1 |
1
(a) 독성여부를 평가하고자 하는 화합물을 포유류 유래 세포에 처리하고, 이를 배양한 후, 배양된 세포의 배양액에서 엑소좀을 분리하는 단계;(b) 상기 엑소좀 내에 존재하는 서열번호 1의 hsa-miR-545, 서열번호 2의 hsa-miR-200a, 서열번호 3의 hsa-miR-379, 서열번호 4의 hsa-miR-27b, 서열번호 5의 hsa-miR-31, 서열번호 6의 hsa-miR-450a, 서열번호 7의 hsa-miR-181d, 서열번호 8의 hsa-miR-512-3p, 서열번호 9의 hsa-miR-220c, 서열번호 10의 hsa-miR-527, 서열번호 11의 hsa-miR-199a-5p, 서열번호 12의hsa-miR-525-5p, 서열번호 13의 hsa-miR-519, 서열번호 14의 hsa-miR-532-3p 및 서열번호 15의 hsa-miR-548e를 포함하는 엑소좀 유래 miRNA의 발현량을 측정하는 단계; (c) 독성여부를 평가하고자 하는 화합물을 처리하지 않은 대조군의 엑소좀 내에 존재하는 miRNA 발현량과 상기 (b) 단계의 miRNA의 발현량의 비교를 통해, 화합물에 의해 miRNA 발현이 증가 또는 감소하는 엑소좀 유래 바이오마커를 선별하는 단계; 및(d)상기 단계(c)에서 선별한 miRNA의 발현량 변화와 관련된 질병을 분석하는 단계;를 포함하는 엑소좀 바이오마커를 이용한 독성 평가 방법
|
2 |
2
제 1항에 있어서, 상기 단계 (b)에서 서열번호 16의 LRR23b(Leucine-rich repeat-containig protein 23 isoform b) 및 서열번호 17의 케라틴 5(keratin 5)로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 엑소좀 유래 단백질의 발현량을 더 포함하여 측정하는 것을 특징으로 하는 엑소좀 바이오마커를 이용한 독성 평가방법
|
3 |
3
제 1항에 있어서, 상기 (a) 단계의 독성여부를 평가하고자 하는 화합물은 황화납(PbS)인 것을 특징으로 하는 엑소좀 바이오마커를 이용한 독성 평가 방법
|
4 |
4
제 1항에 있어서, 상기 (a) 단계의 포유류 유래 세포는 N2a, SH-SY5Y, U937, Sk-Mel, A549, BEAS-2, HepG2, beta-TC, HIT-T15, HEK 293, TCMK1, THP1, ALM12, 성체줄기세포(adult stem cell) 및 배아줄기세포(embryonic stem cell)로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상 것을 특징으로 하는 엑소좀 바이오마커를 이용한 독성 평가 방법
|
5 |
5
제 1항에 있어서, 상기 서열번호 1의 hsa-miR-545, 서열번호 2의 hsamiR-200a, 서열번호 3의 hsa-miR-379, 서열번호 4의 hsa-miR-27b, 서열번호 5의 hsa-miR-31, 서열번호 6의 hsa-miR-450a 및 서열번호 7의 hsa-miR-181d로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 엑소좀 유래 miRNA는 화합물 독성에 의해 발현이 증가하는 것을 특징으로 하는 엑소좀 바이오마커를 이용한 독성 평가 방법
|
6 |
6
제 1항에 있어서, 상기 서열번호 8의 hsa-miR-512-3p, 서열번호 9의 hsa-miR-220c, 서열번호 10의 hsa-miR-527, 서열번호 11의 hsa-miR-199a-5p, 서열번호 12의 hsa-miR-525-5p, 서열번호 13의 hsa-miR-519, 서열번호 14의 hsa-miR-532-3p 및 서열번호 15의 hsa-miR-548e로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 엑소좀 유래 miRNA는 화합물 독성에 의해 발현이 감소하는 것을 특징으로 하는 엑소좀 바이오마커를 이용한 독성 평가 방법
|
7 |
7
제 1항에 있어서, 상기 (d) 단계에서 질병은 엑소좀 내의 miRNA 발현변화에 의해 유도되는 유기체 상처 및 기형(Organismal injury and abnormality), 생식계 질병(Reproductive system disease), 암(cancer) 및 염증 반응(inflammatory response)으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 엑소좀 바이오마커를 이용한 독성 평가 방법
|
8 |
8
엑소좀 유래 miRNA인 서열번호 1의 hsa-miR-545, 서열번호 2의 hsa-miR-200a, 서열번호 3의 hsa-miR-379, 서열번호 4의 hsa-miR-27b, 서열번호 5의 hsa-miR-31, 서열번호 6의 hsa-miR-450a, 서열번호 7의 hsa-miR-181d, 서열번호 8의 hsa-miR-512-3p, 서열번호 9의 hsa-miR-220c, 서열번호 10의 hsa-miR-527, 서열번호 11의 hsa-miR-199a-5p, 서열번호 12의 hsa-miR-525-5p, 서열번호 13의 hsa-miR-519, 서열번호 14의 hsa-miR-532-3p 및 서열번호 15의 hsa-miR-548e를 포함하는 화합물의 독성 평가용 엑소좀 바이오마커 조성물
|
9 |
9
제 8항에 있어서, 서열번호 16의 LRR23b(Leucine-rich repeat-containig protein 23 isoform b) 및 서열번호 17의 케라틴 5(keratin 5)로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 엑소좀 유래 단백질을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물의 독성 평가용 엑소좀 바이오마커 조성물
|
10 |
10
제 8항에 있어서, 상기 화합물은 황화납(PbS)인 것을 특징으로 하는 화합물의 독성 평가용 엑소좀 바이오마커 조성물
|
11 |
11
제 8항의 엑소좀 바이오마커 조성물의 엑소좀 유래 miRNA 전부 또는 일부에 상보적이고 바이오마커 유전자를 증폭할 수 있는 프라이머 쌍; 및 증폭 반응을 수행하기 위한 시약; 을 포함하는 화합물 독성 평가용 진단 키트
|
12 |
12
제 11항에 있어서, 상기 시약은 dNTP(dATP, dCTP, dGTP 및 dTTP); DNA 중합효소; 및 완충액(buffer solution);으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 화합물 독성 평가용 진단 키트
|
13 |
13
제 11항에 있어서, 서열번호 16의 LRR23b(Leucine-rich repeat-containig protein 23 isoform b) 및 서열번호 17의 케라틴 5(keratin 5)로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 엑소좀 유래 단백질에 특이적으로 결합하는 상보적인 항체를 더 포함하는 화합물 독성 평가용 진단 키트
|