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바실러스 발리스모르티스 (Bacillus vallismortis) BS07M 균주의 발효물을 탄소수 1 ~ 4의 알콜 및 에틸아세테이트로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 유기용매로 추출한 후에, 얻어진 추출물을 C18 역상 크로마토그래피 및 실리카겔 크로마토그래피하여 하기 화학식 1로 표시되는 마트로락틴 A, 하기 화학식 2로 표시되는 마크로락틴 B, 하기 화학식 3으로 표시되는 마크로락틴 S 및 하기 화학식 4로 표시되는 바실로마이신 D로 이루어진 군으로부터 선택된 활성화합물의 분리 정제방법
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제 1 항에 있어서
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제 1 항에 있어서,ⅰ) 바실러스 발리스모르티스 (Bacillus vallismortis) BS07M 균주를 TSA 배지에서 배양하여 균주 발효물을 얻는 단계;ⅱ) 균주 발효물을 탄소수 1 ~ 4의 알콜 및 에틸아세테이트로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 유기용매로 추출하여 추출물을 얻는 단계;ⅲ) 추출물을 C18 역상 크로마토그래피하여, 분획 A ~ G의 7개 분획으로 분리하는 단계; ⅳ) 상기 단계 ⅲ)에서 분리된 6번째 분획 (분획 F)을 실리카겔 크로마토그래피하여, 분획 F1 ~ F4의 4개 분획으로 분리하는 단계;v-2) 상기 단계 ⅳ)에서 분리된 2번째 분획 (분획 F2)을 실리카겔 크로마토그래피하여, 분획 F2A ~ FEI의 9개 분획으로 분리하는 단계; 및 ⅵ-1) 상기 단계 v-2)에서 분리된 5번째 분획 (분획 F2E)를 C18 역상 크로마토그래피하여, 상기 화학식 2로 표시되는 마크로락틴 B를 분리하는 단계;를 포함하는 활성화합물의 분리 정제방법
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제 1 항에 있어서
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제 1 항에 있어서,ⅰ) 바실러스 발리스모르티스 (Bacillus vallismortis) BS07M 균주를 TSA 배지에서 배양하여 균주 발효물을 얻는 단계;ⅱ) 균주 발효물을 탄소수 1 ~ 4의 알콜 및 에틸아세테이트로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 유기용매로 추출하여 추출물을 얻는 단계;ⅲ) 추출물을 C18 역상 크로마토그래피하여, 분획 A ~ G의 7개 분획으로 분리하는 단계; ⅳ) 상기 단계 ⅲ)에서 분리된 6번째 분획 (분획 F)을 실리카겔 크로마토그래피하여, 분획 F1 ~ F4의 4개 분획으로 분리하는 단계;v-2) 상기 단계 ⅳ)에서 분리된 2번째 분획 (분획 F2)을 실리카겔 크로마토그래피하여, 분획 F2A ~ F2I의 9개 분획으로 분리하는 단계; ⅵ-3) 상기 단계 v-2)에서 분리된 9번째 분획 (분획 F2I)을 실리카겔 크로마토그래피하여, 상기 화학식 4로 표시되는 바실로마이신 D를 분리하는 단계; 를 포함하는 활성화합물의 분리 정제방법
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제 1 항 내지 제 5 항 중에서 선택된 어느 한 항에 있어서,상기 균주 발효물은 TSA 배지에 도말하여 25 ~ 30℃ 온도로 2 ~ 7 일 동안 배양하여 얻은 것을 특징으로 하는 활성화합물의 분리 정제방법
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제 1 항 내지 제 5 항 중에서 선택된 어느 한 항에 있어서,상기 추출물은 균주 발효물을 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올, n-부탄올 및 이소부탄올 중에서 선택된 1종 이상의 유기용매로 추출하고, 감압 하에서 60 ~ 80℃의 온도에서 농축하여 얻은 것을 특징으로 하는 활성화합물의 분리 정제방법
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제 2 항 내지 제 5항 중에서 선택된 어느 한 항에 있어서,상기 단계 ⅲ)의 역상 크로마토그래피는 물 100 부피%에서부터 메탄올 100 부피%까지 메탄올의 양을 20 부피%씩 증가시킨 용출액으로 용출시켜 7개의 분획으로 분리하는 것을 특징으로 하는 활성화합물의 분리 정제방법
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제 2 항 내지 제 5 항 중에서 선택된 어느 한 항에 있어서,상기 단계 ⅳ)의 실리카겔 크로마토그래피는 에틸아세테이트 100 부피%에서부터 메탄올 100 부피%까지 메탄올의 양을 20 부피%씩 증가시킨 용출액으로 용출시켜 4개의 분획으로 분리하는 것을 특징으로 하는 활성화합물의 분리 정제방법
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제 2 항에 있어서,상기 단계 v-1)의 실리카겔 크로마토그래피는 노말헥산 100 부피%에서부터 에틸아세테이트 100 부피%까지 에틸아세테이트의 양을 증가시킨 용출액으로 용출시켜 마크로락틴 A를 분리하는 것을 특징으로 하는 활성화합물의 분리 정제방법
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제 3 항 내지 제 5 항 중에서 선택된 어느 한 항에 있어서,상기 단계 v-2)의 실리카겔 크로마토그래피는 디클로로메탄/메탄올/물을 92/7
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제 3 항에 있어서,상기 단계 ⅵ-1)의 역상 크로마토그래피는 메탄올/물을 50/50 부피%에서부터 100/0 부피%까지 메탄올의 양을 증가시킨 용출액으로 용출시켜 마크로락틴 B를 분리하는 것을 특징으로 하는 활성화합물의 분리 정제방법
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제 4 항에 있어서,상기 단계 ⅵ-2)의 역상 크로마토그래피는 메탄올/물을 50/50 부피%에서부터 100/0 부피%까지 메탄올의 양을 증가시킨 용출액으로 용출시켜 마크로락틴 S를 분리하는 것을 특징으로 하는 활성화합물의 분리 정제방법
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제 5 항에 있어서,상기 단계 ⅵ-3)의 실리카겔 크로마토그래피는 디클로로메탄/메탄올/물을 80/18/2 부피%에서부터 70/27/3 부피%까지 농도 구배를 둔 용출액으로 용출시켜 바실로마이신 D를 분리하는 것을 특징으로 하는 활성화합물의 분리 정제방법
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