| 1 |
1
3-하이드록시프로피온산(3-hydroxypropionic acid, 3-HP), 3-하이드록시이소뷰티레이트(3-hydroxyisobutyrate; 3HIB) 또는 3-하이드록시뷰티레이트(3-hydroxybutyrate; 3-HB)에 반응하는 LysR 단백질과의 결합 부위를 포함하는 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 유도성 프로모터로서, 상기 LysR 단백질과의 결합 부위는 서열번호 5 내지 서열번호 43으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나로 표시된 염기서열로 이루어지거나, 상기 서열번호 5 내지 서열번호 43으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나로 표시된 염기서열로 이루어진 역반복(Inverted Repeat) 서열 및 이와 쌍을 이루는 역반복 서열이 2번 반복되는 것을 특징으로 하는 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 유도성 프로모터
|
| 2 |
2
제1항에 있어서, 상기 프로모터는 3-HP 분해능을 가진 미생물로부터 유래한 것을 특징으로 하는 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 유도성 프로모터
|
| 3 |
3
제2항에 있어서, 상기 3-HP 분해능을 가진 미생물은 아크로모박터 데니트리피칸스(Achromobacter denitrificans), 아시도보락스 아베네(Acidovorax avenae) subsp
|
| 4 |
4
제1항에 있어서, 상기 LysR 단백질은 헬릭스-턴-헬릭스(helix-turn-helix) 구조로 이루어져 DNA와 결합하는 N-말단 도메인, 3-HP, 3HIB 또는 3-HB와 결합하는 C-말단 도메인 및 LysR 단백질 이합체 안정화에 기여하는 C-말단 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 유도성 프로모터
|
| 5 |
5
제4항에 있어서, 상기 헬릭스-턴-헬릭스(helix-turn-helix) 구조로 이루어져 DNA와 결합하는 N-말단 도메인은 서열번호 1 또는 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 유도성 프로모터
|
| 6 |
6
제4항에 있어서, 상기 3-HP, 3HIB 또는 3-HB와 결합하는 C-말단 도메인은 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 유도성 프로모터
|
| 7 |
7
제4항에 있어서, 상기 LysR 단백질 이합체 안정화에 기여하는 C-말단 도메인은 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 유도성 프로모터
|
| 8 |
8
제1항에 있어서, 상기 LysR 단백질과의 결합 부위는 LysR 단백질 이량체(dimer)가 2개 결합하는 것을 특징으로 하는 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 유도성 프로모터
|
| 9 |
9
삭제
|
| 10 |
10
삭제
|
| 11 |
11
제1항에 있어서, 상기 LysR 단백질과의 결합 부위는 서열번호 44 또는 서열번호 45로 표시되는 염기서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 유도성 프로모터
|
| 12 |
12
삭제
|
| 13 |
13
제1항 내지 제8항 및 제11항 중 어느 한 항에 따른 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 유도성 프로모터를 포함하는 재조합 발현벡터
|
| 14 |
14
제13항에 있어서, 상기 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 유도성 프로모터에 작동가능하게 연결된 외래 단백질을 코딩하는 유전자를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 발현벡터
|
| 15 |
15
제14항에 있어서, 상기 외래 단백질은 글리세롤 디하이드라테이즈(glycerol dehydratase; DhaB), 글리세롤 디하이드라테이즈 재활성화 효소(DhaB reactivase; GdrAB) 및 α-케토글루타릭 세미알데하이드 디하이드라지네이즈(α-ketoglutaric semialdehyde dehydrogenase; KGSADH)인 것을 특징으로 하는 재조합 발현벡터
|
| 16 |
16
제13항에 따른 재조합 발현벡터로 형질전환된 재조합 미생물
|
| 17 |
17
제16항에 있어서, 상기 미생물은 3-HP 생산능을 가진 것을 특징으로 하는 재조합 미생물
|
| 18 |
18
제17항에 있어서, 상기 미생물은 슈도모나스 데니트리피칸스(Pseudomonas denitrificans)인 것을 특징으로 하는 재조합 미생물
|
| 19 |
19
제17항에 있어서, 상기 미생물은 슈도모나스 데니트리피칸스(Pseudomonas denitrificans) 균주에서 3-HP 분해에 관련된 3hpdh, 3hibdh 및 mmsadh 유전자가 결실된 슈도모나스 데니트리피칸스(P
|
| 20 |
20
제16항에 따른 재조합 미생물을 배양하는 단계를 포함하는 3-HP 생산방법
|
| 21 |
21
3-하이드록시프로피온산(3-hydroxypropionic acid, 3-HP), 3-하이드록시이소뷰티레이트(3-hydroxyisobutyrate; 3HIB) 또는 3-하이드록시뷰티레이트(3-hydroxybutyrate; 3-HB)에 반응하는 LysR 단백질을 코딩하는 lysR 유전자, 상기 LysR 단백질과의 결합 부위를 포함하는 프로모터 및 발현 목적 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 반응성 재조합 유전자 발현 카세트로서, 상기 LysR 단백질과의 결합 부위는 서열번호 5 내지 서열번호 43으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나로 표시된 염기서열로 이루어지거나, 상기 서열번호 5 내지 서열번호 43으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나로 표시된 염기서열로 이루어진 역반복(Inverted Repeat) 서열 및 이와 쌍을 이루는 역반복 서열이 2번 반복되는 것을 특징으로 하는 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 반응성 재조합 유전자 발현 카세트
|
| 22 |
22
제21항에 있어서, 상기 LysR 단백질 또는 상기 프로모터는 3-HP 분해능을 가진 미생물로부터 유래한 것을 특징으로 하는 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 반응성 재조합 유전자 발현 카세트
|
| 23 |
23
제22항에 있어서, 상기 3-HP 분해능을 가진 미생물은 아크로모박터 데니트리피칸스(Achromobacter denitrificans), 아시도보락스 아베네(Acidovorax avenae) subsp
|
| 24 |
24
제21항에 있어서, 상기 LysR 단백질은 헬릭스-턴-헬릭스(helix-turn-helix) 구조로 이루어져 DNA와 결합하는 N-말단 도메인, 3-HP, 3HIB 또는 3-HB와 결합하는 C-말단 도메인 및 LysR 단백질 이합체 안정화에 기여하는 C-말단 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 반응성 재조합 유전자 발현 카세트
|
| 25 |
25
제24항에 있어서, 상기 헬릭스-턴-헬릭스(helix-turn-helix) 구조로 이루어져 DNA와 결합하는 N-말단 도메인은 서열번호 1 또는 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 반응성 재조합 유전자 발현 카세트
|
| 26 |
26
제24항에 있어서, 상기 3-HP, 3HIB 또는 3-HB와 결합하는 C-말단 도메인은 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 반응성 재조합 유전자 발현 카세트
|
| 27 |
27
제24항에 있어서, 상기 LysR 단백질 이합체 안정화에 기여하는 C-말단 도메인은 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 반응성 재조합 유전자 발현 카세트
|
| 28 |
28
삭제
|
| 29 |
29
삭제
|
| 30 |
30
제21항에 있어서, 상기 LysR 단백질과의 결합 부위는 서열번호 44 또는 서열번호 45로 표시되는 염기서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 반응성 재조합 유전자 발현 카세트
|
| 31 |
31
삭제
|
| 32 |
32
제21항 내지 제27항 및 제30항 중 어느 한 항에 따른 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 반응성 재조합 유전자 발현 카세트를 포함하는 재조합 발현벡터
|
| 33 |
33
제32항에 따른 재조합 발현벡터로 형질전환된 재조합 미생물
|
| 34 |
34
제21항 내지 제27항 및 제30항 중 어느 한 항에 따른 3-HP, 3HIB 또는 3-HB 반응성 재조합 유전자 발현 카세트가 숙주세포의 염색체 내에 삽입되어 있는 재조합 미생물
|
| 35 |
35
제33항에 따른 재조합 미생물을 배양하는 단계를 포함하는 발현 목적 단백질 생산방법
|
| 36 |
36
제35항에 있어서, 상기 재조합 미생물을 배양하는 단계는 3-HP를 첨가하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 발현 목적 단백질 생산방법
|
