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각막 윤부 줄기 세포의 분리 방법 및 대량 배양 방법(Method for isolation and mass culture for limbal stem cells)

  • 기술번호 : KST2017012074
  • 담당센터 : 서울서부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-6124-6930
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 각막 윤부 줄기 세포의 순수 분리 방법 및 대량 배양 방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 각막 윤부 줄기 세포의 순수 분리 방법 및 대량 배양 방법은 각막 윤부 상피 세포로부터 분화 효율이 높은 각막 윤부 상피 줄기 세포를 효율적으로 순수 분리할 수 있을 뿐만 아니라, 줄기 세포의 줄기세포능을 유지한 채로 in vitro 상에서 저렴한 방법으로 용이하게 각막 윤부 상피 줄기 세포의 대량 배양을 가능하게 하므로 인공 각막의 제조, 각막 재생, 또는 각막 손상의 치료법 등 다양한 분야에 실질적으로 상업화되어 사용될 수 있을 것으로 기대된다.
Int. CL C12N 5/0797 (2016.01.28) C12N 5/00 (2016.01.28)
CPC C12N 5/0623(2013.01) C12N 5/0623(2013.01) C12N 5/0623(2013.01) C12N 5/0623(2013.01) C12N 5/0623(2013.01) C12N 5/0623(2013.01) C12N 5/0623(2013.01) C12N 5/0623(2013.01)
출원번호/일자 1020160003900 (2016.01.12)
출원인 연세대학교 산학협력단
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2017-0084631 (2017.07.20) 문서열기
공고번호/일자 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2016.01.12)
심사청구항수 7

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 연세대학교 산학협력단 대한민국 서울특별시 서대문구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 맹용선 대한민국 서울특별시 은평구
2 김응권 대한민국 서울특별시 서대문구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 특허법인 정안 대한민국 서울특별시 강남구 선릉로 *** ***층(논현동,썬라이더빌딩)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 연세대학교 산학협력단 대한민국 서울특별시 서대문구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2016.01.12 수리 (Accepted) 1-1-2016-0034496-18
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2016.05.11 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2016.07.11 수리 (Accepted) 9-1-2016-0030438-30
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2017.05.19 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2017-0349082-00
5 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2017.07.07 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2017-0651925-99
6 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2017.07.07 수리 (Accepted) 1-1-2017-0651924-43
7 등록결정서
Decision to grant		 2017.11.27 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2017-0824921-66
8 [대리인선임]대리인(대표자)에 관한 신고서
[Appointment of Agent] Report on Agent (Representative)		 2018.03.01 불수리 (Non-acceptance) 1-1-2018-0211548-15
9 서류반려이유통지서
Notice of Reason for Return of Document		 2018.03.07 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2018-0035887-97
10 서류반려통지서
Notice for Return of Document		 2018.04.12 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2018-0056880-15
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번호 청구항
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a) 각공막 조직 유래 각막 윤부 상피 세포를 세포외기질 단백질(extracellular matrix protein)이 코팅되어 있는 플레이트에서 배양하는 단계;b) 상기 배양된 각막 윤부 상피 세포 중 과다 증식하는 각막 윤부 상피 줄기 세포(limbal epithelial stem cells)를 분리하는 단계;c) 상기 각막 윤부 상피 줄기 세포 중 각막 윤부 상피 줄기 세포 마커를 이용하여 분화 효율이 높은 줄기 세포를 순수 분리하는 단계; 및d) 상기 순수 분리된 각막 윤부 상피 줄기 세포를 대량 배양하는 단계를 포함하는, 생체외(in vitro) 각막 윤부 상피 줄기 세포의 대량 배양 방법으로서,상기 a) 단계는 CnT20 배지(Corneal Epithelium Medium)를 이용하여 1차 배양한 후에 우태아혈청(fetal bovine serum)이 첨가되어 있는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)을 이용하여 2차로 배양하는 것을 특징으로 하며,상기 a) 단계의 세포외기질 단백질은 파이브로넥틴(fibronectin), 라미닌(laminin), 콜라겐 IV(collagen IV), 및 엔탁틴(entactin)을 포함하는 것을 특징으로 하며,상기 c) 단계의 줄기 세포 마커는 ABCG2(ATP-binding cassette subfamily G member 2) 및 ABCB5(ATP-binding cassette sub-family B member 5)를 이용하는 것을 특징으로 하며,상기 d) 단계는 우태아혈청(fetal bovine serum)이 첨가되어 있는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)을 이용하여 배양하는 것을 특징으로 하는, 방법
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제 8 항에 있어서,상기 세포외기질 단백질은 파이브로넥틴(fibronectin) 및 매트리겔TM(MatrigelTM)의 조합인 것을 특징으로 하는, 방법
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제 8 항에 있어서,상기 d) 단계는 세포외기질 단백질(extracellular matrix protein)이 코팅되어 있는 플레이트에서 배양하는 것을 특징으로 하는, 방법
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a) 각공막 조직 유래 각막 윤부 상피 세포를 세포외기질 단백질(extracellular matrix protein)이 코팅되어 있는 플레이트에서 배양하는 단계;b) 상기 배양된 각막 윤부 상피 세포 중 과다 증식하는 각막 윤부 상피 줄기 세포(limbal epithelial stem cells)를 분리하는 단계;c) 상기 각막 윤부 상피 줄기 세포 중 각막 윤부 상피 줄기 세포 마커를 이용하여 분화 효율이 높은 줄기 세포를 순수 분리하는 단계;d) 상기 순수 분리된 각막 윤부 상피 줄기 세포를 대량 배양하는 단계; 및e) 상기 각막 윤부 상피 줄기 세포를 분화(differentiation)시키는 단계를 포함하는, 생체외(in vitro) 인공 각막의 제조 방법으로서,상기 a) 단계는 CnT20 배지(Corneal Epithelium Medium)를 이용하여 1차 배양한 후에 우태아혈청(fetal bovine serum)이 첨가되어 있는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)을 이용하여 2차로 배양하는 것을 특징으로 하며,상기 a) 단계의 세포외기질 단백질은 파이브로넥틴(fibronectin), 라미닌(laminin), 콜라겐 IV(collagen IV), 및 엔탁틴(entactin)을 포함하는 것을 특징으로 하며,상기 c) 단계의 줄기 세포 마커는 ABCG2(ATP-binding cassette subfamily G member 2) 및 ABCB5(ATP-binding cassette sub-family B member 5)를 이용하는 것을 특징으로 하며,상기 d) 단계는 우태아혈청(fetal bovine serum)이 첨가되어 있는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)을 이용하여 배양하는 것을 특징으로 하며,상기 e) 단계는 CnT20 배지 또는 CnT30 배지를 이용하여 배양하는 것을 특징으로 하는, 방법
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제 16 항에 있어서,상기 세포외기질 단백질은 파이브로넥틴(fibronectin) 및 매트리겔TM(MatrigelTM)의 조합인 것을 특징으로 하는, 방법
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제 16 항에 있어서,상기 d) 단계는 세포외기질 단백질(extracellular matrix protein)이 코팅되어 있는 플레이트에서 배양하는 것을 특징으로 하는, 방법
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제 16 항에 있어서,상기 e) 단계는 각막 윤부 상피 줄기 세포를 양막(amniotic membrane) 위에서 배양하는 것을 특징으로 하는, 방법
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1 교육부 연세대학교 산학협력단 일반연구자 지원사업(기본연구) TGFBIp 단백질의 발현 및 기능억제를 통한 림프관신생 및림프관을 통한 암전이 억제