| 1 |
1
(a) 목적하는 수용성 단백질을 코딩하는 유전자의 3'말단에 mRNA 안정성을 증가시키는 UTR(untranslated region)이 결합된 폴리뉴클레오티드를 수득하는 단계; 및 (b) 상기 폴리뉴클레오티드를 발현시키는 단계를 포함하고, 상기 UTR의 염기서열 내에는 mRNA의 안정성을 저하시키는 RNase E 절단 부위를 포함하는 염기서열이 삽입되며, 상기 목적하는 수용성 단백질은 과발현 되었을 때, 과발현된 단백질이 세포내에서 상호 응집하여 봉입체를 형성함으로써, 상기 목적하는 단백질의 전체 발현수준 대비 수용성 발현비율이 50% 이하인 단백질인 것을 특징으로 하는, 목적하는 단백질의 전체 발현수준 대비 수용성 발현비율을 증가시키는 방법
|
| 2 |
2
(a) 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens) DSM50106 유래 또는 로도코커스 조스티(Rhodococcus jostii) RHA1 유래 BVMO(Bayer-Villiger monooxygenase)의 목적하는 수용성 단백질을 코딩하는 유전자의 3'말단에 mRNA 안정성을 증가시키는 UTR(untranslated region)이 결합된 폴리뉴클레오티드를 수득하는 단계; 및 (b) 상기 폴리뉴클레오티드를 발현시키는 단계를 포함하고, 상기 UTR의 염기서열 내에는 mRNA의 안정성을 저하시키는 RNase E 절단 부위를 12 내지 16 개 포함하는 hilD 염기서열 또는 절단부위를 13 내지 15개 포함하는 CAT 염기서열이 삽입되는 것을 특징으로 하는, 목적하는 단백질의 전체 발현수준 대비 수용성 발현비율을 증가시키는 방법
|
| 3 |
3
제1항에 있어서 상기 목적하는 수용성 단백질은 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens) DSM50106 유래 또는 로도코커스 조스티(Rhodococcus jostii) RHA1 유래 BVMO(Bayer-Villiger monooxygenase)인 것인, 방법
|
| 4 |
4
제3항에 있어서, 상기 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens) DSM50106 유래 BVMO는 BmoF1인 것인, 방법
|
| 5 |
5
제3항에 있어서, 상기 로도코커스 조스티(Rhodococcus jostii) RHA1 유래 BVMO는 MO16인 것인, 방법
|
| 6 |
6
제1항에 있어서, 상기 RNase E 절단 부위 수의 조정에 따라 목적하는 단백질의 전체 발현수준 대비 수용성 발현 비율이 변화되는 것을 특징으로 하는, 방법
|
| 7 |
7
제6항에 있어서, BmoF1 발현하는 경우, 상기 RNase E 절단 부위의 수가 증가할수록 목적하는 단백질의 전체 발현수준 대비 수용성 발현 비율을 증가시키는 것을 특징으로 하는, 방법
|
| 8 |
8
제1항에 있어서, 상기 UTR에 삽입된 RNase E 절단부위의 개수는 10 내지 100개인 것인, 방법
|
| 9 |
9
제1항에 있어서, 상기 RNase E 절단부위를 포함하는 염기서열은 hilD 염기서열, CAT 염기서열의 전체 또는 일부인 것인, 방법
|
| 10 |
10
제9항에 있어서, 상기 hilD 염기서열에 포함되는 RNase E 절단 부위의 수는 12 내지 16 개인 것인, 방법
|
| 11 |
11
제9항에 있어서, 상기 CAT 염기서열에 포함되는 RNase E 절단부위의 수는 13 내지 30개인 것인, 방법
|
| 12 |
12
목적하는 수용성 단백질을 코딩하는 유전자의 3'말단에 mRNA 안정성을 증가시키는 UTR(untranslated region)이 결합된 폴리뉴클레오티드를 발현시킬 수 있도록, 상기 유전자가 도입될 수 있는 다중 클로닝 부위(multicloning site) 및 상기 다중 클로닝부위의 3'말단에 결합되고, mRNA의 안정성을 저하시키는 RNase E 절단 부위를 포함하는 염기서열이 삽입된 UTR(untranslated region)을 포함하는, 목적하는 단백질의 전체 발현수준 대비 수용성 발현비율 증가용 발현벡터
|
| 13 |
13
제12항의 발현벡터가 도입되어, 목적하는 단백질의 전체 발현수준 대비 수용성 발현수준을 증가시킬 수 있는 형질전환체
|
