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(a) 효모로부터 분리된 세포벽 만노단백질에 프로나제 (pronase)를 처리하거나, N-당사슬을 유리하는 효소를 처리하여 당사슬을 분리하고, 분리된 당사슬에서 바깥쪽 만노스를 제거하여 만노스-6-인산 당사슬을 수득하는 단계; 및(b) 가교제 (crosslinker)를 사용하여 상기 만노스-6-인산 당사슬과 목적 단백질을 결합시키는 단계를 포함하는, 만노스-6-인산 당사슬이 부가된 당단백질의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 바깥쪽 만노스를 제거하는 과정은 약산 가수분해 또는 캡핑 제거 (uncapping) 효소를 이용하는 것인, 제조방법
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제1항에 있어서, 만노시다제를 상기 당사슬에 처리하는 단계를 추가로 포함하는 것인, 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 (a) 단계는 만노스-6-인산 당사슬을 선택적으로 분리하는 단계를 추가로 포함하는 것인, 제조방법
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제7항에 있어서, 상기 분리는 이산화티타늄 (TiO2)을 이용하여 수행되는 것인, 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 가교제 (crosslinker)는 이의 한쪽 말단에 아스파라진 기 또는 알데하이드 기와 연결될 수 있는 반응기를 가지는 것인, 제조방법
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제9항에 있어서, 상기 가교제는 한쪽 말단에 엔하이드록시석신이미드 (NHS, N-hydroxysuccinimide), 옥시아민 (oxyamine), 아이소티오시아네이트 (isothiocyannate), 아이소시아네이트 (isocyanate), 설포닐클로라이드 (sulfonyl chloride), 알데히드 (aldehyde), 카보디이미드 (carbodiimide), 아실아자이드 (acyl azide), 언하이드라이드 (anhydride), 플루오로벤젠 (fluorobenzene), 카보네이트 (carbonate), 이미도에스터 (imidoester), 에폭사이드 (epoxide) 및 플루오로페닐에스터 (fluorophenyl ester)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 것인, 제조방법
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제9항에 있어서, 상기 가교제는 다른 한쪽 말단에 말레이미드 (maleimide), DBCO (Dibenzocyclooctyne), DTME (Dithio-bis-maleimidoethane), BM(PEG)2(1,8-Bis-maleimidodiethyleneglycol), 비닐설폰 (vinylsulfone), 아자이드 (azide), 이오도아세틸 니트로페닐아자이드 (iodoacetyl nitrophenylazide), 아이소시아네이트 (isocyanate), 피리딜다이설파이드 (pyridyldisulfide), 하이드라자이드 (hydrazide) 및 하이드록시페닐 아자이드 (hydroxyphenyl azide)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 것인, 제조방법
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제10항 또는 제11항에 있어서, 상기 가교제는 PEG (polyethylene glycol), 플루로닉 (pluronic), 폴리비닐피롤리돈 (polyvinylpyrolidone) 및 폴리옥사졸린 (polyoxazolin)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 비이온성 친수성 고분자; 또는 폴리 L-락트산 (poly-L-lactic acid), 폴리-글리콜산 (poly-glycolic acid), 폴리-D-락트산-co-글리콜산 (poly-D-lactic-co-glycolic acid), 폴리-L-락트산-co-글리콜산 (poly-L-lactic-co-glycolic acid), 폴리-D,L-락트산-co-글리콜산 (poly-D,L-lactic-co-glycolic acid), 폴리-카프로락톤 (polycaprolactone), 폴리-발레로락톤 (polyvalerolactone), 폴리-하이드록시 부티레이트 (polyhydroxybutyrate) 및 폴리-하이드록시 발러레이트 (polyhydroxyvalerate)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 생분해성 폴리에스테르계 고분자;를 추가로 포함하는 것인, 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 가교제는 각 말단에 NHS 및 말레이미드 기를 가지는 PEG 중합체, 각 말단에 DBCO 및 NHS 기를 가지는 PEG 중합체, 각 말단에 NHS 및 아자이드 (azide) 기를 가지는 PEG 중합체, 또는 각 말단에 옥시아민 (oxyamine) 및 아자이드 (azide) 기를 가지는 PEG 중합체인, 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 목적 단백질은 병원체 단백질 (pathogen protein), 라이소좀 단백질 (lysosomal protein), 성장 인자 (growth factor), 사이토카인 (cytokine), 케모카인 (chemokine), 항체 또는 이의 항원-결합 단편 (antigen-binding fragment), 또는 융합 단백질 (fusion protein)인 것인, 제조방법
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제14항에 있어서, 상기 라이소좀 단백질 (lysosomal protein)은 라이소좀 분해효소인 것인, 제조방법
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제1항에 있어서, 목적 단백질은 상기 가교제와 연결될 수 있는 시스테인, 라이신 또는 알지닌 잔기를 포함하는 것인, 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 목적 단백질은 당단백질인 것인, 제조방법
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제17항에 있어서, 상기 목적 단백질에 산화 반응을 유도하여, 목적 단백질의 당사슬 부위에 알데하이드 기를 도입하는 단계를 포함하는 것인, 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 세포벽 만노단백질은 천연 효모에 비하여 만노스 인산이 과량 부가되도록 조작한 효모로부터 분리한 것인, 제조방법
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제19항에 있어서, 상기 만노스 인산이 과량 부가되도록 조작한 효모는 효모 특이적 당사슬 생합성 경로가 제거된 것인, 제조방법
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제19항에 있어서, 상기 만노스 인산이 과량 부가되도록 조작한 효모는 OCH1 결손, MNN1 결손, YlMPO1 과발현, 및 MNN4 과발현으로 이루어진 군에서 선택되는 1 이상의 유전형질을 가지는 것인, 제조방법
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