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멀티플렉스 PCR-기반된 차세대 시퀀싱을 이용한 한타바이러스 전장 유전체 서열 획득 방법 및 이의 용도(Hantavirus Whole Genome Sequence Identification Methods Using a Multiplex PCR-based Next-Generation Sequencing and Uses Thereof)

  • 기술번호 : KST2017007348
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 멀티플렉스 PCR-기반된 차세대 시퀀싱을 이용한 한타바이러스 전장 유전체 서열 획득 방법 및 이의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 방법, 키트 및 조성물은 목적 바이러스의 일부 게놈 서열을 증폭할 수 있는 정방향 및 역방향 프라이머 쌍들을 포함하는 멀티플렉스 프라이머 세트로 이루어진 멀티플렉스 프라이머 세트 풀을 이용하고, 이에 따라 시료 내 목적 바이러스의 존재 유무를 간편하고 빠르게 확인할 수 있다. 또한, 상기 멀티플렉스 프라이머 세트에 포함된 프라이머 쌍들에 의해 얻어지는 100 내지 200 bp 길이의 서열 단편들에서 5'-to-3' 방향으로 서로 인접하는 2개의 단편들은 중첩 서열(overlapping sequence)을 포함한다. 이에 따라, 상기 멀티플렉스 프라이머 세트 풀에 의해 증폭되는 단편들을 모두 취합하여 5'-to-3' 방향으로 서로 중첩/연결시키는 경우 목적 바이러스의 전장 게놈 서열을 용이하게 획득할 수 있다. 따라서, 본 발명의 방법, 키트 및 조성물은 목적 바이러스(예컨대, 한타바이러스)의 전장 게놈 서열을 높은 분포도(high-depth coverage)로 매우 정확하고 신속하게 얻을 수 있게 해주며, 이를 통해 한타바이러스 유발 질환의 진단에 보다 효과적으로 적용할 수 있다.
Int. CL C12Q 1/68 (2015.11.26)
CPC C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01)
출원번호/일자 1020150144875 (2015.10.16)
출원인 국방과학연구소
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2017-0045019 (2017.04.26) 문서열기
공고번호/일자 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2015.10.16)
심사청구항수 11

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 국방과학연구소 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 이대상 대한민국 경상북도 김천시 부곡길 ***
2 송동현 대한민국 대전광역시 유성구
3 정성태 대한민국 서울특별시 강남구
4 송진원 대한민국 서울특별시 서초구
5 김원근 대한민국 서울특별시 중랑구
6 명현군 대한민국 대전광역시 유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 박장원 대한민국 서울특별시 강남구 강남대로 ***, *층~*층 (논현동, 비너스빌딩)(박장원특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 국방과학연구소 대전광역시 유성구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2015.10.16 수리 (Accepted) 1-1-2015-1003758-48
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search
2016.09.20 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search
2016.11.21 수리 (Accepted) 9-1-2016-0048337-93
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2017.06.22 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2017-0436123-03
5 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2017.08.22 수리 (Accepted) 1-1-2017-0811274-83
6 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2017.08.22 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2017-0811279-11
7 등록결정서
Decision to grant
2017.12.22 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2017-0899424-11
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
시료 내 한탄바이러스(Hantaan virus, HTNV)의 전장 게놈 서열(Whole genome sequences) 확인 방법으로서, 상기 방법은:(a) 서로 다른 100 내지 200 bp 길이의 한탄바이러스(HTNV)의 게놈 서열 단편들을 증폭하는 다수의 정방향 및 역방향 프라이머 쌍들로 이루어진 서로 다른 멀티플렉스 프라이머 세트들을 포함하는 멀티플렉스 프라이머 세트 풀을 제조하는 단계로서, 상기 하나의 멀티플렉스 프라이머 세트에 의해 증폭되는 한탄바이러스(HTNV) 게놈 서열 단편들은 한탄바이러스(HTNV) 게놈 중 1 내지 2kb 서열을 포괄하며, 상기 단편들에서 5'-to-3' 방향으로 서로 인접하는 2개의 단편들은 중첩 서열(overlapping sequence)을 포함하고, 상기 중첩 서열은 40 내지 60 bp의 길이로 선행하는 단편의 3'-말단 및 후행하는 단편의 5'-말단에 공통적으로 존재하며, 상기 멀티플렉스 프라이머 세트 풀에 의해 증폭되는 모든 단편들을 5'-to-3' 방향으로 서로 중첩하는 경우 한탄바이러스(HTNV)의 전장 게놈 서열을 포함하는 것인 단계;(b) 한탄바이러스(HTNV) 감염 시료에서 상기 제조된 프라이머 세트 풀을 이용하여 차세대 시퀀싱(next generation sequencing)을 사용하기 위한 시료 전처리(sample pre-processing) 과정의 일부로 멀티플렉스 중합효소 연쇄반응(multiplex polymerase chain reaction, mPCR)을 실시하는 단계; 및(c) 상기 증폭된 mPCR 산물들을 포함하는 한탄바이러스(HTNV) 서열 라이브러리를 차세대 시퀀싱(next generation sequencing, NGS)으로 분석하는 단계를 포함하고, 상기 멀티플렉스 프라이머 세트 풀은 서열번호 1 내지 서열번호 472로 이루어진 정방향 프라이머 및 역방향 프라이머 쌍을 포함하는 방법
2 2
제1항에 있어서, 상기 방법은 단계 (b) 후에, 단계 (a)에서 제조된 멀티플렉스 프라이머 세트 풀과 상이한 프라이머 쌍으로 구성된 멀티플렉스 프라이머 세트들을 포함하는 두 번째 멀티플렉스 프라이머 세트 풀을 제조하여 mPCR을 실시하는 단계(b-1)를 추가적으로 포함하는 것인 방법
3 3
제1항에 있어서, 상기 시료는 혈액, 혈청, 객담, 소변 또는 생체 조직으로부터 얻는 것인 방법
4 4
제1항에 있어서, 상기 시료는 RNA 또는 cDNA인 것인 방법
5 5
삭제
6 6
삭제
7 7
제1항에 있어서, 상기 방법은 한탄바이러스(HTNV)의 L, M 또는 S 분절(segment)을 확인하는 것인 방법
8 8
멀티플렉스 프라이머 세트 풀을 포함하는 시료 내 한탄바이러스(HTNV) 진단 키트로서, 상기 멀티플렉스 프라이머 세트 풀은 서열번호 1 내지 서열번호 472로 이루어진 정방향 프라이머 및 역방향 프라이머 쌍을 포함하고 상기 프라이머 쌍은 한타바이러스 L, M 및 S 분절 내 게놈 서열을 증폭하는 것인 키트
9 9
제8항에 있어서, 상기 시료는 혈액, 혈청, 객담, 소변 또는 생체 조직으로부터 얻는 것인 키트
10 10
제8항에 있어서, 상기 시료는 RNA 또는 cDNA인 것인 키트
11 11
제8항에 있어서, 상기 키트는 PCR에 따라 실시되는 것인 키트
12 12
멀티플렉스 프라이머 세트 풀을 포함하는 한탄바이러스(HTNV) 유발 질환 검출용 조성물로서, 상기 멀티플렉스 프라이머 세트 풀은 서열번호 1 내지 서열번호 472로 이루어진 정방향 프라이머 및 역방향 프라이머 쌍을 포함하고 상기 프라이머 쌍은 한타바이러스 L, M 및 S 분절 내 게놈 서열을 증폭하는 것인 조성물
13 13
제12항에 있어서, 상기 한탄바이러스(HTNV) 유발 질환은 신증후 출혈열(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS) 또는 한타바이러스 심폐증후군(Hantavirus cardiopulmonary syndrome, HCPS)인 것인 조성물
지정국 정보가 없습니다
패밀리정보가 없습니다
국가 R&D 정보가 없습니다.