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a) 서열번호 1의 아미노산 서열로 표시되는 인간 PAH(phenylalanine hydroxylase)를 코딩하는 유전자에서 페닐케톤뇨증(phenylketonuria)을 야기시키는 돌연변이를 포함하는, 돌연변이 PAH 유전자를 세포성점균에 형질전환 시키는 단계;b) 상기 돌연변이 PAH 유전자로 치환된 세포성점균을 티로신(tyrosine)이 결핍된 최소영양배지에서 배양시키는 단계; 및c) 상기 배양되는 세포성점균의 생장 속도를 측정하는 단계를 포함하는 세포성점균을 이용한 인간 돌연변이 PAH 활성분석 방법
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제 1항에 있어서, 상기 인간 PAH를 코딩하는 유전자는 서열번호 2의 염기서열을 갖는 hPAH cDNA인 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 페닐케톤뇨증을 야기시키는 돌연변이는 서열번호 1로 표시되는 인간 PAH의 아미노산 서열에서 F39L, K42I, L48S, I65T, R252Q, L255V, S349L 및 R408W로 구성된 군에서 선택되는 미스센스 돌연변이(missense mutation)인 것을 특징으로 하는 방법
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제3항에 있어서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 3 내지 18로 표시되는 프라이머를 이용하여 해당 코돈의 염기가 치환된 것을 특징으로 하는 방법
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제 1항에 있어서, 상기 세포성점균은 딕티오스텔리움 디스코이데움(Dictyostelium discoideum)인 것을 특징으로 하는 방법
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제 1항에 있어서, 상기 세포성점균의 생장 속도는 PAH 활성과 선형상관관계에 있는 것을 특징으로 하는 방법
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1) 서열번호 1의 아미노산 서열로 표시되는 인간 PAH(phenylalanine hydroxylase)에서 F39L, K42I, L48S,I65T, R252Q, L255V, S349L 및 R408W로 구성된 군에서 선택된 아미노산이 치환된 돌연변이 hPAH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 도입된 재조합벡터로 형질전환된 세포성점균을 제조하는 단계;2) 상기 형질전환된 세포성점균을 PAH에 대한 약리학적 샤프론(pharmacological chaperone) 후보물질이 첨가 된 티로신-결핍 최소배양배지에서 배양하는 단계; 및3) 상기 배양 후 세포성점균의 생장 속도가 후보물질 비처리군과 비교하여 증가된 경우, 상기 후보물질을 PAH에대한 약리학적 샤프론으로 판단하는 단계하기 단계를 포함하는, 세포성점균을 이용한 페닐케톤뇨증(phenylketonuria) 치료제의 스크리닝 방법
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제 7항에 있어서, 상기 1) 단계에서 재조합벡터는 돌연변이 hPAH 유전자가 pDXA-3H 벡터에 삽입된, 도 5에 개시된 재조합벡터인 것을 특징으로 하는, 세포성점균을 이용한 페닐케톤뇨증 치료제의 스크리닝 방법
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제 7항에 있어서, 상기 2) 단계에서 약리학적 샤프론 후보물질은 천연화합물, 합성화합물, 효소, 단백질 또는 핵산인 것을 특징으로 하는, 세포성점균을 이용한 페닐케톤뇨증 치료제의 스크리닝 방법
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서열번호 1의 아미노산 서열로 표시되는 인간 PAH(phenylalanine hydroxylase)에서 F39L, K42I, L48S, I65T, R252Q, L255V, S349L 및 R408W로 구성된 군에서 선택된 아미노산이 치환된 돌연변이 hPAH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 도입된, 도 5에 개시되어 있는 재조합벡터 pDXA-hPAHs로 형질전환된 딕티오스텔리움 디스코이데움(Dictyostelium discoideum) 균주
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