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ABC 트랜스포터를 통한 목적 단백질의 분비생산을 위한 재조합 균주 제조 및 이를 이용한 목적 단백질의 생산 방법(Genetically modified target protein-producing microorganisms using ABC transporter-mediated secretion system and the method for producing target protein using the same)

  • 기술번호 : KST2016020097
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 재조합 플라스미드 벡터, 재조합 플라스미드 벡터로 형질전환된 재조합 균주 및 이를 이용한 목적 단백질 생산방법에 관한 것이다. 본 발명을 통해 ABC 트랜스포터를 이용하여 목적 단백질을 효율적으로 수득할 수 있으며, 원균주의 체외로 목적 단백질이 배출되므로 별도로 원균주를 분쇄하지 않고 목적 단백질을 수득할 수 있어, 매우 경제적이며 수득률도 높아 목적 단백질의 대량 생산에 유용하게 사용될 수 있다.
Int. CL C12N 15/70 (2006.01.01) C12P 21/00 (2006.01.01) C07K 14/24 (2006.01.01) C07K 14/27 (2006.01.01) C12N 9/20 (2006.01.01) C12N 9/50 (2006.01.01)
CPC C12N 15/70(2013.01) C12N 15/70(2013.01) C12N 15/70(2013.01) C12N 15/70(2013.01) C12N 15/70(2013.01) C12N 15/70(2013.01) C12N 15/70(2013.01)
출원번호/일자 1020150075126 (2015.05.28)
출원인 한국화학연구원
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2016-0139730 (2016.12.07) 문서열기
공고번호/일자
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2020.03.24)
심사청구항수 10

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국화학연구원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 엄경태 대한민국 경기도 수원시 영통구
2 송재광 대한민국 대전시 유성구
3 제갈종건 대한민국 대전시 유성구
4 송봉근 대한민국 대전광역시 유성구
5 유주현 대한민국 대전시 유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 특허법인필앤온지 대한민국 서울특별시 서초구 서초중앙로 **, *층(서초동, 준영빌딩)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
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번호, 서류명, 접수/발송일자, 처리상태, 접수/발송일자의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 행정처리 표입니다.
번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2015.05.28 수리 (Accepted) 1-1-2015-0515485-75
2 공지예외적용주장 증명서류 제출기한 안내문
2015.06.07 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2015-0094449-15
3 [공지예외적용대상(신규성, 출원시의 특례)증명서류]서류제출서
[Document Verifying Exclusion from Being Publically Known (Novelty, Special Provisions for Application)] Submission of Document
2015.06.08 수리 (Accepted) 1-1-2015-0549464-57
4 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2017.09.14 수리 (Accepted) 4-1-2017-5149242-13
5 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2017.09.14 수리 (Accepted) 4-1-2017-5149265-52
6 [심사청구]심사청구(우선심사신청)서
[Request for Examination] Request for Examination (Request for Preferential Examination)
2020.03.24 수리 (Accepted) 1-1-2020-0309495-62
7 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search
2020.05.12 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
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번호 청구항
1 1
그람 음성균에서 분리된 ABC 트랜스포터(ABC transporter) 및; 글리신-리치 박스(Glycine-rich box(-G-G-X-G-X-D)), 암피필릭 알파-헬릭스(Amphiphilic α-helix), 및 익스트림 C-말단 모티브(extreme C-terminal motif)를 포함하는 카르복시 말단 신호서열을 가지는 목적 단백질을 코딩하는 유전자가 도입된 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
2 2
제1항에 있어서,상기 벡터는 pKK223-2, pACYC184, 및 pDSK519 로 이루어지는 군에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
3 3
제1항에 있어서,상기 그람 음성균은 슈도모나스 플루오레슨스(Pseudomonas fluorescens), 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 어위니아 크리산테미(Erwinia chrysanthemi), 세라티아 마르세슨스(Serratia marcescens), 세라티아 프로테아마큘런스(Serratia proteamaculans) 및 에스케리시아 콜라이(Escherichia coli)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합  벡터
4 4
제1항에 있어서,상기 ABC 트랜스포터는, (a) 서열번호 1 또는 서열번호 2에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질; (b) 서열번호 3 또는 서열번호 4에 기재된 염기 서열의 코딩 영역을 포함하는 핵산에 의해 코딩되는 단백질;(c) 서열번호 1 또는 서열번호 2에 기재된 아미노산 서열에서 하나 또는 그 이상의 아미노산이 치환, 결실, 삽입 또는 첨가된 아미노산 서열로 구성되며, 서열번호 1 또는 서열번호 2에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질과 기능적으로 동일한 단백질; 및 (d) 서열번호 3 또는 서열번호 4에 기재된 염기서열을 포함하는 핵산과 엄격한 조건하에서 혼성화되는 핵산에 의해 코딩되는 단백질이며, 서열번호 1 또는 서열번호 2에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질과 기능적으로 동일한 단백질 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
5 5
제1항에 있어서,상기 목적 단백질은 리파아제(lipase) 또는 프로테아제(protease)인 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
6 6
제1항에 있어서,상기 목적 단백질은 글리신-리치 박스(Glycine-rich box(-G-G-X-G-X-D)), 암피필릭 알파-헬릭스(Amphiphilic α-helix) 및 익스트림 C-말단 모티프(extreme C-terminal motif)를 포함하는 카르복시 말단 신호서열을 가지는 것을 특징으로 하며,상기 글리신-리치 박스; 암피필릭 알파-헬릭스; 및 익스트림 C-말단 모티프는 각각(a) 서열번호 5에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질; 서열번호 6에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질; 및 서열번호 7에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질, (b) 서열번호 8에 기재된 염기 서열의 코딩 영역을 포함하는 핵산에 의해 코딩되는 단백질; 서열번호 9에 기재된 염기 서열의 코딩 영역을 포함하는 핵산에 의해 코딩되는 단백질; 및 서열번호 10에 기재된 염기 서열의 코딩 영역을 포함하는 핵산에 의해 코딩되는 단백질, (c) 서열번호 5에 기재된 아미노산 서열에서 하나 또는 그 이상의 아미노산이 치환, 결실, 삽입 또는 첨가된 아미노산 서열로 구성되며, 서열번호 5에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질과 기능적으로 동일한 단백질; 서열번호 6에 기재된 아미노산 서열에서 하나 또는 그 이상의 아미노산이 치환, 결실, 삽입 또는 첨가된 아미노산 서열로 구성되며, 서열번호 6에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질과 기능적으로 동일한 단백질; 및 서열번호 7 기재된 아미노산 서열에서 하나 또는 그 이상의 아미노산이 치환, 결실, 삽입 또는 첨가된 아미노산 서열로 구성되며, 서열번호 7 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질과 기능적으로 동일한 단백질, 및 (d) 서열번호 8 기재된 염기서열을 포함하는 핵산과 엄격한 조건하에서 혼성화되는 핵산에 의해 코딩되는 단백질이며, 서열번호 5에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질과 기능적으로 동일한 단백질; 서열번호 9에 기재된 염기서열을 포함하는 핵산과 엄격한 조건하에서 혼성화되는 핵산에 의해 코딩되는 단백질이며, 서열번호 6에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질; 및 서열번호 10에 기재된 염기서열을 포함하는 핵산과 엄격한 조건하에서 혼성화되는 핵산에 의해 코딩되는 단백질이며, 서열번호 7에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 단백질과 기능적으로 동일한 단백질 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
7 7
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 재조합 벡터로 형질전환된 재조합 균주
8 8
제7항에 있어서,상기 균주는 슈도모나스 플루오레슨스(Pseudomonas fluorescens), 슈도모나스 애루기노사(Pseudomanas aeruginosa), 어위니아 크리산테미(Erwinia chrysanthemi), 세라티아 마르세슨스(Serratia marcescens), 세라티아 프로테아마큘런스(Serratia proteamaculans), 및 에스케리시아 콜라이(Escherichia coli)로 이루어지는 군에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합 균주
9 9
하기 단계를 포함하는 유전자 재조합 방법에 의한 ABC 트랜스포터(ABC transporter) 및; 글리신-리치 박스(Glycine-rich box(-G-G-X-G-X-D)), 암피필릭 알파-헬릭스(Amphiphilic α-helix), 및 익스트림 C-말단 모티브(extreme C-terminal motif)를 포함하는 카르복시 말단 신호서열을 가지는 목적 단백질 생산방법:S1) 벡터에 그람 음성균에서 분리된 ABC 트랜스포터(ABC transporter) 및; 글리신-리치 박스(Glycine-rich box(-G-G-X-G-X-D)), 암피필릭 알파-헬릭스(Amphiphilic α-helix), 및 익스트림 C-말단 모티브(extreme C-terminal motif)를 포함하는 카르복시 말단 신호서열을 가지는 목적 단백질을 코딩하는 유전자가 도입된 재조합 벡터를 제조하는 단계;S2) 상기 재조합 벡터를 숙주에 형질전환하여 재조합 균주를 제조하는 단계;S3) 상기 형질전환된 재조합 균주를 배지 내에서 배양하여 목적 단백질의 세포 외 분비를 유도하는 단계; 및S4) 상기 형질전환된 재조합 균주의 배양액으로부터 목적 단백질을 회수하는 단계
10 10
제9항에 있어서,상기 S3) 단계의 배양은 18 내지 32℃ 의 온도에서 배양하는 것을 특징으로 하는 목적 단백질 생산방법
지정국 정보가 없습니다
패밀리정보가 없습니다
순번, 연구부처, 주관기관, 연구사업, 연구과제의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 국가R&D 연구정보 정보 표입니다.
순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 산업통상자원부 한국화학연구원 바이오화학산업화촉진기술개발사업 (RCMS)산업 미생물 발효에 적합한 고농도 바이오슈가 제조 및 공통 활용 기술 개발