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YlMpo1 과발현을 이용한 만노스인산화 증대 방법(Method for Increasing Mannosylphosphorylation by Overexpression of YlMpo1)

  • 기술번호 : KST2016008652
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 YlMpo1 과발현을 이용한 만노스인산화 증대 방법에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 효모 특이적인 당사슬 생합성 경로가 제거된 재조합 효모에서 YlMpo1 단백질을 과발현하여 바이-만노스인산화된(bi-mannosylphosphorylated) 당사슬이 부가된 단백질을 제조하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법으로 제조된 바이-만노스인산화된(bi-mannosylphosphorylated) 당사슬은 효소 또는 화학적인 방법으로 손쉽게 두 개의 만노스-6-인산이 부가된 바이-인산화된(bi-phosphorylated) 당사슬로 변환된 후, 만노시다제(mannosidase) 처리에 의한 트리밍(trimming) 과정을 거쳐서 만노스-6-인산 수용체에 높은 결합 친화력을 가진 라이소좀 타겟팅 능력이 우월한 구조의 당사슬(P2-Man6GlcNAc2)로 변환할 수 있다. 따라서 본 발명은 효모 특이적인 당사슬 생합성 경로가 제거된 효모에 YlMpo1을 과발현시켜서 높은 함량의 바이-만노스인산화된 당사슬이 부가된 당단백질을 생산함으로써 라이소좀 타겟팅 능력이 우월한 당단백질을 제공할 수 있다.
Int. CL C12P 21/02 (2006.01) C12N 1/19 (2006.01) C12R 1/865 (2006.01)
CPC C12N 15/81(2013.01)C12N 15/81(2013.01)C12N 15/81(2013.01)C12N 15/81(2013.01)
출원번호/일자 1020140127144 (2014.09.23)
출원인 한국생명공학연구원
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2016-0035484 (2016.03.31) 문서열기
공고번호/일자 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2015.09.23)
심사청구항수 15

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국생명공학연구원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 오두병 대한민국 대전광역시 유성구
2 권오석 대한민국 대전광역시 유성구
3 김영훈 대한민국 대전광역시 유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 손민 대한민국 서울특별시 송파구 법원로 ***, *층(문정동)(특허법인한얼)
2 장제환 대한민국 서울특별시 강남구 언주로 ***, **층 (역삼동, 윤익빌딩)(*T국제특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국생명공학연구원 대전광역시 유성구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2014.09.23 수리 (Accepted) 1-1-2014-0904346-16
2 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2015.02.05 수리 (Accepted) 4-1-2015-0007152-08
3 [대리인선임]대리인(대표자)에 관한 신고서
[Appointment of Agent] Report on Agent (Representative)		 2015.08.11 수리 (Accepted) 1-1-2015-0779041-31
4 [심사청구]심사청구(우선심사신청)서
[Request for Examination] Request for Examination (Request for Preferential Examination)		 2015.09.23 수리 (Accepted) 1-1-2015-0926401-80
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2016.12.05 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2016-0878681-67
6 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2017.02.06 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2017-0122214-82
7 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2017.02.06 수리 (Accepted) 1-1-2017-0122213-36
8 등록결정서
Decision to grant		 2017.06.15 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2017-0417363-53
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번호 청구항
1 1
Mnn1, Mnn4, Mnn6 및 Och1을 코딩하는 유전자로 구성된 군에서 선택되는 적어도 하나 이상이 결실 또는 돌연변이 되어 있고, 야로위아 리포리티카(Yarrowia lipolytica) 유래 YlMpo1 (Y
2 2
제1항에 있어서, 상기 당단백질을 코딩하는 유전자가 추가로 도입되어 있는 것을 특징으로 하는 재조합 효모
3 3
제1항에 있어서, 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae)인 것을 특징으로 하는 재조합 효모
4 4
제1항에 있어서, 상기 YlMpo1은 서열번호 25 또는 서열번호 27의 아미노산 서열로 표시되는 것을 특징으로 하는 재조합 효모
5 5
제1항에 있어서, 상기 YlMpo1을 코딩하는 유전자는 서열번호 24 또는 서열번호 26의 염기서열로 표시되는 것을 특징으로 하는 재조합 효모
6 6
Mnn1 및 Och1을 코딩하는 유전자가 결실 또는 돌연변이 되어 있고, YlMpo1 (Y
7 7
제6항에 있어서, 상기 두 개의 만노스인산이 부가된 당사슬은 (Man-P)2-Man8GlcNAc2인 것을 특징으로 하는 재조합 효모
8 8
다음 단계를 포함하는 당단백질의 당사슬에 만노스-6-인산을 부가시키는 방법:(a) 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 재조합 효모를 배양하여 만노스인산이 부가된 당사슬을 가지는 당단백질을 생성하는 단계; (b) 상기 생성된 만노스인산이 부가된 당사슬을 가지는 당단백질을 회수하는 단계; 및(c) 상기 만노스인산이 부가된 당사슬의 바깥쪽 만노스를 제거하여 만노스-6-인산이 부가된 당사슬을 가지는 당단백질을 생성시키는 단계
9 9
제8항에 있어서, 상기 (c) 단계의 만노스인산이 부가된 당사슬의 바깥쪽 만노스를 제거하는 과정은 산 가수분해 또는 캡핑 제거(uncapping) 효소를 이용하는 것을 특징으로 하는 당단백질의 당사슬에 만노스-6-인산을 부가시키는 방법
10 10
제9항에 있어서, 상기 산은 0
11 11
다음의 (a) 또는 (b) 과정을 통해서 P2-Man6GlcNAc2 당사슬을 당단백질에 형성하는 방법:(a) (Man-P)2-Man8GlcNAc2 당사슬로부터 제8항의 방법을 이용하여 P2-Man8GlcNAc2 당사슬을 당단백질에 형성한 후에 α(1,2)-만노스를 제거할 수 있는 만노시다제(mannosidase)를 처리하여 P2-Man6GlcNAc2 당사슬을 당단백질에 형성하는 방법; 또는(b) (Man-P)2-Man8GlcNAc2 당사슬에 α(1,2)-만노스를 제거할 수 있는 만노시다제(mannosidase)를 처리하여 (Man-P)2-Man6GlcNAc2 당사슬을 당단백질에 형성한 후에 제8항의 방법을 이용하여 P2-Man6GlcNAc2 당사슬을 당단백질에 형성하는 방법
12 12
제8항의 방법을 이용하여 두 개의 만노스-6-인산이 부가된 당사슬을 가지는 당단백질의 제조방법
13 13
제12항에 있어서, 상기 당단백질은 P2-Man6GlcNAc2 당사슬을 가지는 당단백질의 제조방법
14 14
제12항에 있어서, 상기 당단백질은 병원체 단백질(pathogen protein), 리소좀 단백질(lysosomal protein), 성장 인자(growth factor), 사이토카인(cytokine), 케모카인(chemokine), 항체 또는 이의 항원-결합 단편(antigen-binding fragment), 또는 융합 단백질(fusion protein)인 것을 특징으로 하는 당단백질의 제조방법
15 15
제14항에 있어서, 상기 리소좀 단백질(lysosomal protein)은 리소좀 분해효소인 것을 특징으로 하는 당단백질의 제조방법
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1 WO2016048046 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY

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