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개선된 분할 녹색 형광 단백질 상보 시스템 및 이의 용도(Enhanced split-GFP complementation system, and use thereof)

  • 기술번호 : KST2017007205
  • 담당센터 : 경기기술혁신센터
  • 전화번호 : 031-8006-1570
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 개선된 분할 녹색 형광 단백질 상보 기법 (enhanced split-GFP complementation assay) 개발에 관한 것이다. 또한 본 발명은 녹색형광 단백질 두 절편에 각각 스트렙타비딘 (streptavidin)과 스트렙타비딘 결합 펩타이드 (streptavidin binding peptide, SBP)을 융합하여, 두 녹색형광 단백질 절편이 낮은 농도에서도 두 절편의 상보에 의한 녹색형광 신호를 탐지하도록 민감도를 개선시킨 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 개선된 분할 녹색 형광 단백질 단편 (split-GFP fragment)을 융합한, 세포질 침투능을 가진 완전한 이뮤노글로불린(immunoglobulin) 형태의 항체에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 개선된 분할 녹색 형광 단백질 단편 및 이를 융합한 세포질 침투능을 가지는 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 개선된 분할 녹색 형광 단백질 상보 기법 (enhanced split-GFP complementation assay)을 이용하여 완전한 이뮤노글로불린(immunoglobulin) 형태의 항체가 세포막을 침투하여 세포질에 위치하는 것을 직접적으로 증명할 수 있는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 개선된 분할 녹색 형광 단백질 상보 기법 (split-GFP complementation assay)을 이용하여 완전한 이뮤노글로불린(immunoglobulin) 형태의 항체가 세포막을 침투하여 세포질에 위치하는 양을 정량하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 개선된 분할 녹색 형광 단백질 상보 기법 (split-GFP complementation assay)을 이용하여 기존 세포 침투 물질이 세포막을 침투하여 세포질에 위치하는 것을 직접적으로 증명할 수 있는 방법과 세포질에 위치하는 양을 정량하는 방법에 관한 것이다.특히, 본 발명에 따른 개선된 분할 녹색 형광 단백질 단편을 융합하여 세포질 침투능을 가지는 완전한 이뮤노글로불린 형태의 항체가 가지는 구조 및 수용성에 영향주지 않으면서 살아있는 세포내부로 침투 및 세포질에 잔류하는 성질을 확인할 수 있다. 또한, 복잡하고 비용이 많이 드는 화학적 표지 없이 유전공학적인 펩타이드 융합만으로 상기 개선된 분할 녹색 형광 단백질 상보 기법이 가능하다. 또한, 세포질에 위치하는 세포질 침투능을 가지는 완전한 이뮤노글로불린 형태의 항체의 양, 전체 처리한 양에 대비하여 세포질 내부에 위치하게 되는 비율 및 세포 내부 농도 역시 계산할 수 있다. 또한 항체뿐만 아니라 기존 세포 침투 물질에 개선된 분할 녹색 형광 단백질 단편을 융합함으로써 세포질 내부에 위치함을 직접적으로 증명할 수 있으며, 세포질 내부에 위치하는 항체의 절대적인 양을 정량할 수 있다.또한 상기 시스템은 세포질 내부에 침투한 살아있는 세포 내부의 녹색 형광 단백질에 의한 녹색 형광을 측정함으로써 대량고속선별 (high throughput screening)에 적용이 가능하며, 세포질에 높은 효율로 도달하는 후보 항체 선별 및 도출에 활용할 수 있다.
Int. CL G01N 33/58 (2015.11.25)
CPC G01N 33/582(2013.01) G01N 33/582(2013.01) G01N 33/582(2013.01)
출원번호/일자 1020150143278 (2015.10.14)
출원인 아주대학교산학협력단
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2017-0043783 (2017.04.24) 문서열기
공고번호/일자 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2015.10.14)
심사청구항수 21

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 아주대학교산학협력단 대한민국 경기도 수원시 영통구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김용성 대한민국 경기도 수원시 팔달구
2 김지선 대한민국 경기도 고양시 덕양구
3 최동기 대한민국 경기도 수원시 장안구
4 박성욱 대한민국 인천광역시 남동구
5 신승민 대한민국 서울특별시 성북구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 김순웅 대한민국 서울시 구로구 디지털로**길 **, ***호 (구로동,에이스테크노타워*차)(정진국제특허법률사무소)
2 장제환 대한민국 서울특별시 강남구 언주로 ***, **층 (역삼동, 윤익빌딩)(*T국제특허법률사무소)
3 이처영 대한민국 서울특별시 강남구 언주로 ***, **층 (역삼동, 윤익빌딩)(*T국제특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 오름테라퓨틱 주식회사 대전광역시 유성구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2015.10.14 수리 (Accepted) 1-1-2015-0991223-62
2 [대리인선임]대리인(대표자)에 관한 신고서
[Appointment of Agent] Report on Agent (Representative)
2016.08.12 수리 (Accepted) 1-1-2016-0784216-87
3 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search
2016.10.10 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
4 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search
2016.12.13 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-6-2016-0166596-07
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2016.12.21 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2016-0922141-02
6 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)
2017.02.21 수리 (Accepted) 1-1-2017-0179054-97
7 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2017.03.21 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2017-0279471-35
8 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2017.03.21 수리 (Accepted) 1-1-2017-0279470-90
9 등록결정서
Decision to grant
2017.07.24 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2017-0515890-79
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
(1) 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 녹색형광단백질 제1절편을 세포의 세포질 내에 발현시키는 단계;(2) 세포질내로 침투하거나 침투할 것으로 예상되는 검출물질이 융합된 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 녹색형광단백질 제2절편을 상기 제 (1) 단계의 세포에 처리하는 단계; 및(3) 녹색형광신호를 확인하는 단계;를 포함하고, 상기 검출물질은 항체, 항체의 절편, 펩타이드, 독소, 바이러스 단백질 및 리포좀으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 검출물질의 세포질 침투능 판단 방법
2 2
청구항 1에 있어서, 상기 녹색형광신호는 세포 외부에 처리된 검출 물질이 세포질 내로 침투하여 녹색형광 단백질 상보로 생성되는 것인, 방법
3 3
청구항 1에 있어서, 상기 녹색형광단백질 제1절편은 스트렙타비딘과 융합된 것인, 방법
4 4
청구항 3에 있어서, 상기 융합은 링커펩타이드에 의한 것인, 방법
5 5
청구항 3에 있어서, 스트렙타비딘과 융합된 녹색형광단백질 제1절편은 서열번호 3의 아미노산 서열로 이루어진 것인, 방법
6 6
청구항 1에 있어서, 상기 녹생형광단백질 제2절편은 스트렙타비딘 결합 펩타이드와 융합된 것인, 방법
7 7
청구항 6에 있어서, 상기 스트렙타비딘 결합 단백질은 야생형 스트렙타비딘 결합 펩타이드, 이의 절편, 또는 이의 변이체인 것인, 방법
8 8
청구항 6에 있어서, 상기 스트렙타비딘 결합 펩타이드는 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 것인, 방법
9 9
삭제
10 10
서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 녹색형광단백질 제1절편
11 11
청구항 10에 있어서, 상기 녹색형광단백질 제1절편은 스트렙타비딘과 융합된 것인, 녹색형광단백질 제1절편
12 12
청구항 10에 있어서, 상기 녹색형광단백질 제1절편은 세포질에 존재하는 것인, 녹색형광단백질 제1절편
13 13
청구항 11에 있어서, 상기 스트렙타비딘과 녹색형광단백질 제1절편은 링커펩타이드에 의하여 융합된 것인, 녹색형광단백질 제1절편
14 14
청구항 11에 있어서, 스트렙타비딘과 융합된 녹색형광단백질 제1절편은 서열번호 3의 아미노산 서열로 이루어진 것인, 녹색형광단백질 제1절편
15 15
서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 제1절편 및 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 녹색형광단백질 제2절편이 융합된 분할 녹색형광단백질
16 16
청구항 15에 있어서, 상기 제2절편은 스트렙타비딘 결합 펩타이드와 융합된 것인, 분할 녹색형광단백질
17 17
청구항 16에 있어서, 상기 스트렙타비딘 결합 펩타이드는 야생형 스트렙타비딘 결합 펩타이드, 이의 절편, 또는 이의 변이체인 것인, 분할 녹색형광단백질
18 18
청구항 16에 있어서, 상기 스트렙타비딘 결합 펩타이드는 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 것인, 분할 녹색형광단백질
19 19
청구항 15에 있어서, 상기 제2절편은 세포질내로 침투하거나 침투할 것으로 예상되는 항체, 항체의 절편, 펩타이드, 독소, 바이러스 단백질 및 리포좀으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 검출물질과 융합된 것인, 분할 녹색형광단백질
20 20
삭제
21 21
청구항 10 내지 14 중 어느 한 항의 녹색형광단백질 제1절편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드
22 22
청구항 15 내지 19 중 어느 한 항의 분할 녹색형광단백질을 포함하는, 세포질 침투능 검출 시스템
23 23
청구항 15 내지 19 중 어느 한 항의 분할 녹색형광단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드
지정국 정보가 없습니다
패밀리정보가 없습니다
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 미래창조과학부 아주대학교 산학협력단 미래유망융합기술 파이오니어 사업 (세포내 단백질 제어 항체 융합연구단) 세포내 단백질 상호작용 제어 항체 기술
2 교육부 아주대학교 산학협력단 이공분야 중점연구소지원사업 신개념 그린융합소재 발굴 및 확보