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(i) 제1프로모터-리보솜 결합부위(Ribosome binding site, RBS)-리프레서(repressor) 삽입부위-전사 종결부위(transcription terminator site, TTS); 및(ii) 제2프로모터-큐메이트 작동유전자(Cumate Operator, Cuo)-리보솜 결합 부위(Ribosome binding site, RBS)-멀티 클로닝 부위(multiple cloning site)-전사 종결부위(transcription terminator site, TTS)를 포함하는, 큐메이트 오페론에 의해 조절되는 유전자 발현용 카세트
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제1항에 있어서, 상기 유전자 발현용 카세트는 (a) FspI 절단부위, (b) GapA 프로모터, (c) 리보솜 결합부위(Ribosome binding site, RBS), (d) ApaI 절단부위, (e) SphI 절단부위, (f) T1/TE 전사 종결부위(T1/TE transcription terminator site, TTS), (g) T7 프로모터, (h) 큐메이트 작동유전자(Cumate Operator, Cuo), (i) 리보솜 결합부위, (j) 멀티 클로닝 부위(multiple cloning site), (k) T7 전사 종결부위(T7 transcription terminator site, TTS), 및 (l) BglII 절단부위가 순차적으로 구성된 것을 특징으로 하는 유전자 발현용 카세트
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제1항에 있어서, 상기 유전자 발현용 카세트는 서열번호 1로 표시되는 것을 특징으로 하는 유전자 발현용 카세트
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제1항에 있어서, 상기 멀티 클로닝 부위에는 SpeI, MluI, ScaI 및 KpnI 절단부위로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상이 포함된 것을 특징으로 하는 유전자 발현용 카세트
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제1항에 있어서, 상기 유전자 발현용 카세트의 멀티 클로닝 부위에 외래 유전자가 삽입된 것을 특징으로 하는 유전자 발현용 카세트
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제5항에 있어서, 상기 외래 유전자는 녹색형광단백질(green fluorescene protein, GFP)의 유전자인 것을 특징으로 하는 유전자 발현용 카세트
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제1항에 있어서, 상기 큐메이트 오페론을 조절하기 위해서 (i)의 리프레서 삽입부위에 도입되는 유전자는 cymR(Cumate Repressor)인 것을 특징으로 하는 유전자 발현용 카세트
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제7항에 있어서, 상기 cymR은 유도물질 존재시, 큐메이트 작동유전자에 결합하지 않고 불활성화되는 것을 특징으로 하는 유전자 발현용 카세트
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제8항에 있어서, 상기 유도물질은 p-에틸벤조산(p-ethylbenzoic acid), p-프로필벤조산(p-propylbenzoic acid), 쿠믹산(cumic acid), p-이소부틸벤조산(p-isobutylbenzoic acid), p-제3부틸벤조산(p-tertbutylbenzoic acid), p-N-디메틸아미노벤조산(p-N-dimethylaminobenzoic acid), p-N-에틸아미노벤조산(p-N-ethylaminobenzoic acid) 및 큐메이트(cumate)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 유전자 발현용 카세트
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제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 유전자 발현용 카세트를 함유하는 발현벡터
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제10항의 발현벡터가 도입된 재조합 미생물
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제11항에 있어서, 상기 미생물은 대장균인 것을 특징으로 하는 재조합 미생물
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제11항의 재조합 미생물을 배양하는 1단계;상기 배양된 미생물에 제9항의 유도물질을 첨가하여 cymR을 불활성시키는 2단계; 및상기 cymR의 불활성화에 의해 도입된 외래 유전자의 단백질을 생산하는 3단계;를 포함하는 외래 유전자의 단백질을 생산하는 방법
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