| 1 |
1
Francisella novicida 유래 Cas9 단백질 및 가이드 RNA를 포함하는 리보핵산 단백질, 상기 리보핵산 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 또는 상기 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포를 포함하는, 외래 유전자 삽입용 조성물
|
| 2 |
2
제1항에 있어서, 상기 Francisella novicida 유래 Cas9 단백질은 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 것인, 외래 유전자 삽입용 조성물
|
| 3 |
3
제1항에 있어서, 상기 가이드 RNA는CRISPR RNA (crRNA) 및 trans-activating crRNA (tracrRNA)를 포함하는 이중 가이드 RNA (dual guide RNA), 또는 단일 가이드 RNA (sgRNA)인,외래 유전자 삽입용 조성물
|
| 4 |
4
제3항에 있어서, 상기 crRNA는 일반식 1로 표현되고, 상기 tracrRNA는 서열번호 4로 표현되는 것인, 외래 유전자 삽입용 조성물:5'-(Ncas9)m-GUUUCAGUUGCUGAAUUAUUUGGUAAAC-3' (일반식 1; 서열번호 2)상기 일반식 1에서, Ncas9는 유전자 표적 부위와 혼성화 가능한 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 타겟팅 서열 부위이고, m은 상기 타겟팅 서열 부위에 포함된 뉴클레오타이드 수를 나타내는 것으로 16 내지 24의 정수이며, 상기 m개의 뉴클레오타이드들은 각각 A, U, C 및 G로 이루어진 군에서 선택됨;5'-AUGCUCUGUAAUCAUUUAAAAGUAUUUUGAACGGACCUCUGUUUGACACGUCUGAAUAACUAAAAA-3' (서열번호 4)
|
| 5 |
5
제3항에 있어서, 상기 sgRNA는 일반식 2로 표현되는 것인, 외래 유전자 삽입용 조성물:5'-(Ncas9)m-GUUUCAGUUGCU-(링커)-AUGCUCUGUAAUCAUUUAAAAGUAUUUUGAACGGACCUCUGUUUGACACGUCUGAAUAACUAAAAA-3' (일반식 2; 서열번호 6)상기 일반식 2에서,Ncas9는 유전자 표적 부위와 혼성화 가능한 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 타겟팅 서열 부위이고, m은 상기 타겟팅 서열 부위에 포함된 뉴클레오타이드 수를 나타내는 것으로 16 내지 24의 정수이며,상기 링커는 3 내지 5개의 뉴클레오타이드를 포함하고, 상기 타겟팅 서열 부위 및 링커에 포함된 뉴클레오타이드들은 각각 A, U, C 및 G로 이루어진 군에서 선택된 것임
|
| 6 |
6
제4항에 있어서, 상기 일반식 1로 표현되는 crRNA는 5' 말단에 1 내지 3개의 구아닌(G)을 추가로 포함하는 것인, 외래 유전자 삽입용 조성물
|
| 7 |
7
제5항에 있어서, 상기 일반식 2로 표현되는 sgRNA는 5' 말단에 1 내지 3개의 구아닌(G)을 추가로 포함하는 것인, 외래 유전자 삽입용 조성물
|
| 8 |
8
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 핵 위치 신호 (nuclear localization signal, NLS) 또는 이의 암호화 핵산 분자를 추가로 포함하는, 외래 유전자 삽입용 조성물,
|
| 9 |
9
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 리보핵산 단백질은 생체 외에서 생성된 Francisella novicida 유래 Cas9 단백질 및 생체 외에서 생성된 가이드 RNA를 포함하는 것인, 외래 유전자 삽입용 조성물
|
| 10 |
10
삭제
|
| 11 |
11
삭제
|
| 12 |
12
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 진핵 세포 또는 진핵 유기체에 적용하기 위한 것인, 외래 유전자 삽입용 조성물
|
| 13 |
13
제12항에 있어서, 핵 위치 신호 (nuclear localization signal, NLS) 또는 이의 암호화 핵산 분자를 추가로 포함하는, 외래 유전자 삽입용 조성물
|
| 14 |
14
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 외래 유전자를 추가로 포함하는, 외래 유전자 삽입용 조성물
|
| 15 |
15
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 외래 유전자 삽입용 조성물 및 외래 유전자를 분리된 진핵 세포 또는 인간을 제외한 진핵 유기체에 도입하는 단계를 포함하는, 분리된 진핵 세포 또는 인간을 제외한 진핵 유기체에서의 외래 유전자 삽입 방법
|
| 16 |
16
제15항에 있어서, 상기 외래 유전자 삽입용 조성물은 생체 외에서 생성된 Francisella novicida 유래 Cas9 단백질 및 생체 외에서 생성된 가이드 RNA를 포함하는 리보핵산 단백질을 포함하는 것인, 외래 유전자 삽입 방법
|
| 17 |
17
제15항에 있어서, 상기 외래 유전자 삽입용 조성물은 핵 위치 신호 (nuclear localization signal, NLS) 또는 이의 암호화 핵산 분자를 추가로 포함하는 것인, 외래 유전자 삽입 방법
|
| 18 |
18
제15항에 있어서, 상기 도입하는 단계는 목적 부위 직접 주입, 전기천공, 또는 리포펙션에 의하여 수행되는 것인, 외래 유전자 삽입 방법
|
| 19 |
19
삭제
|
| 20 |
20
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 외래 유전자 삽입용 조성물 및 외래 유전자를 분리된 진핵 세포 또는 인간을 제외한 진핵 유기체에 도입하는 단계를 포함하는, 분리된 진핵 세포 또는 인간을 제외한 진핵 유기체의 형질전환체의 제조 방법
|
| 21 |
21
제20항에 있어서, 상기 외래 유전자 삽입용 조성물은 생체 외에서 생성된 Francisella novicida 유래 Cas9 단백질 및 생체 외에서 생성된 가이드 RNA를 포함하는 리보핵산 단백질을 포함하는 것인, 형질전환체의 제조 방법
|
| 22 |
22
제20항에 있어서, 상기 외래 유전자 삽입용 조성물은 핵 위치 신호 (nuclear localization signal, NLS) 또는 이의 암호화 핵산 분자를 추가로 포함하는 것인, 형질전환체의 제조 방법
|
| 23 |
23
제20항에 있어서, 상기 도입하는 단계는 목적 부위 직접 주입, 전기천공, 또는 리포펙션에 의하여 수행되는 것인, 형질전환체의 제조 방법
|
| 24 |
24
제20항의 형질전환체의 제조 방법에 의하여 제조된, 분리된 진핵 세포 또는 인간을 제외한 진핵 유기체의 형질전환체
|
| 25 |
25
제24항에 있어서, 상기 진핵 유기체는 인간을 제외한 포유 동물 또는 진핵 식물인, 형질전환체
|
