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(1) 개의 정소를 수득하는 단계;(2) 상기 수득한 정소로부터 정소세포를 분리하는 단계;(3) 상기 분리한 정소세포를 섬유모세포생장인자(FGF, fibroblast growth factor)가 함유된 배지를 이용하여 젤라틴이 코팅된 배양접시에서 배양하는 단계;를 포함하며,상기 (1)단계에서 정소는 50 내지 80일령 개로부터 수득하는 것을 특징으로 하는 개의 정원줄기세포를 체외배양하는 방법
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제 1항에 있어서,상기 (2)단계에서 정소세포는 정소조직에 콜라게나제, DNAse, 콩 트립신 억제제 및 히알루로니다제를 첨가하여 1차 처리한 후, 콜라게나제, DNAse 및 콩 트립신 억제제를 첨가하여 2차 처리하여 분리하는 것을 특징으로 하는 개의 정원줄기세포를 체외배양하는 방법
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제 3항에 있어서,상기 1차 처리 및 2차 처리는 15 내지 37 ℃에서 실시하는 것을 특징으로 하는 개의 정원줄기세포를 체외배양하는 방법
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제 1항에 있어서,상기 (3)단계에서 배지는 Stempro 배지 또는 소태아혈청(FBS, fetal bovine serum)이 5 내지 15% 농도로 함유된 DMEM(Dulbecco's modified Eagle medium) 배지인 것을 특징으로 하는 개의 정원줄기세포를 체외배양하는 방법
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제 5항에 있어서,상기 Stempro 배지는 섬유모세포생장인자와 함께 인슐린-트랜스페린-셀레늄 혼합물, 글루코즈, L-글루타민, NEAA(비필수 아미노산) 용액, 비타민 용액, 페니실린-스트렙토마이신 혼합물, 소디움 피루베이트, 비타민 C, 락틱산, 에스트라디올, 프로게스테론, 소 혈청 알부민(BSA, bovine serum albumin), 녹아웃 혈청 대체물(knockout serum replacement), 표피생장인자(EGF, epidermal growth factor), 신경교세포 유래 신경영양인자(GDNF, glial cell line-derived neurotrophic factor) 및 백혈병억제인자(LIF, leukemia inhibitory factor)를 포함하는 것을 특징으로 하는 개의 정원줄기세포를 체외배양하는 방법
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제 5항에 있어서,상기 소태아혈청이 함유된 DMEM 배지는 섬유모세포생장인자와 함께 L-글루타민, β-메르캅토에탄올, NEAA(비필수 아미노산) 용액, 페니실린, 스트렙토마이신, 표피생장인자(EGF, epidermal growth factor), 신경교세포 유래 신경영양인자(GDNF, glial cell line-derived neurotrophic factor) 및 백혈병억제인자(LIF, leukemia inhibitory factor)를 포함하는 것을 특징으로 하는 개의 정원줄기세포를 체외배양하는 방법
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제 1항에 있어서,상기 (3)단계에서 배양은 30 내지 37 ℃에서 실시하는 것을 특징으로 하는 개의 정원줄기세포를 체외배양하는 방법
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