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그람 음성균에서 분리된 ABC 트랜스포터(ABC transporter) 및; 글리신-리치 박스(Glycine-rich box(-G-G-X-G-X-D)), 암피필릭 알파-헬릭스(Amphiphilic α-helix), 및 익스트림 C-말단 모티브(extreme C-terminal motif)를 포함하는 카르복시 말단 신호서열을 가지는 목적 단백질을 코딩하는 유전자가 도입된 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
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제1항에 있어서,상기 벡터는 pKK223-2, pACYC184, 및 pDSK519 로 이루어지는 군에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
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제1항에 있어서,상기 그람 음성균은 슈도모나스 플루오레슨스(Pseudomonas fluorescens), 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 어위니아 크리산테미(Erwinia chrysanthemi), 세라티아 마르세슨스(Serratia marcescens), 세라티아 프로테아마큘런스(Serratia proteamaculans) 및 에스케리시아 콜라이(Escherichia coli)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
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제1항에 있어서,상기 ABC 트랜스포터는, (a) 서열번호 1 또는 서열번호 2에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질; (b) 서열번호 3 또는 서열번호 4에 기재된 염기 서열의 코딩 영역을 포함하는 핵산에 의해 코딩되는 단백질;(c) 서열번호 1 또는 서열번호 2에 기재된 아미노산 서열에서 하나 또는 그 이상의 아미노산이 치환, 결실, 삽입 또는 첨가된 아미노산 서열로 구성되며, 서열번호 1 또는 서열번호 2에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질과 기능적으로 동일한 단백질; 및 (d) 서열번호 3 또는 서열번호 4에 기재된 염기서열을 포함하는 핵산과 엄격한 조건하에서 혼성화되는 핵산에 의해 코딩되는 단백질이며, 서열번호 1 또는 서열번호 2에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질과 기능적으로 동일한 단백질 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
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제1항에 있어서,상기 목적 단백질은 리파아제(lipase) 또는 프로테아제(protease)인 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
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제1항에 있어서,상기 목적 단백질은 글리신-리치 박스(Glycine-rich box(-G-G-X-G-X-D)), 암피필릭 알파-헬릭스(Amphiphilic α-helix) 및 익스트림 C-말단 모티프(extreme C-terminal motif)를 포함하는 카르복시 말단 신호서열을 가지는 것을 특징으로 하며,상기 글리신-리치 박스; 암피필릭 알파-헬릭스; 및 익스트림 C-말단 모티프는 각각(a) 서열번호 5에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질; 서열번호 6에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질; 및 서열번호 7에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질, (b) 서열번호 8에 기재된 염기 서열의 코딩 영역을 포함하는 핵산에 의해 코딩되는 단백질; 서열번호 9에 기재된 염기 서열의 코딩 영역을 포함하는 핵산에 의해 코딩되는 단백질; 및 서열번호 10에 기재된 염기 서열의 코딩 영역을 포함하는 핵산에 의해 코딩되는 단백질, (c) 서열번호 5에 기재된 아미노산 서열에서 하나 또는 그 이상의 아미노산이 치환, 결실, 삽입 또는 첨가된 아미노산 서열로 구성되며, 서열번호 5에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질과 기능적으로 동일한 단백질; 서열번호 6에 기재된 아미노산 서열에서 하나 또는 그 이상의 아미노산이 치환, 결실, 삽입 또는 첨가된 아미노산 서열로 구성되며, 서열번호 6에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질과 기능적으로 동일한 단백질; 및 서열번호 7 기재된 아미노산 서열에서 하나 또는 그 이상의 아미노산이 치환, 결실, 삽입 또는 첨가된 아미노산 서열로 구성되며, 서열번호 7 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질과 기능적으로 동일한 단백질, 및 (d) 서열번호 8 기재된 염기서열을 포함하는 핵산과 엄격한 조건하에서 혼성화되는 핵산에 의해 코딩되는 단백질이며, 서열번호 5에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질과 기능적으로 동일한 단백질; 서열번호 9에 기재된 염기서열을 포함하는 핵산과 엄격한 조건하에서 혼성화되는 핵산에 의해 코딩되는 단백질이며, 서열번호 6에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질; 및 서열번호 10에 기재된 염기서열을 포함하는 핵산과 엄격한 조건하에서 혼성화되는 핵산에 의해 코딩되는 단백질이며, 서열번호 7에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질과 기능적으로 동일한 단백질 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
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7
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 재조합 벡터로 형질전환된 재조합 균주
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8
제7항에 있어서,상기 균주는 슈도모나스 플루오레슨스(Pseudomonas fluorescens), 슈도모나스 애루기노사(Pseudomanas aeruginosa), 어위니아 크리산테미(Erwinia chrysanthemi), 세라티아 마르세슨스(Serratia marcescens), 세라티아 프로테아마큘런스(Serratia proteamaculans), 및 에스케리시아 콜라이(Escherichia coli)로 이루어지는 군에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합 균주
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하기 단계를 포함하는 유전자 재조합 방법에 의한 ABC 트랜스포터(ABC transporter) 및; 글리신-리치 박스(Glycine-rich box(-G-G-X-G-X-D)), 암피필릭 알파-헬릭스(Amphiphilic α-helix), 및 익스트림 C-말단 모티브(extreme C-terminal motif)를 포함하는 카르복시 말단 신호서열을 가지는 목적 단백질 생산방법:S1) 벡터에 그람 음성균에서 분리된 ABC 트랜스포터(ABC transporter) 및; 글리신-리치 박스(Glycine-rich box(-G-G-X-G-X-D)), 암피필릭 알파-헬릭스(Amphiphilic α-helix), 및 익스트림 C-말단 모티브(extreme C-terminal motif)를 포함하는 카르복시 말단 신호서열을 가지는 목적 단백질을 코딩하는 유전자가 도입된 재조합 벡터를 제조하는 단계;S2) 상기 재조합 벡터를 숙주에 형질전환하여 재조합 균주를 제조하는 단계;S3) 상기 형질전환된 재조합 균주를 배지 내에서 배양하여 목적 단백질의 세포 외 분비를 유도하는 단계; 및S4) 상기 형질전환된 재조합 균주의 배양액으로부터 목적 단백질을 회수하는 단계
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제9항에 있어서,상기 S3) 단계의 배양은 18 내지 32℃ 의 온도에서 배양하는 것을 특징으로 하는 목적 단백질 생산방법
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