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분석 대상 게놈 DNA의 이중 가닥 DNA 파편의 양 말단에 차세대 염기서열 분석을 위한 어댑터를 접합하는 단계; 상기 어댑터가 접합된 이중 가닥 DNA 파편을 단일 가닥으로 분리하는 단계; 및 상기 단일 가닥으로 분리된 DNA 파편을 2종의 PCR 프라이머를 이용하여 중합효소연쇄반응(PCR)을 통해 증폭하는 단계를 포함하는 차세대 염기서열 분석용 DNA 라이브러리의 제조 방법에 있어서,상기 어댑터는 어댑터 플랭킹 서열(adapter flanking sequences), 4개 내지 30개의 임의의 핵산으로 이루어진 바코드 서열, 상기 PCR 프라이머에 대한 상보적 서열을 포함하며,상기 PCR 프라이머 중 1종은 인덱스 서열을 포함하고, 또다른 1종은 인덱스 서열을 포함하지 않으며, 상기 PCR을 통해 생성된 DNA 핵산 분자는 인덱스 서열 및 바코드 서열을 함께 포함하고, 여기에서 상기 인덱스 서열은 차세대 염기서열 분석시 분석 대상 게놈 DNA가 속하는 샘플을 구분하는 역할을 수행하고, 상기 바코드 서열은 분석 대상 게놈 DNA의 단일 가닥 DNA 파편에 바코드를 부여하는 역할을 수행하는 것을 특징으로 하는 차세대 염기서열 분석용 DNA 라이브러리의 제조 방법
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제1항에 있어서, 어댑터 접합시 어댑터는 단일 가닥이며, 어댑터의 5'과 3' 말단이 분석 대상 게놈 DNA의 이중 가닥 DNA 파편의 양쪽 가닥 각각에 접합되는 것인 DNA 라이브러리의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 어댑터가 접합된 이중 가닥 DNA 파편을 단일 가닥으로 분리할 때, 어댑터 플랭킹 서열 내 존재하는 우라실 위치를 자르는 효소에 의해 상기 어댑터의 일부가 각각의 단일 가닥 DNA 파편에 접합된 상태가 되는 것인 DNA 라이브러리의 제조 방법
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제1항에 있어서, 이중 가닥 DNA 파편의 단일 가닥으로의 분리는 우라실 DNA 글리코실라제 및 DNA 글리코실라제-리아제 엔도뉴클라제를 처리하여 수행되는 DNA 라이브러리의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 단일 가닥 DNA 파편의 일 말단은 어댑터 플랭킹 서열을 포함하는 어댑터의 일부가 접합되어 있고, 또다른 말단은 어댑터 플랭킹 서열, 4개 내지 30개의 임의의 핵산으로 이루어진 바코드 서열, PCR 프라이머에 대한 상보적 서열을 포함하는 어댑터의 일부가 접합되어 있는 것인 DNA 라이브러리의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 어댑터는 60 내지 90 mer의 길이를 갖고, 4 내지 30개의 임의의 핵산으로 이루어진 바코드 서열을 포함하는 것인 DNA 라이브러리의 제조 방법
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제1항에 있어서, 인덱스 서열을 포함하는 PCR 프라이머는 차세대 염기서열 분석을 위한 제1공통 염기서열 및 어댑터 플랭킹 서열에 상보적인 서열을 추가로 포함하고, 인덱스 서열을 포함하지 않는 PCR 프라이머는 차세대 염기서열 분석을 위한 제2공통 염기서열에 대해 상보적인 서열을 포함하는 것인 DNA 라이브러리의 제조 방법
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제1항에 있어서, 이중 가닥 DNA 파편은 100 내지 500 mer의 길이를 갖는 것인 DNA 라이브러리의 제조 방법
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제1항에 있어서, 이중 가닥 DNA 파편은 어댑터 접합 전 DNA 파편의 말단 수선(end repair) 후, 3 말단에 아데노신이 접합된 것인 DNA 라이브러리의 제조 방법
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제1항에 있어서, PCR을 통해 생성된 DNA 핵산 분자 중 분석 타겟 영역을 포획하여 분리하는 단계를 추가로 포함하는 DNA 라이브러리의 제조 방법
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제1항에 있어서, 분석 대상 게놈 DNA는 ctDNA인 DNA 라이브러리의 제조 방법
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제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따라 제조된 DNA 라이브러리에 대한 차세대 염기서열 분석 방법에 있어서,레퍼런스 게놈의 같은 위치에 정렬된 리드 중 복제 리드로 취급된 리드로부터 바코드 서열이 서로 상이한 하나 이상의 리드를 회수하여 서열 분석에 복귀시키는 것을 포함하는 차세대 염기서열 분석 방법
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제12항에 있어서, 사전 확률 (prior probability) 및 최대우도법 (likelihood) 을 사용하는 사후 확률 (posterior probability) 기반 모델을 이용하여 시퀀싱 오차를 제거하는 단계를 추가로 포함하는 차세대 염기서열 분석 방법
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어댑터 플랭킹 서열(adapter flanking sequences), 4개 내지 30개의 임의의 핵산으로 이루어진 바코드 서열, PCR용 프라이머에 대한 상보적 서열을 포함하는 어댑터를 복수 개 포함하는 DNA 라이브러리 제조용 어댑터 풀; 인덱스 서열, 차세대 염기서열 분석을 위한 제1공통 염기서열 및 어댑터 플랭킹 서열에 상보적인 서열을 포함하는 PCR용 프라이머; 및인덱스 서열을 포함하지 않으며, 차세대 염기서열 분석을 위한 제2공통 염기서열에 대해 상보적인 서열을 포함하는 PCR용 프라이머를 포함하며, PCR을 통해 생성된 DNA 라이브러리 내 DNA 핵산 분자는 인덱스 서열 및 바코드 서열을 동시에 포함하고, 여기에서 상기 인덱스 서열은 차세대 염기서열 분석시 분석 대상 게놈 DNA가 속하는 샘플을 구분하는 역할을 수행하고, 상기 바코드 서열은 분석 대상 게놈 DNA의 단일 가닥 DNA 파편에 바코드를 부여하는 역할을 수행하는 것을 특징으로 하는 DNA 라이브러리 제조용 키트
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제14항에 있어서, 어댑터 플랭킹 서열 내 존재하는 우라실 위치를 자르는 효소를 추가로 포함하는 DNA 라이브러리 제조용 키트
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