| 1 |
1
하기 모든 유전자의 핵산 서열 또는 그 상보 가닥 분자가 집적된 디젤 배기 미립자(diesel exhaust particle) 노출 여부 확인용 DNA 마이크로어레이 칩: 유전자등록번호(GenBank) NM_002986(CCL11, Chemokine(C-C motif) ligand 11), 유전자등록번호(GenBank) NM_014707(HDAC9, Histone deacetylase 9), 유전자등록번호(GenBank) NM_198389(PDPN, Podoplanin), 유전자등록번호(GenBank) NM_000065(C6, Complement component 6), 유전자등록번호(GenBank) NM_015364(LY96, Lymphocyte antigen 96), 유전자등록번호(GenBank) NM_000698(ALOX5, Arachidonate 5-lipoxygenase), 유전자등록번호(GenBank) NM_080706(TRPV1, Transient receptor potential cation channel, subfamily V, member 1), 유전자등록번호(GenBank) NM_138938(REG3A, Regenerating islet-derived 3 alpha), 유전자등록번호(GenBank) NM_004991(MECOM, MDS1 and EVI1 complex locus), 유전자등록번호(GenBank) NM_002558(P2RX1, Purinergic receptor P2X, ligand-gated ion channel, 1), 유전자등록번호(GenBank) NM_000756(CRH, Corticotropin releasing hormone), 유전자등록번호(GenBank) NM_022468(MMP25, Matrix metallopeptidase 25), 유전자등록번호(GenBank) NM_000612(IGF2, Insulin-like growth factor 2(somatomedin A)), 유전자등록번호(GenBank) NM_138284(IL17D, Interleukin 17D), 유전자등록번호(GenBank) NM_002982(CCL2, Chemokine(C-C motif) ligand 2), 유전자등록번호(GenBank) NM_001570(IRAK2, Interleukin-1 receptor-associated kinase 2), 유전자등록번호(GenBank) NM_002852(PTX3, Pentraxin-related gene, rapidly induced by IL-1 beta), 유전자등록번호(GenBank) NM_001080424(KDM6B, Lysine(K)-specific demethylase 6B), 유전자등록번호(GenBank) NM_030754(SAA2, Serum amyloid A2), 유전자등록번호(GenBank) NM_001718(BMP6, Bone morphogenetic protein 6), 유전자등록번호(GenBank) NM_007115(TNFAIP6, Tumor necrosis factor, alpha-induced protein 6), 유전자등록번호(GenBank) NM_000331(SAA1, Serum amyloid A1), 유전자등록번호(GenBank) NM_000204(CFI, Complement factor I), 유전자등록번호(GenBank) NM_002985(CCL5, Chemokine(C-C motif) ligand 5) 및 유전자등록번호(GenBank) NM_002984(CCL4, Chemokine(C-C motif) ligand 4)
|
| 2 |
2
1) 디젤 배기 미립자 노출이 의심되는 실험군 및 정상 대조군으로부터 분리된 체세포에서 각각의 RNA를 추출하는 단계;2) 상기 단계 1)의 실험군 및 대조군의 RNA를 cDNA로 합성하면서 실험군과 대조군을 각기 다른 형광물질로 표지하는 단계;3) 상기 단계 2)의 각기 다른 형광물질로 표지된 cDNA를 제 1항의 DNA 마이크로어레이 칩과 혼성화하는 단계;4) 반응한 DNA 마이크로어레이칩을 분석하는 단계; 및5) 분석한 데이터에서 실험군의 DNA 마이크로어레이칩에 집적된 유전자들의 발현 정도를 대조군과 비교하여 확인하는 단계를 포함하는 디젤 배기 미립자에 대한 노출 여부 확인방법
|
| 3 |
3
제 2항에 있어서, 단계 1)의 체세포는 인간 폐세포 또는 인간 폐암조직 유래 세포인 것을 특징으로 하는 디젤 배기 미립자에 대한 노출 여부 확인 방법
|
| 4 |
4
제 3항에 있어서, 상기 인간 폐암조직 유래 세포는 A549인 것을 특징으로 하는 디젤 배기 미립자에 대한 노출 여부 확인 방법
|
| 5 |
5
제 2항에 있어서, 단계 3)의 형광물질은 Cy3, Cy5, 폴리-L-라이신-플로오르세인 이소티오시아네이트(poly L-lysine-fluorescein isothiocyanate; FITC), RITC(rhodamine-B-isothiocyanate) 및 로다민(rhodamine)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 디젤 배기 미립자에 대한 노출 여부 확인방법
|
| 6 |
6
1) 디젤 배기 미립자 노출이 의심되는 실험군 및 정상 대조군으로부터 분리된 체세포에서 각각의 RNA를 추출하는 단계;2) 상기 RNA를 하기 유전자에 상보적이고 하기 유전자를 증폭할 수 있는 프라이머쌍을 사용하여 실시간 RT-PCR(Real-time reverse transcript polymerase chain reaction)을 수행하는 단계:유전자등록번호(GenBank) NM_014707(HDAC9, Histone deacetylase 9), 유전자등록번호(GenBank) NM_015364(LY96, Lymphocyte antigen 96), 유전자등록번호(GenBank) NM_022468(MMP25, Matrix metallopeptidase 25), 유전자등록번호(GenBank) NM_000612(IGF2, Insulin-like growth factor 2(somatomedin A)), 유전자등록번호(GenBank) NM_002982(CCL2, Chemokine(C-C motif) ligand 2), 유전자등록번호(GenBank) NM_030754(SAA2, Serum amyloid A2), 유전자등록번호(GenBank) NM_001718(BMP6, Bone morphogenetic protein 6), 유전자등록번호(GenBank) NM_000331(SAA1, Serum amyloid A1) 및 유전자등록번호(GenBank) NM_002984(CCL4, Chemokine(C-C motif) ligand 4); 및3) 단계 2)의 실험군의 유전자 산물을 대조군과 비교하여 발현 정도를 확인하는 단계를 포함하는 디젤 배기 미립자에 대한 노출 여부 확인방법
|
| 7 |
7
제 6항에 있어서, 단계 2)의 프라이머 쌍은 프라이머 쌍 1 내지 9로 구성된 군으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 디젤 배기 미립자에 대한 노출 여부 확인 방법:프라이머 쌍 1: 서열번호 1로 기재되는 정방향 프라이머 및 서열번호 2로 기재되는 역방향 프라이머;프라이머 쌍 2: 서열번호 3으로 기재되는 정방향 프라이머 및 서열번호 4로 기재되는 역방향 프라이머;프라이머 쌍 3: 서열번호 5로 기재되는 정방향 프라이머 및 서열번호 6으로 기재되는 역방향 프라이머;프라이머 쌍 4: 서열번호 7로 기재되는 정방향 프라이머 및 서열번호 8로 기재되는 역방향 프라이머; 프라이머 쌍 5: 서열번호 9로 기재되는 정방향 프라이머 및 서열번호 10으로 기재되는 역방향 프라이머; 및프라이머 쌍 6: 서열번호 11로 기재되는 정방향 프라이머 및 서열번호 12로 기재되는 역방향 프라이머
|
| 8 |
8
제 1항의 DNA 마이크로어레이 칩을 포함하는 디젤 배기 미립자 노출 여부 확인용 키트
|
| 9 |
9
제 8항에 있어서, 인간 체세포를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 디젤 배기 미립자 노출 여부 확인용 키트
|
| 10 |
10
제 9항에 있어서, 인간 체세포는 인간 폐세포 또는 인간 폐암조직 유래 세포인 것을 특징으로 하는 디젤 배기 미립자 노출 여부 확인용 키트
|
| 11 |
11
하기 유전자에 상보적이고 하기 유전자를 증폭할 수 있는 프라이머 쌍을 모두 포함하는 디젤 배기 미립자 노출 여부 확인용 키트:유전자등록번호(GenBank) NM_014707(HDAC9, Histone deacetylase 9), 유전자등록번호(GenBank) NM_015364(LY96, Lymphocyte antigen 96), 유전자등록번호(GenBank) NM_022468(MMP25, Matrix metallopeptidase 25), 유전자등록번호(GenBank) NM_000612(IGF2, Insulin-like growth factor 2(somatomedin A)), 유전자등록번호(GenBank) NM_002982(CCL2, Chemokine(C-C motif) ligand 2), 유전자등록번호(GenBank) NM_030754(SAA2, Serum amyloid A2), 유전자등록번호(GenBank) NM_001718(BMP6, Bone morphogenetic protein 6), 유전자등록번호(GenBank) NM_000331(SAA1, Serum amyloid A1) 및 유전자등록번호(GenBank) NM_002984(CCL4, Chemokine(C-C motif) ligand 4)
|
| 12 |
12
제 11항에 있어서, 프라이머 쌍은 증폭 산물이 100 내지 300 bp가 되도록 설계된 18 내지 30머 길이의 정방향 및 역방향 프라이머 쌍인 것을 특징으로 하는 디젤 배기 미립자 노출 여부 확인용 키트
|
| 13 |
13
제 12항에 있어서, 프라이머 쌍은 하기 프라이머 쌍 1 내지 9로 이루어지는 것을 특징으로 하는 디젤 배기 미립자 노출 여부 확인용 키트:프라이머 쌍 1: 서열번호 1로 기재되는 정방향 프라이머 및 서열번호 2로 기재되는 역방향 프라이머;프라이머 쌍 2: 서열번호 3으로 기재되는 정방향 프라이머 및 서열번호 4로 기재되는 역방향 프라이머;프라이머 쌍 3: 서열번호 5로 기재되는 정방향 프라이머 및 서열번호 6으로 기재되는 역방향 프라이머;프라이머 쌍 4: 서열번호 7로 기재되는 정방향 프라이머 및 서열번호 8로 기재되는 역방향 프라이머; 프라이머 쌍 5: 서열번호 9로 기재되는 정방향 프라이머 및 서열번호 10으로 기재되는 역방향 프라이머; 및프라이머 쌍 6: 서열번호 11로 기재되는 정방향 프라이머 및 서열번호 12로 기재되는 역방향 프라이머
|
