1 |
1
레반슈크라제 (levansucrase)를 코딩하는 핵산 및 단백질 분비 융합 인자 (Translational fusion partner, TFP)를 코딩하는 핵산을 포함하는, 레반슈크라제 분비 발현 카세트로서,상기 단백질 분비 융합인자는,서열번호 15의 TFP 1, 서열번호 16의 TFP 2, 서열번호 17의 TFP 3, 서열번호 18의 TFP 4, 서열번호 19의 TFP 5, 서열번호 20의 TFP 6, 서열번호 21의 TFP 7, 서열번호 22의 TFP 8, 서열번호 23의 TFP 9, 서열번호 24의 TFP 10, 서열번호 25의 TFP 11, 서열번호 26의 TFP 12, 서열번호 27의 TFP 13, 서열번호 28의 TFP 14, 서열번호 29의 TFP 15, 서열번호 30의 TFP 16, 서열번호 31의 TFP 17, 서열번호 32의 TFP 18, 서열번호 33의 TFP 19, 서열번호 34의 TFP 20, 서열번호 35의 TFP 21, 서열번호 36의 TFP 22, 서열번호 37의 TFP 23, 및 서열번호 38의 TFP 24로 이루어진 군에서 선택되는, 분비 발현 카세트
|
2 |
2
제1항에 있어서, 상기 레반슈크라제는 라넬라 아쿠아틸리스 (Rhanella aquatilis), 자이모모나스 모빌리스 (Zymomonas mobilis), 또는 바실러스 서브틸리스 (Bacillus subtilis) 유래인 것인, 분비 발현 카세트
|
3 |
3
제2항에 있어서, 상기 레반슈크라제는 (i) 서열번호 12의 아미노산 서열을 가지는 라넬라 아쿠아틸리스 유래의 레반슈크라제;(ii) 서열번호 13의 아미노산 서열을 가지는 자이모모나스 모빌리스 유래의 레반슈크라제; 또는(iii) 서열번호 14의 아미노산 서열을 가지는 바실러스 서브틸리스 유래의 레반슈크라제인,분비 발현 카세트
|
4 |
4
삭제
|
5 |
5
제2항에 있어서,상기 라넬라 아쿠아틸리스 유래의 레반슈크라제는 서열번호 17의 TFP 3, 서열번호 18의 TFP 4, 서열번호 22의 TFP 8 또는 서열번호 30의 TFP 16과 연결된 것인, 분비 발현 카세트
|
6 |
6
제2항에 있어서,상기 자이모모나스 모빌리스 유래의 레반슈크라제는 서열번호 17의 TFP 3, 서열번호 20의 TFP 6, 서열번호 22의 TFP 8, 서열번호 23의 TFP 9, 서열번호 25의 TFP 11, 서열번호 30의 TFP 16, 서열번호 33의 TFP 19 또는 서열번호 36의 TFP 22와 연결된 것인, 분비 발현 카세트
|
7 |
7
제2항에 있어서,상기 바실러스 서브틸리스 유래의 레반슈크라제는 서열번호 15의 TFP 1, 서열번호 19의 TFP 5, 서열번호 20의 TFP 6, 서열번호 22의 TFP 8, 서열번호 23의 TFP 9, 서열번호 27의 TFP 13, 서열번호 30의 TFP 16 또는 서열번호 33의 TFP 19와 연결된 것인, 분비 발현 카세트
|
8 |
8
제1항에 있어서, 상기 레반슈크라제(levansucrase)를 코딩하는 핵산 및 단백질 분비 융합 인자를 코딩하는 핵산은 링커 (linker)로 서로 연결된 것인, 분비 발현 카세트
|
9 |
9
제8항에 있어서, 상기 링커는 프로테아제 인식 서열 또는 친화성 태그를 포함하는 것인, 분비 발현 카세트
|
10 |
10
제1항에 있어서, 상기 분비 발현 카세트는 친화성 태그를 추가로 포함하는 것인, 분비 발현 카세트
|
11 |
11
제10항에 있어서, 상기 친화성 태그는 GST, MBP, NusA, 티오레독신(thioredoxin), 유비퀴틴, FLAG, BAP, HIS, STREP, CBP, CBD, 및 S-태그로 이루어진 그룹에서 선택되는 것인, 분비 발현 카세트
|
12 |
12
제1항 내지 제3항 및 제5항 내지 제11항 중 어느 한 항의 레반슈크라제 분비 발현 카세트를 포함하는, 벡터
|
13 |
13
레반슈크라제 (levansucrase)를 코딩하는 핵산 및 단백질 분비 융합 인자를 코딩하는 핵산을 포함하는, 레반슈크라제 분비 발현 카세트를 포함하는, 형질전환 미생물로서,상기 단백질 분비 융합인자는,서열번호 15의 TFP 1, 서열번호 16의 TFP 2, 서열번호 17의 TFP 3, 서열번호 18의 TFP 4, 서열번호 19의 TFP 5, 서열번호 20의 TFP 6, 서열번호 21의 TFP 7, 서열번호 22의 TFP 8, 서열번호 23의 TFP 9, 서열번호 24의 TFP 10, 서열번호 25의 TFP 11, 서열번호 26의 TFP 12, 서열번호 27의 TFP 13, 서열번호 28의 TFP 14, 서열번호 29의 TFP 15, 서열번호 30의 TFP 16, 서열번호 31의 TFP 17, 서열번호 32의 TFP 18, 서열번호 33의 TFP 19, 서열번호 34의 TFP 20, 서열번호 35의 TFP 21, 서열번호 36의 TFP 22, 서열번호 37의 TFP 23, 및 서열번호 38의 TFP 24로 이루어진 군에서 선택되는 것인, 미생물
|
14 |
14
제13항에 있어서, 상기 형질전환 미생물은 효모인 것인, 미생물
|
15 |
15
제14항에 있어서, 상기 효모는 캔디다 (Candida), 디베리오마이세스 (Debaryomyces), 한세눌라 (Hansenula), 클루이베로마이세스 (Kluyveromyces), 피키아 (Pichia), 스키조사카로마이세스 (Schizosaccharomyces), 야로이야 (Yarrowia), 사카로마이시스 (Saccharomyces), 슈완니오마이세스 (Schwanniomyces) 및 아르술라 (Arxula) 속으로 이루어진 그룹에서 선택되는 것인, 미생물
|
16 |
16
제14항에 있어서, 상기 효모는 캔디다 유틸리스 (Candida utilis), 캔디다 보이디니 (Candida boidinii), 캔디다 알비칸스 (Candida albicans), 클루이베로마이세스 락티스 (Kluyveromyces lactis), 피키아 파스토리스 (Pichia pastoris), 피키아 스티피티스 (Pichia stipitis), 스키조사카로마이세스 폼베 (Schizosaccharomyces pombe), 사카로마이시스 세레비지에 (Saccharomyces cerevisiae), 한세눌라 폴리모르파 (Hansenula polymorpha), 야로이야 리폴리티카 (Yarrowia lipolytica), 슈완니오마이세스 옥시덴탈리스 (Schwanniomyces occidentalis) 및 아르술라 아데니니보란스 (Arxula adeninivorans)로 이루어진 그룹에서 선택되는 것인, 미생물
|
17 |
17
(i) 제13항의 형질전환 미생물을 배양하는 단계; 및(ii) 상기 배양된 미생물 또는 이의 배양 상등액으로부터 레반슈크라제를 회수하는 단계를 포함하는, 레반슈크라제 (levansucrase)의 제조방법
|
18 |
18
제13항의 형질전환 미생물 또는 제17항의 방법으로 제조된 레반슈크라제를 설탕과 반응시키는 단계를 포함하는, 레반 (levan)의 제조방법
|
19 |
19
제18항에 있어서, 상기 반응은 pH 4
|
20 |
20
제18항에 있어서, 상기 반응은 1 ℃ 내지 45 ℃에서 수행되는 것인, 레반의 제조방법
|
21 |
21
제18항에 있어서,상기 단계는 형질전환 미생물을 설탕을 포함하는 배지에서 발효시키는 것을 포함하는 것인, 레반의 제조방법
|
22 |
22
제18항에 있어서,상기 단계는 형질전환 미생물을 당밀을 포함하는 배지에서 발효시키는 것을 포함하는 것인, 레반의 제조방법
|