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순환 유리 핵산의 분리 방법(A method for isolating circulating cell-free nucleic acid)

  • 기술번호 : KST2016016909
  • 담당센터 : 부산기술혁신센터
  • 전화번호 : 051-606-6561
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 순환 유리 핵산(circulating cell-free nucleic acid)을 포함하는 시료로부터 순환 유리 핵산을 분리하는 방법, 순환 유리 핵산 분리 키트 및 순환 유리 핵산 분리를 위한 용해 완충액에 관한 것이다.
Int. CL C12N 15/10 (2017.01.01) C12Q 1/68 (2018.01.01)
CPC C12N 15/1013(2013.01) C12N 15/1013(2013.01) C12N 15/1013(2013.01)
출원번호/일자 1020160029622 (2016.03.11)
출원인 재단법인 아산사회복지재단, 울산대학교 산학협력단
등록번호/일자 10-1967878-0000 (2019.04.04)
공개번호/일자 10-2016-0110902 (2016.09.22) 문서열기
공고번호/일자 (20190411) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보 대한민국  |   1020150034686   |   2015.03.12
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2016.03.11)
심사청구항수 25

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 재단법인 아산사회복지재단 대한민국 서울특별시 송파구
2 울산대학교 산학협력단 대한민국 울산광역시 남구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 이정신 대한민국 서울특별시 강남구
2 최은경 대한민국 서울특별시 송파구
3 장세진 대한민국 경기도 성남시 분당구
4 천성민 대한민국 서울특별시 강동구
5 김태임 대한민국 서울특별시 송파구
6 이지영 대한민국 서울특별시 관악구
7 김유진 대한민국 서울시 강동구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 손민 대한민국 서울특별시 송파구 법원로 ***, *층(문정동)(특허법인한얼)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 재단법인 아산사회복지재단 서울특별시 송파구
2 울산대학교 산학협력단 울산광역시 남구
번호, 서류명, 접수/발송일자, 처리상태, 접수/발송일자의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 행정처리 표입니다.
번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2016.03.11 수리 (Accepted) 1-1-2016-0237900-13
2 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment		 2016.03.30 수리 (Accepted) 1-1-2016-0304126-41
3 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2016.06.20 수리 (Accepted) 4-1-2016-5080807-13
4 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment		 2016.09.12 수리 (Accepted) 1-1-2016-0888770-65
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2017.08.10 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2017-0559417-16
6 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2017.09.25 수리 (Accepted) 1-1-2017-0932503-04
7 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2017.11.10 수리 (Accepted) 1-1-2017-1118690-75
8 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2017.12.11 수리 (Accepted) 1-1-2017-1233262-67
9 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2018.01.10 수리 (Accepted) 1-1-2018-0032618-14
10 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2018.01.10 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2018-0032619-60
11 거절결정서
Decision to Refuse a Patent		 2018.05.21 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2018-0344388-38
12 [법정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
 2018.06.21 수리 (Accepted) 1-1-2018-0611119-13
13 법정기간연장승인서
 2018.06.26 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2018-0098344-27
14 [명세서등 보정]보정서(재심사)
Amendment to Description, etc(Reexamination)		 2018.07.23 보정승인 (Acceptance of amendment) 1-1-2018-0724657-82
15 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2018.07.23 수리 (Accepted) 1-1-2018-0724656-36
16 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2018.08.14 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2018-0550843-33
17 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2018.10.15 수리 (Accepted) 1-1-2018-1013008-17
18 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2018.11.13 수리 (Accepted) 1-1-2018-1127620-35
19 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2018.11.13 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2018-1127621-81
20 등록결정서
Decision to Grant Registration		 2019.03.22 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2019-0211649-10
21 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.07.10 수리 (Accepted) 4-1-2020-5154267-54
22 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.07.31 수리 (Accepted) 4-1-2020-5172343-48
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
(a) 순환 유리 핵산(circulating cell-free nucleic acid)을 포함하는 분리된 시료에 염 및 PEG(polyethylene glycol)를 포함하는 용액 및 자성 비드를 첨가하는 단계로서, 상기 순환 유리 핵산을 포함하는 분리된 시료는 혈장 또는 혈청을 2 내지 6M의 구아니디늄 클로라이드; 킬레이트제(chelating agent); 비이온성 계면활성제(nonionic surfactant); 및 Tris-Cl을 포함하는 용해 완충액으로 용해시켜 제조된 것이며, 상기 용액 및 자성비드는 상기 시료 및 용해 완충액의 부피를 기준으로 2배 내지 3배의 양으로 첨가하는 것인, 단계 및(b) 상기 자성 비드가 첨가된 시료에서 자성 비드를 획득하고, 이로부터 순환 유리 핵산을 분리하는 단계를 포함하는, 순환 유리 핵산을 포함하는 시료로부터 순환 유리 핵산을 분리하는 방법
2 2
삭제
3 3
삭제
4 4
제1항에 있어서, 상기 용해 완충액은 1 내지 50mM 킬레이트제; 0
5 5
제1항 또는 제4항에 있어서, 상기 용해 완충액의 pH는 pH 7
6 6
삭제
7 7
삭제
8 8
제1항에 있어서, 상기 킬레이트제(chelating agent)는 DTPA(diethylenetriaminepentaacetic acid), EDTA(ethylenediaminetetraacetic acid), EGTA(ethylene glycol tetraacetic acid), 및 NTA(N,N-bis(carboxymethyl)glycine)로 이루어진 군으로부터 선택된 것인, 방법
9 9
제1항에 있어서, 상기 비이온성 계면활성제(nonionic surfactant)는 트리톤(triton) X-100인 것인, 방법
10 10
제1항에 있어서, 상기 용해 완충액은 구아니디늄 클로라이드, EDTA, 트리톤 X-100 및 Tris-Cl을 포함하는 것인, 방법
11 11
제1항에 있어서, 상기 염 및 PEG를 포함하는 용액은 염화나트륨 및 PEG를 포함하는 것인, 방법
12 12
제1항에 있어서, 상기 PEG(polyethylene glycol)는 평균 분자량이 6,000 내지 10,000Da인 PEG인 것인, 방법
13 13
제1항에 있어서, 상기 염 및 PEG를 포함하는 용액은 1 내지 4M 염 및 10 내지 60%(w/v)의 PEG를 포함하는 것인, 방법
14 14
제1항에 있어서, 용해 완충액과 함께 단백질분해효소를 혈장 또는 혈청에 첨가하는 것을 포함하는 것인, 방법
15 15
제1항에 있어서, (b) 단계는 자성 비드가 첨가된 시료에서 자성 비드를 세척한 후, 자성 비드를 획득하고, 이로부터 순환 유리 핵산을 분리하는 것인, 방법
16 16
제15항에 있어서, 상기 세척은 50 내지 95%(v/v) 에탄올 용액을 사용하여 수행되는 것인, 방법
17 17
제1항에 있어서, 상기 순환 유리 핵산을 포함하는 분리된 시료는 분리된 혈액 시료에서 혈장을 분리하기 위해 제1 원심분리하는 단계; 및제1 원심분리된 시료에서 혈장을 분리하고, 분리된 혈장을 제2 원심분리하는 단계를 포함하는 방법으로 수득된 것인, 방법
18 18
제17항에 있어서, 상기 제1 원심분리는 1,900 내지 2,000 x g의 조건에서 원심분리하고, 제2 원심분리는 12,000 내지 18,000 x g의 조건에서 원심분리하는 것인, 방법
19 19
2 내지 6M의 구아니디늄 클로라이드, 킬레이트제, 비이온성 계면활성제 및 Tris-Cl을 포함하는 용해 완충액(lysis buffer); 염 및 PEG(polyethylene glycol)를 포함하는 용액; 및 자성 비드를 포함하며, 상기 용액 및 자성비드는 순환 유리 핵산(circulating cell-free nucleic acid)을 포함하는 분리된 시료 및 용해 완충액의 부피를 기준으로 2배 내지 3배의 양으로 포함되는 것을 특징으로 하는, 순환 유리 핵산 분리 키트
20 20
삭제
21 21
제19항에 있어서,상기 용해 완충액은 1 내지 50mM 킬레이트제; 0
22 22
제19항 또는 제21항에 있어서, 상기 용해 완충액의 pH는 pH 7
23 23
삭제
24 24
삭제
25 25
제19항에 있어서, 상기 킬레이트제(chelating agent)는 DTPA(diethylenetriaminepentaacetic acid), EDTA(ethylenediaminetetraacetic acid), EGTA(ethylene glycol tetraacetic acid), 및 NTA(N,N-bis(carboxymethyl)glycine)로 이루어진 군으로부터 선택된 것인, 키트
26 26
제19항에 있어서, 상기 비이온성 계면활성제(nonionic surfactant)는 트리톤(triton) X-100인 것인, 키트
27 27
제19항에 있어서, 상기 용해 완충액은 구아니디늄 클로라이드, EDTA, 트리톤 X-100 및 Tris-Cl을 포함하는 것인, 키트
28 28
제19항에 있어서, 상기 염 및 PEG(polyethylene glycol)를 포함하는 용액은 염화나트륨 및 PEG를 포함하는 것인, 키트
29 29
제19항 또는 제28항에 있어서, 상기 PEG(polyethylene glycol)는 평균 분자량이 6,000 내지 10,000 Da인 PEG인 것인, 키트
30 30
제19항 또는 제28항에 있어서, 상기 염 및 PEG를 포함하는 용액은 1 내지 4M 염 및 10 내지 60%(w/v)의 PEG를 포함하는 것인, 키트
31 31
제19항에 있어서, 상기 키트는 추가로 자성비드 세척 완충액, 자성비드 분리 기구, 또는 둘 다를 추가로 포함하는 것인, 키트
32 32
제31항에 있어서, 상기 자성비드 세척 완충액은 50 내지 95%(v/v) 에탄올 용액인 것인, 키트
33 33
삭제
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1 WO2016144137 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY

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1 미래창조과학부 울산대학교 산학협력단 동북아RND허브기반구축 아산-다나파버 암 유전체 연구 센터
2 교육부 서울아산병원 기본연구지원사업 순환 유리 핵산의 고효율 추출법 개발