된 시료 내의 피해자의 DNA를 절단하여 제거하는 단계; 및 (ii) 상기 피해자의 DNA가 제거된 시료 내에 존재하는 가해자의 DNA를 분석하는 단계를 포함하는, 범죄 현장에 대한 정보를 수집하기 위한,유전자형 분석 방법
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제11항에 있어서,상기 (i) 단계에서 다른 유전자형 DNA는 가해자의 DNA로서, 특정 유전자형 DNA는 피해자의 DNA로서, 상기 피해자의 DNA에 특이적으로 결합하는 가이드 RNA 및 불활성화된 Cas9 단백질 (dCas9)을 이용하여, 가해자의 DNA에 특이적인 RGEN의 절단으로부터 상기 특정 유전자형 DNA를 매스킹하여 보호하여, 분리된 시료 내의 가해자의 DNA를 절단하여 제거하는 단계; 및 (ii) 상기 가해자의 DNA가 제거된 시료 내에 존재하는 피해자의 DNA를 분석하는 단계를 포함하는, 범죄 현장에 대한 정보를 수집하기 위한,유전자형 분석 방법
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제11항에 있어서, 상기 불활성화된 Cas 단백질은 Cas 단백질의 DNA 절단 활성이 결여된 것인, 유전자형 분석 방법
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제20항에 있어서, 상기 불활성화된 Cas 단백질은 D10A, H840A 또는 D10A/H840A 돌연변이를 가지는 Cas9 단백질의 변이체인, 유전자형 분석 방법
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(i) 세균 또는 바이러스 DNA를 포함하는 분리된 시료에 비병원성 세균 또는 비병원성 바이러스 DNA에 특이적인 뉴클레아제를 처리하여 비병원성 세균 또는 비병원성 바이러스 DNA를 절단하여 시료 내에서 제거하는 단계; 및 (ii) 상기 비병원성 세균 또는 바이러스 DNA가 제거된 시료 내에 병원성 세균 또는 병원성 바이러스 DNA를 분석하는 단계를 포함하고,상기 (ii) 단계는,(b) 상기 비병원성 세균 또는 바이러스 DNA가 제거된 시료 내의 병원성 세균 또는 병원성 바이러스 DNA를 증폭하는 단계; 및(c) 상기 증폭된 병원성 세균 또는 병원성 바이러스 DNA를 분석하는 단계를 포함하여 수행하는 것이고,상기 뉴클레아제는 상기 비병원성 세균 또는 비병원성 바이러스 DNA에 특이적인 가이드 RNA 및 Cas9 단백질로 이루어진 RGEN (RNA-guided engineered nuclease)인,시료 내 DNA의 유전자형 분석 방법
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제22항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 스트렙토코커스 피요젠스 (Streptococcus pyogenes) 유래의 것이고, 상기 가이드 RNA 는 crRNA (CRISPR RNA) 및 tracrRNA(trans-activating crRNA)를 포함하는 이중 RNA (dualRNA) 또는 sgRNA (single-chain RNA)인, 방법
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(i) 병원성 세균 또는 바이러스 DNA 특이적 가이드 RNA 및 뉴클레아제 기능이 불활성화된 Cas9 단백질 (dCas9)을 이용하여, 병원성 세균 또는 바이러스 DNA를 비병원성 세균 또는 바이러스에 특이적인 RGEN의 절단으로부터 매스킹하여 보호하여, 분리된 시료 내의 비병원성 세균 또는 바이러스 DNA를 시료 내에서 절단하여 제거하는 단계; 및(ii) 상기 비병원성 세균 또는 바이러스 DNA가 제거된 시료에서 병원성 세균 또는 바이러스 DNA를 분석하는 단계를 포함하고,상기 (ii) 단계는,(b) 상기 비병원성 세균 또는 바이러스 DNA가 제거된 시료 내의 병원성 세균 또는 바이러스 DNA를 증폭하는 단계; 및(c) 상기 증폭된 병원성 세균 또는 바이러스 DNA를 분석하는 단계를 포함하여 수행하는 것인, 시료 내 DNA의 유전자형 분석 방법
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