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디설파이드-말단 아릴디아조늄(Disulfide-confined aryldiazonium; DSAD) 염 화합물을 생체분자 고정화용 링커(Linker)로 사용하는 면역분석법(Immunoassay)으로서,(1) 하기 화학식 2로 표시되는 디설파이드-말단 아릴디아조늄(DSAD) 염 화합물을 마이크로전극 어레이(Microelectrode array)상에 전착(Electrodeposition)시키는 단계;(2) 일부 마이크로전극상에 전착된 디설파이드-말단 아릴디아조늄(DSAD) 염 화합물을 전기화학적으로 산화시켜 표면의 디설파이드기를 티오설피네이트기 또는 티오설포네이트기로 변환 및 활성화하는 단계;(3) 마이크로전극 어레이에 티올기를 갖는 1차 항체를 노출시켜 상기 활성화된 부분에만 1차 항체를 공간-선택적으로 고정시키는 단계;(4) 표적항원을 노출 및 고정시키는 단계;(5) 2차 항체를 노출 및 고정시키는 단계; 및(6) 마이크로전극 어레이 표면의 형광을 검출하는 단계;를 포함하고,상기 디설파이드-말단 아릴디아조늄(DSAD) 염 화합물은,a) 리포산과 N-Boc-1,4-페닐렌디아민을 트리에틸아민(TEA), 하이드록시벤조트리아졸(HOBt) 및 EDCl(1-ethyl-3[3-(dimethyl amino)propyl]-carbodiimide hydrochloride) 하에서 반응시켜 터트-부틸 4-(5-(1,2-디티올란-3-일)펜탄아마이드)페닐카바메이트를 합성하는 단계;b) 상기 a) 단계의 합성물을 디클로로메탄(DCM) 및 트리플루오로아세트산(TFA)의 혼합물에 용해시켜 N-(4-아미노페닐)-5-(1,2-디티올란-3-일)펜탄아마이드를 합성하는 단계; 및c) 상기 b) 단계의 합성물을 염산(HCl)에 용해시키고, 아질산나트륨(NaNO2)을 첨가하여 5-(1,2-디티올란-3-일)펜탄아마이드-4-벤젠 디아조늄 클로라이드를 수득하는 단계;를 통해 제조하는 것이며,상기 티오설피네이트기 또는 티오설포네이트기로 활성화된 부분이 상기 1차 항체의 티올기와 공유결합을 형성하여 생체분자가 고정되는 것이고,상기 티올기를 갖는 1차 항체는 Anti-Rabbit antigen, 표적항원은 Rabbit antigen, 2차 항체는 Anti-Rabbit antigen인 것인,샌드위치 면역분석법(Sandwich immunoassay):[화학식 2]
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제1항에 있어서,상기 마이크로전극 어레이는 ITO(Indium Tin Oxide) 마이크로전극 어레이인 것을 특징으로 하는 샌드위치 면역분석법
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제1항에 있어서,상기 전착은 순환전압전류법(Cyclic voltammetry; CV)을 통해 수행되는 것을 특징으로 하는 샌드위치 면역분석법
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제1항에 있어서,상기 2차 항체는 TRITC(Tetramethylrhodamine isothiocyanate)로 표지된 것임을 특징으로 하는 샌드위치 면역분석법
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디설파이드-말단 아릴디아조늄(Disulfide-confined aryldiazonium; DSAD) 염 화합물을 생체분자 고정화용 링커(Linker)로 사용하는 면역분석법(Immunoassay)으로서,(1) PEI(Polyethylenimine), 및 전기화학적으로 환원된 그래핀 산화물(Electrochemically reduced graphene oxide; ERGO)로 순차 개질된 ITO 전극 표면(ERGO/PEI/ITO)을 준비하는 단계;(2) 상기 ITO 전극 표면의 ERGO 상에 하기 화학식 2로 표시되는 디설파이드-말단 아릴디아조늄(DSAD) 염 화합물을 전착(Electrodeposition)시켜 DSAD로 기능화된 ERGO 표면(DSAD/ERGO/PEI/ITO)을 얻는 단계;(3) 상기 DSAD로 기능화된 ERGO 표면의 디설파이드-말단 아릴디아조늄(DSAD) 염 화합물을 전기화학적으로 산화시켜 표면의 디설파이드기를 티오설피네이트기 또는 티오설포네이트기로 변환 및 활성화한 표면(ODSAD/ERGO/PEI/ITO)으로 이루어진 전기화학적 면역센서를 제조하는 단계;(4) 상기 활성화된 표면에 티올기를 갖는 1차 항체를 노출 및 고정시키는 단계;(5) 표적항원을 노출 및 고정시키는 단계;(6) 2차 항체를 노출 및 고정시키는 단계; 및(7) 전해질을 노출시켜 화학적 촉매반응을 일으킨 후, 전기화학을 통해 생성된 물질의 양을 순환전압전류법(Cyclic voltammetry; CV)을 이용해 검출해내는 단계;를 포함하고,상기 디설파이드-말단 아릴디아조늄(DSAD) 염 화합물은,a) 리포산과 N-Boc-1,4-페닐렌디아민을 트리에틸아민(TEA), 하이드록시벤조트리아졸(HOBt) 및 EDCl(1-ethyl-3[3-(dimethyl amino)propyl]-carbodiimide hydrochloride) 하에서 반응시켜 터트-부틸 4-(5-(1,2-디티올란-3-일)펜탄아마이드)페닐카바메이트를 합성하는 단계;b) 상기 a) 단계의 합성물을 디클로로메탄(DCM) 및 트리플루오로아세트산(TFA)의 혼합물에 용해시켜 N-(4-아미노페닐)-5-(1,2-디티올란-3-일)펜탄아마이드를 합성하는 단계; 및c) 상기 b) 단계의 합성물을 염산(HCl)에 용해시키고, 아질산나트륨(NaNO2)을 첨가하여 5-(1,2-디티올란-3-일)펜탄아마이드-4-벤젠 디아조늄 클로라이드를 수득하는 단계;를 통해 제조하는 것이며,상기 티오설피네이트기 또는 티오설포네이트기로 활성화된 부분이 상기 1차 항체의 티올기와 공유결합을 형성하여 생체분자가 고정되는 것이고,상기 티올기를 갖는 1차 항체는 Anti-Mouse antigen, 표적항원은 Mouse antigen, 2차 항체는 Anti-Mouse antigen인 것인,샌드위치 ELISA 방법:[화학식 2]
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제5항에 있어서,상기 (1) 단계는,피라나 용액(Piranha solution)으로 세척한 ITO 전극을 다시 물로 세척하여 전극 표면에 (-) 전하를 형성하고, 상기 (-) 전하가 형성된 전극을 (+) 전하를 띄는 PEI 수용액으로 전처리한 후, 얻어진 표면에 그래핀 산화물(Graphene oxide; GO)을 형성한 다음, GO를 전기화학적으로 환원시키는 것임을 특징으로 하는 샌드위치 ELISA 방법
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제5항에 있어서,상기 2차 항체는 HRP(Horseradish peroxidase)로 표지된 것임을 특징으로 하는 샌드위치 ELISA 방법
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제5항에 있어서,상기 (7) 단계는,전해질로서 과산화수소 및 하이드로퀴논 용액을 전기화학적 면역센서의 전극에 노출시켜 화학적 촉매반응을 일으킨 후, 생성된 벤조퀴논의 양을 순환전압전류법을 이용해 검출해내는 것임을 특징으로 하는 샌드위치 ELISA 방법
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