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Cas9 단백질의 N-말단을 포함하는 제1 도메인을 발현하는 재조합 벡터 및 Cas9 단백질의 C-말단을 포함하는 제2 도메인을 발현하는 재조합 벡터를 각각 세포 내에 도입하는 단계를 포함하는, 유전자 발현 조절 방법으로서,상기 Cas9 단백질은 상기 제1 도메인 및 제2 도메인으로 이루어지는 것인, 방법
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제1항에 있어서, 상기 유전자 발현 조절은 유전체 교정, 유전자 발현 증가 또는 유전자 발현 감소인 것인, 방법
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제2항에 있어서, 상기 유전체 교정은 유전자 낙인 (knock-in) 또는 낙아웃 (knock-out)인 것인, 방법
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제2항에 있어서, 상기 유전체 교정은 유전체 상에 표적화된 돌연변이를 도입하거나, 유전체 상의 DNA를 결실, 중복, 역위, 교체 또는 재배열시키는 것인, 방법
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제1항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 야생형 Cas9, 불활성화된 Cas9 (dCas9), 또는 Cas9 니케이즈 (nickase) 인 것인, 방법
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제5항에 있어서, 상기 불활성화된 Cas9은 dCas9에 FokI 뉴클레아제 도메인을 연결한 RFN (RNA-guided FokI Nuclease), 또는 dCas9에 전사활성인자 (transcription activator) 또는 억제자 도메인 (repressor domain)을 연결한 것인, 방법
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제5항에 있어서, 상기 Cas9 니케이즈는 D10A Cas9 또는 H840A Cas9인 것인, 방법
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제1항에 있어서, 상기 Cas9 단백질은 스트렙토코커스 피요제네스(Streptococcus pyogenes), 프란시셀라 노비시다 (Francisella novicida), 스트렙토코커스 써모필러스 (Streptococcus thermophilus), 레지오넬라 뉴모필라 (Legionella pneumophila), 리스테리아 이노큐아 (Listeria innocua), 및 스트렙토코커스 뮤탄스 (Streptococcus mutans)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 유래인 것인, 방법
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제1항에 있어서, 상기 재조합 벡터는 플라스미드 벡터, 코즈미드 벡터, 또는 바이러스 벡터인 것인, 방법
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제9항에 있어서, 상기 바이러스 벡터는 레트로바이러스 (retrovirus) 벡터, 아데노바이러스 (adenovirus) 벡터, 아데노부속바이러스 (adeno-associated virus) 벡터, 및 헤르페스 심플렉스 바이러스 (herpes simplex virus) 벡터로 이루어진 군에서 선택되는 것인, 방법
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제1항에 있어서, 상기 도입된 각각의 벡터로부터 발현된 제1 도메인 및 제2 도메인이 융합되어, Cas9 단백질을 형성하는 단계를 추가로 포함하는 것인, 방법
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제1항에 있어서, 상기 제1 도메인 및 제2 도메인은 각각 400 bp (base pair) 내지 3
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제1항에 있어서, 상기 제1 도메인 및 제2 도메인은 각각 NLS (nuclear localization signal), HA-태그, 스플라이싱 도너 (splicing donor) 서열, 스플라이싱 억셉터 (splicing acceptor) 서열 또는 이들의 조합을 추가로 포함하는 것인, 방법
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제1항에 있어서, 상기 제1 도메인은 서열번호 3의 뉴클레오티드로 코딩되는 것이고, 제2 도메인은 서열번호 5의 뉴클레오티드로 코딩되는 것인, 방법
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제1항에 있어서, 상기 세포 내에 도입하는 단계에서 서열 특이적인 가이드 RNA(guide RNA)를 추가로 도입하는 방법
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제15항에 있어서, 상기 각각의 벡터, 가이드 RNA의 도입은 동시, 순차 또는 역순으로 수행되는 것인 방법
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Cas9 단백질의 N-말단을 포함하는 제1 도메인을 발현하는 재조합 벡터 및 Cas9 단백질의 C-말단을 포함하는 제2 도메인를 발현하는 재조합 벡터를 포함하는 조성물로서,상기 Cas9 단백질은 상기 제1 도메인 및 제2 도메인으로 이루어지는 것인, 조성물
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제17항에 있어서, 상기 조성물은 유전자 발현 조절용인 것인, 조성물
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제17항에 있어서, 상기 조성물은 서열 특이적인 가이드 RNA를 추가로 포함하는 것인, 조성물
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제17항의 조성물을 포함하는 유전자 발현 조절용 키트
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제20항에 있어서, 상기 키트는 서열 특이적인 가이드 RNA를 추가로 포함하는 것인, 키트
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Cas9 단백질의 N-말단을 포함하는 제1 도메인을 패키징하는 바이러스 벡터 및 Cas9 단백질의 C-말단을 포함하는 제2 도메인을 패키징하는 바이러스 벡터가 도입된 형질전환 세포로서,상기 Cas9 단백질은 상기 제1 도메인 및 제2 도메인으로 이루어지는 것인, 세포
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제22항의 세포의 배양액 또는 세포 용해물을 포함하는, 조성물
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제23항에 있어서, 상기 조성물은 유전자 발현 조절용인 것인, 조성물
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Cas9 단백질의 N-말단을 포함하는 제1 도메인을 발현하는 재조합 벡터 및 Cas9 단백질의 C-말단을 포함하는 제2 도메인을 발현하는 재조합 벡터를 각각 세포 내에 도입하는 단계를 포함하는, Cas9 단백질의 세포 내 제조 방법으로서,상기 Cas9 단백질은 상기 제1 도메인 및 제2 도메인으로 이루어지는 것인, 방법
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